• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.447-453
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• 1989

항생물질 내성유전자를 유전자 조작기법으로 재조합시켜 만든 세균에서 그 유전자들이 전이되는 특성을 하폐수의 자연환경에서 연구하기 위하여, 자연계로부터 분리한 Gram 음성세균 중에서 kanamycin (Km), chloramphenicol (Cm), streptomycin (Sm), sulfadiazine(Su)에 내성을 띄는 균주로 DK1을 선발하였다. DK1 균주는 4개의 plasmid를 가지고 있으나 그 중 크기가 약 68kb인 pDK101 plasmid에 Km$^{${\gamma}$}$ Cm$^{${\gamma}$}$ 유전자를 가지고 있었다. 이 pDK101 plasmid에는 EcoRI site가 16개, PstI site가 32개, SalI site가 6개씩 있었다. pDK101 plasmid 와 vector로 사용한 pKT230을 E. coli으로 처리하여 얻은 절편들로부터 Km$^{${\gamma}$}$Cm$^{${\gamma}$}$ 유전자를 가지는 pDT309와 pDTS29 등의 chimeric piasmid를 제조하였다. 이들을 다시 E. coli C600과 E. coli HB101 에 형질전환 시킴으로써, DKC601, DKC602, DKH 102 그리고 DKH103 등의 재조합 균주를 얻었다. 이들 재조합 균주에서는 모두 Km$^{${\gamma}$}$Cm$^{${\gamma}$}$유전자가 잘 발현되었으며, 그 중 DKC601과 DKH103에서는 각각 pDT529와 pDT309의 chimeric plasmid가 포함되어 있는 것이 전기영동 방법으로 명확히 확인되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권5호
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• pp.871-874
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• 2010

Many studies require expression analysis of the same gene/promoter across a range of bacterial genera. However, there is currently a lack of availability of reporters based on the broad-host-range IncQ replicon, which is compatible with a popular improved IncP transfer system that is self-transfer defective. We report IncQ lacZ reporter plasmids with features including (1) compatibility with IncP, IncW, and pBHR/pBBR replicons, (2) a variety of antibiotic markers (Sp-r, Sm-r, Km-r, Cm-r), (3) convenient mobilization via a novel self-transfer-defective IncP conjugation system, and (4) GenBank DNA sequences. Utility is demonstrated using three different promoters in different Gram-negative genera.

• 미생물학회지
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• 제20권1호
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• pp.11-20
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• 1982

A study was undertaken to examine the effect of curing agents on the stability, curing and segregation of R plasmid pSL100. And also the stability, transfer frequency, and recombination of its segregants obtained from curing agent treatment were studied. Ethidium bromide, acridine orange, and mitomycin-C were used as curing agent. The results obtained were as follows ; 1. The curing agent ethidium bromide, acridine orange, and mitomycin-C were not effective for curing the multiple antibiotic resistant determinant of pSL100 in Salmonella typhimurium and Escherichia coli. However, they induced plasmid segregation with high frequency in S.typhimuruim LT-2strains. TcApSmCm, TcSmCmKm, TcApCm, TcAp, TcKm, Tc segregants were obtained. 2. The resistant markers of the segregents were transferred to S.typhimurium LT-2 strains with high frequencies whereas they were transferred to E.coli K-12 only with low frequencies. 3. The transconjugants obtained from conjugation between two different S.typhimurium segregants were similar to the phenotype of the original R factor pSL100 and the resistant markers were transferred to the S.typhimurium LT-2 or E.coli strain with equal frequencies, indicating that they are recombinants. 4. The transconjugants obtained from conjugation between pSL100 segrgants and pKM101, or pBR322 possessed the resistant markers of the two parental plasmids and they were transferred to both S.typhimurium and E.coli K-12 strains with the same frequencies and maintained stably, suggesting that they are also recombinants. 5. The recombinant pSL100 could be also obtained in rec A-strains of E.coli, suggesting that the gene function of rec A is required for the recombination of pSL100 segregants in E.coli.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.454-460
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• 1989

자연계로부터 분리한 Gram 음성세균과 함께 유전자 조작기법으로 kanamycin (Km)과 chloramphenicol (Cm)에 대한 내성유전자를 재조합한 균주들에서 그 내성유전자의 전이율을 conjugation 방법으로 몇 가지 상이한 수질환경에서 비교 연구하였다. 자연계로부터 분리한 DK1 균주와 재조합한 DKC601이나 DKH103을 donor로 하고 recipient 및 기타 조건을 같게 했을 때, donor가 가지고 있던 Km$^{${\gamma}$}$ 유전자의 전이율은 자연환경의 하천수에서 보다 실험실 환경의 멸균한 하폐수에서 더 높았고, 실험실 환경에서는 멸균한 하폐수보다 Luria-Bertani (LB) 액체배지에서 휠씬 높았다. 온도를 2$0^{\circ}C$와 3$0^{\circ}C$로 했을 때에는 어느 종류의 균주를 donor로 사용하더라도 전이율에는 큰 차이가 없었으나, 전이가 일어나는 시간은 3$0^{\circ}C$에서 조금 빨랐다. 하천수의 자연환경에서나 실험실이 멸균하폐수에서는 항생제내성유전자의 전이율은 두 가지 종류의 균주 사이에 차이가 거의 없거나 재조합된 균주에서 $10^{-1}$ 정도로 낮다. 그러나 실험실 환경의 LB액체배지에서는 전이가 일어나는데 필요한 반응시간이 재조합된 균주에서 더 길 뿐만 아니라, 전이율에 있어서도 $10^{-3}$ - $10^{-4}$ 정도 낮았다. 그리고 MT1 균주를 recipient로 하고 재조합된 균주인 DKC601과 DKH103을 donor 로 했을 경우에는 donor에 따라 전이율의 차이가 없었으나, DKC601을 donor로 하고 MT1과 MT2을 각각 recipient로 했을 경우에는 recipient에 따라 전이율이 $10^{1}$ - $10^{2}$ 정도 차이가 났다.

• 대한의생명과학회지
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• 제5권1호
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• pp.17-26
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• 1999

Mar (multiple-antibiotic-resistance) 대장균의 marRAB 돌연변이가 그람음성 세균들 사이로 전파 될수 있는지를 알아보기 위해서, 염색체 위의 marRAB 돌연변이를 $\lambda$placMu9 (Km$^{r}$)를 이용하여 대장균의 다른 균주내의 pUC19 (Lac$^{+}$, Ap$^{r}$)의 클로닝 사이트, S. typhimurium 및 P. aeruginosa의 염색체 위로 각각 전달시킨 후, Mar phenotype, Km$^{r}$, Lac$^{-}$, 혹은 Ap$^{r}$ 균주를 선택한 다음, salicylate (SAL)의 유도 (induction) 유무에 따른 항생제 내성검사를 실시하였다. pUC19의 보유 유무에 관계없이 대조군인 야생형 대장균 JM109, NM522에 비해서, pUC19::marRAB 돌연변이를 가진 JM109 혹은 NM522의 대부분 균주들은 항생제 내성 수준들이 훨씬 더 높았으며, Mar표현형의 유도도 SAL에 의해서 훨씬 더 높게 나타났다. 하지만 일부 소수의 항생제에 대해서는 예외적으로 내성 수준이 더 낮게 나타났는데, 야생형 JM109 균주에서는 chloramphenicol (Cm)과 tetracycline (Tc)이 , pUC19::marRAB 돌연변이를 가진 NM522 균주 에서는 Tc와 ciprofloxacin (Cp)에 대한 내성 수준이 각각 더 낮게 나타났다. S. typhimurium 및 P. aeruginosa에 대한 같은 실험의 결과도 야생형 대장균의 경우와 거의 대부분 일치하였다. 형질전환 (transformation)과 형질도입 (transduction)의 방법을 주로 사용한 이 실험의 결과는, marRAB 돌연변이가 그람음성 세균들 사이로 전파될 수 있음을 간접적으로 암시한다.