증량제의 특성 중 Sumithion 분제의 주성분 분해에 영향을 미치는 요인을 밝힐 목적으로 시험하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 가. 증량제의 특성 중 수분함량, 흡습성, C.E.C. 활성천, 염기총량, 표면적 등이 Sumithion 분제의 주성분 분해에 영향을 미치는 요인이 됨을 알았고, 나. 증량제에 의한 Sumithion의 분해산물은 Dimethyl phosphorothionate와 3-methyl-4-nirophenol 및 이의 유연화함은, n-hexane, ethyl ether 불용, methyl alcohol, ethyl, alcohol가용의 화함물이 있음을 알았다. 다. 증량제의 종류별로는 벤토나이트, 규조로, 카올린, 활석의 순으로 분해율이 높았다. 라. 그리고 증랑제의 Sumithion 분제 주성분 변화에 영향을 미치는 특성 중 수분과 염기가 가장 대표적인 주성분 분해 요인으로 보인다.
직경이 0.102 m이고 높이가 2.5 m인 삼상 swirling(나선) 흐름 유동층에서 열전달 특성을 고찰하였다. 기체유속($U_G$), 액체유속($U_L$), 유동 입자의 크기($d_p$), 그리고 연속상인 액체의 나선 유도 흐름 액체량의 비($R_S$)가 유동층 내부 열원과 유동층간의 총괄 열전달 계수에 미치는 영향을 검토하였다. 유동층 내부 열원과 유동층간의 열전달 특성은 열원 표면과 유동층간의 온도차 요동 자료의 위상공간 투영과 Kolmogorov 엔트로피 해석으로 고찰할 수 있었으며, 나선 유도 흐름 액체량의 비($R_S$)가 0.1에서 0.4까지 증가할수록 온도차 요동 자료의 위상 공간 투영은 점점 안정되고 규칙성이 증대되는 상태를 나타내고, Kolmogorov 엔트로피 값은 감소하는 경향을 나타내었다. 열원 표면과 유동층간의 온도차 요동 자료의 Kolmogorov 엔트로피 값은 나선 유도 흐름 액체량이 증가함에 따라 최소값을 나타내었다. 열원과 유동층간의 총괄 열전달 계수는 기체 유속 및 유도입자의 크기가 증가함에 따라서 증가하였으나, 액체유속, 층공극률, 나선 유도 흐름 액체량의 비가 증가함에 따라서 최대값을 나타내었다. 내부 열원과 유동층간의 총괄 열전달 계수가 최대값을 나타낼 때의 액체의 유속 조건에서 온도차 요동자료의 Kolmogorov 엔트로피의 값도 최대값을 나타내었다. 삼상 나선흐름 유동층에서 열전달 계수와 Kolmogorov 엔트로피를 실험 변수 및 무차원군의 상관식으로 나타낼 수 있었다.
Astaxanthin의 산업적인 생합성을 위하여 wild type인 P.rhodozyma B30 효모를 UV, NTG 등으로 돌연변이 처리하여 0.5 mM $\beta$-ionone이 포함된 선별배지에서 carotenoids 합성능력이 우수한 변이주 B76을 분리하였다. 변이주 B76은 wild type과 비교시 균체 생성능력은 큰 차이가 없었으나 carot-enoids 합성능력은 40% 이상, astaxanthin 합성능력은 50% 이상 향상되었다. 선별된 변이주 B76의 최적 발효배지 및 배양 조건 선정을 위한 플라스크 배양실험 결과 최적 탄소원으로 glucoserk, 최적 질소원은 CSL : (NH4)2SO4 : yeast extract = 6 : 2 : 0.1이 혼합된 배지가 선정되었다. C/N ratio는 1.7~2.0 범위에서 유사한 발효성능을 보았으며(산업적인 생산성을 고려하여 2.0을 최적으로 선정), 배양온도는 $22^{\circ}C$가 최적이었다. 초기 pH는 가장 높은 세포농도를 나타낸 6.0을 최적으로 하였다. 종균 접종량은 전반적으로 균체량과 carotenoids 합성능력에는 영향을 미치지 않았으며 산업적인 생산성을 고려하여 3%(v/v) 수준이 적절한 것으로 사료되었다. 이와 같이 플라스크 배양을 통해 확립된 최적 배지 및 배양조건을 기초로 5 L 발효조를 이용한 회분식 배양실험을 통해 탄소원의 최적 농도는 18%임을 확인하였다. 특히 B76 변이주는 22%(w/v)까지의 고농도 glucose 존재하에서는 catabolite rep-ression을 받지 않는 것으로 나타났다. 용존산소가 부족한 경우에는 균체성장 및 색소합성이 저해되었고, 따라서 통기속도 1.0 v/v/m, 교반속도 400 rpm 이상을 유지함이 필요하였다. B76 세포는 배양 3일차에 exponential phase에 진입한 후(최대 Yx/s = 0.37) 배양 4일차에 stationary phase에 도달하였다. Carotenoids 및 astaxanthin 생합성은 세포성장이 정지한 후인 배양 5일차에 급격하게 증가하는(최대 Yp/s = 1.08) 전형적인 mixed-growth-associated 형태를 나타냈다. 이는 exp-onential phase 동안 급격한 균체성장으로 용존산소가 부족하여 NADH balance에 의해 astaxanthin 생합성 경로 중 탈수소화 단계가 저해되기 때문으로 사료되었다. 최종 세포농도는 43.3 g/L, 단위부피당 carotenoids 함량은 149.4 mg/L, astaxanthin 함량은 110.6 mg/L로서 산업적인 생산성이 있는 것으로 나타났다. 이번 연구를 통하여 개발된 변이주 B76 및 이의 대량 발효를 위한 최종조건의 정립은 향후 astaxanthin의 산업적 생산공정에 필요한 기초자료로 이용될 것으로 기대된다.
Objective: This study investigated the effects of oral administration of rumen-protected L-tryptophan (RPL-T) on duodenal starch digestion and gastrointestinal hormones (GIH) secretions using Hanwoo beef steers as the animal models. Methods: Four steers (423±24 kg) fitted with ruminal and duodenal cannulas were employed in a crossover design replicated twice. Treatments were control (basal diet) and RPL-T (basal diet+191.1 mg/kg body weight [BW]) group. Blood and duodenal samples were collected to measure serum GIH levels and pancreatic α-amylase activity at day 0, 1, 3, and 5 (-30, 30, 90, 150, and 210 min) of the study. Samples from each segment of the gastrointestinal tract were collected via ruminal and duodenal cannulas and were used to determine soluble protein and the starch digestion rate at days 6 (-30, 180, 360, and 540 min) and 8 (-30, 90, 270, and 450 min) of the experiment. Results: No significant difference in ruminal pH, NH3-N, and total volatile fatty acid including the levels of acetate, propionate, butyrate, isobutyrate, valerate, isovalerate, and the acetate-to-propionate ratio was observed between groups (p>0.05). Crude protein uptake was higher and feces starch content was lower in RPL-T group than the control group (p<0.05). The D-glucose contents of feces in RPL-T group decreased at day 5 compared to those in the control group (p<0.05), however, no change was found at day 0, 1, or 3 compared to the control group (p>0.05). Serum cholecystokinin (CCK), melatonin, duodenal pancreatic α-amylase activity, and starch digestion were significantly higher in RPL-T group than the control group (p<0.05). Conclusion: Taken together, oral administration of RPL-T at the rate of 191.1 mg/kg BW consistently increased CCK concentration, pancreatic α-amylase activity in duodenal fluids, and starch digestion rate in the small intestine and thus found to be beneficial.
Nafamostat mesilate (NM) is a serine protease inhibitor with anticoagulant and anti-inflammatory effects. NM has been used in Asia for anticoagulation during extracorporeal circulation in patients undergoing continuous renal replacement therapy and extra corporeal membrane oxygenation. Oxidative stress is an independent risk factor for atherosclerotic vascular disease and is associated with vascular endothelial function. We investigated whether NM could inhibit endothelial dysfunction induced by tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$ ). Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were treated with TNF-${\alpha}$ for 24 h. The effects of NM on monocyte adhesion, vascular cell adhesion molecule-1 (VCAM-1) and intracellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) protein expression, p38 mitogenactivated protein kinase (MAPK) activation, and intracellular superoxide production were then examined. NM ($0.01{\sim}100{\mu}g/mL$) did not affect HUVEC viability; however, it inhibited the increases in reactive oxygen species (ROS) production and p66shc expression elicited by TNF-${\alpha}$ (3 ng/mL), and it dose dependently prevented the TNF-${\alpha}$ -induced upregulation of endothelial VCAM-1 and ICAM-1. In addition, it mitigated TNF-${\alpha}$ -induced p38 MAPK phosphorylation and the adhesion of U937 monocytes. These data suggest that NM mitigates TNF-${\alpha}$ -induced monocyte adhesion and the expression of endothelial cell adhesion molecules, and that the anti-adhesive effect of NM is mediated through the inhibition of p66shc, ROS production, and p38 MAPK activation.
항생제인 Spiramycin과 Virginiamycin의 성장촉진 효과를 측정하기 위하여 총 360수의 육용계 (broiler chicken) 초생추를 battery에 수용하여 각각 6주씩 2차에 걸친 사양시험과 4일간의 대사시험을 실시하였다. 1차 실험에서는 고단백(21.9%), 고열량( 3159kca1/kg) 사료를 사용하였으며 180수의 숫병아리를 10수씩 무첨가구 Spiramycin(5ppm)구 및 Virginiamycin(5ppm)구에 각각 6반복씩 완전임의 배치하였다. 2차실험에서는 중단백( 19,95%), 중열량(2931 kca1/kg) 사료를 사용하고 90수의 숫병아리와 90수의 암병아리를 10수씩 분리하여 처리당 암ㆍ수 각각 3 반복씩 배치하였다. 사양시험을 통하여 얻어진 증체량, 사료섭취량, 사료효율 및 폐사율은 처리구간에 통계적 유의차가 없었으나 1, 2차 실험 공히 항생제 B구가 무처리구(1차실험) 또는 항생제 A구(2차실험) 보다 약 3% 높은 증체량을 나타내었다. 사료효율에 있어서도 항생제 B구가 가장 좋은 경향을 보여주었다. 2차실험의 결과에 의하면 증체량, 사료섭취량 및 사료효율에 있어서 암수간에는 유의한(p〈0.01) 차이가 있었다. 대사시험결과 항생제 B구가 타처리구보다 영양소 이용률이 높은 경향을 나타내었으며 특히 1차 실험에 있어서 조지방의 이용률은 타처리에 비해 유의하게 (p〈0.01) 높았고 조섬유이용률도 항생제 A구에 비해 유의하게 (p〈0.05) 높았다. 한편 대사체중당 소장의 무게와 길이는 항생제 B구가 타처리구에 비해 무겁고 긴 경향을 보여주었다.
We have previously shown that chick muscle extracts contained at least 10 different ubiquitin C-terminal hydrolases (UCHs). In the present studies, one of the enzymes, called UCH-9, was purified by conventional chromatographic procedures using $^{125}l$-labeled ubiquitin-${\alpha}$NH-MHISPPEPESEEEEE HYC (Ub-PESTc) as a substrate. The purified enzyme behaved as a 27-kDa protein under both denaturing and nondenaturing conditions, suggesting that it consists of a single polypeptide chain. It was maximally active at pHs between 7 and 8.5, but showed little or no activity at pH below 6 and above 10. Lice other UCHs, its activity was strongly inhibited by sulfhydryl blocking reagents, such as iodoacetamide, and by Ub-aldehyde. In addition to Ub-PESTc, UCH-9 hydrolyzed Ub-aNH-protein extensions, including Ub-${\alpha}NH$-carboxyl extension protein of 80 amino acids and Ubo-${\alpha}NH$-dihydrofolate reductase. However, this enzyme was not capable of generating free Ub from mono-Ub-${\varepsilon}NH$-protein conjugates and from branched poly-Ub chains that are ligated to proteins through ${\varepsilon}NH$-isopeptide bonds. This enzyme neither could hydrolyze poly-His-tagged di-Ub. These results suggest that UCH-9 may play an important role in production of free Ub and ribosomal proteins from their conjugates.
Background: The heat shock proteins (HSPs) play an important role in cellular protection mechanisms against physical or chemical stresses. In this study scFv antibodies specific for human HSP70.1 were isolated from a semi-synthetic human scFv library with the ultimate goal of developing anti-HSP70.1 intracellular antibody (intrabody) that may offer an attractive alternative to gene targeting to study the function of the protein in cells. Methods: A semi-synthetic human scFv display library ($5{\times}10^{8}$ size) was constructed using pCANTAB-5E vector and the selection of the library against bacterially expressed recombinant human HSP70.1 was attempted by panning. Results: Three positive clones specific for recombinant HSP70.1 were identified. All three clones used $V_{H}$ subgroup III. On the other hand, $V_{L}$ of two clones belonged to the kappa light chain subgroup I, but the other utilized $V_{k}$ subgroup IV Interestingly, these scFv molecules specifically reacted to the recombinant HSP70.1, yet failed to recognize native HSP70 induced in U937 human monocytic cells by heat treatment. Conclusion: Our results indicated that affinity selection of an scFv phage display library using recombinant antigens produced in E. coli might not guarantee the isolation of scFv antibody molecules specific for a native form of the antigen. Therefore, the source of target antigens needs to be chosen carefully in order to isolate biofunctional antibody molecules.
Four types of serum supplements viz. estrus cow serum (ECS), estrus buffalo serum (EBS), pro-estrus buffalo serum (PrBS) and post-estrus buffalo serum (PtBS), added to TCM-199, were evaluated for in vitro maturation and fertilization of buffalo follicular oocytes. The oocytes were recovered from buffalo ovaries after slaughter, using either aspiration or scoring (multiple incisions) method. The recovered oocytes were categorized as A, B and C based on their cumulus investment and ooplasm homogeneity and cultured in four media. The in vitro matured oocytes were inseminated with $1{\times}10^6$ spermatozoa washed in 2.9% sodium citrate solution. The scoring method yielded greater number of morphologically good oocytes than the aspiration method (3.85 vs 1.76 per ovary, p < 0.01). The maturation rates of three categories of oocytes did not differ from one another. The maturation rates of 80.00, 82.08, 78.77 and 66.23%, while the fertilization rates of 54.54, 55.38, 52.80 and 36.76% were recorded for media containing ECS, EBS, PrBS, and PtBS, respectively. The medium containing PtBS gave lower maturation, as well as fertilization, rates than the other three media (p < 0.05). Thus, the scoring method was better than the aspiration method for the recovery of follicular oocytes. The oocytes categorized A, B and C had similar maturation capabilities. The TCM-199 containing buffalo/cow serum collected at pro-estrus or estrus appeared better for in vitro maturation and fertilization of buffalo follicular oocytes than that containing serum collected at post estrus.
The glucagon-like peptide 2 (GLP-2) that is expressed in intestine epithelial cells of mammals, is important for intestinal barrier function and regulation of tight junction (TJ) proteins. However, there is little known about the intracellular mechanisms of GLP-2 in the regulation of TJ proteins in piglets' intestinal epithelial cells. The purpose of this study is to test the hypothesis that GLP-2 regulates the expressions of TJ proteins in the mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway in piglets' intestinal epithelial cells. The jejunal tissues were cultured in a Dulbecco's modified Eagle's medium/high glucose medium containing supplemental 0 to 100 nmol/L GLP-2. At 72 h after the treatment with the appropriate concentrations of GLP-2, the mRNA and protein expressions of zonula occludens-1 (ZO-1), occludin and claudin-1 were increased (p<0.05). U0126, an MAPK kinase inhibitor, prevented the mRNA and protein expressions of ZO-1, occludin, claudin-1 increase induced by GLP-2 (p<0.05). In conclusion, these results indicated that GLP-2 could improve the expression of TJ proteins in weaned pigs' jejunal epithelium, and the underlying mechanism may due to the MAPK signaling pathway.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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