Erythritol 생합성에 중요한 효소인 erythritol 4-phosphate dehydrogenase를 Penicillium sp. KJ81로부터 분리 정제하여 효소의 특성을 조사한 결과 다음과 같은 결론을 얻었다. Erythritol 4-phosphate dehydrogenase의 최적 생산 조건은 30% sucrose, 0.5% yeast extract, 0.5% $(NH_4)_2SO_4$, 0.1% $KH_2PO_4$ 그리고 0.05% $MgCl_2$ (pH 7.0) 배지에서 1 vvm aeration, 교반속도 200 rpm, $37^{\circ}C$로 Penicillium sp. KJ81을 배양한 결과 8일 배양 시 최대의 생산량을 보였다. Penicillium sp. KJ81주의 균체 추출액으로부터 ultrafiltration, 조제용 disc gel electrophoresis를 이용하여 erythritol 4-phosphate dehydrogenase를 분리 정제하였다. 최종 수율은 33%이었으며 정제배수는 39.5였다. 정제된 효소의 pI값은 4.6으로, erythrose 4-phosphate에 특이적으로 반응하였으며, Km값은 1.07mM이었다. Native-PAGE에서 single band를 보인 효소의 분자량은 약 1,500 kDa이었다. 효소활성의 최적 pH와 온도는 pH 7.0, $30^{\circ}C$였으며, 효소는 pH 4.0~9.0, 그리고 $30^{\circ}C$까지 안정하였다. 다양한 금속이온 중 $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$에 의하여 효소의 활성이 저해되었다. 다양한 아미노산 반응 잔기 변형시약 중 iodine과 NBS에 의해 효소의 활성이 저해되는 것을 확인하였다.
For polyhydroxyalkanoic acid (PHA) production, several microorganisms were isolated from sewage sludge. One of them, GB-77 strain, was chosen from its PHB/HV copolymer production on only fructose without cosubstrate. The isolated strain GB-77 was identified as the genus Alcaligenes. Optimal temperature and pH for cell growth were 36C and 6.8. Optimal medium composition was 10 g/l of fructose and 5 g/l of polypeptone, 1 $\times$ 10$^{-2}$M Na$^{2}$HP0$^{4}$, 1.3 $\times$ 10$^{-2}$M KH$^{2}$PO$^{4}$. To investigate the optimal condition for polyhydroxyalkanoic acid production two-stage culture technique was used; first stage for cell growth and second stage for PHA production on unbalanced growth conditions. Optimal conditions for high PHA production were C/N ratio 50, temperature 36$\circ$C and pH 6.8. To overcome fructose inhibition on cell growth, intermittent feeding fed-batch culture technique was used. Total cell concentration was 17.4 g/l with 9.1 g/l of PHA. The purified PHA was identified PHB/HV copolymer by NMR analysis.
For the improvement of productivity of Pleurotus ostreatus, the production of liquid spawn was studied. The highest liquid spawn production was obtained after shaking culture for 4 days in the culture medium containing 5%(W/V) wheat flour, 0.2%(W/V) yeast extract, 0.1%(W/V)$KNO_3$ 0.05% (W/V) $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.05%(W/V) $KH_2PO_4$. The optimum pH and temperature was 7.0 ana $30^{\circ}C$. The period required to complete the mycelial growth after spawning were 28, 22, 10 and 9 days, respectively, when the 2%(V/V) of solid spawn and 2%(V/V), 5% (V/V) and 10%(V/V) of liquid spawn were inoculated. The days required from spawning to fruiting bodies were 38, 34, 28 and 27 days.
The strain producing bioemulsifier was isolated from soil samples. The isolated strain was identified as the genus Acinetobacter through its morphological, cultural and physiological characteristics. The highest emulsification activity and stability by Acinetobacter sp. BE-254 was observed after 5 days of cultivation in the culture medium containing n-hexadecane 4%, NaNO$_{3}$ 0.2%, KH$_{2}$PO$_{4}$ 0.01%, MgSO$_{4}$-7H$_{2}$O 0.01%, CaCl$_{2}$ 0.01%, and yeast extract 0.01%. The optimum pH and temperature for bioemulsifier production were pH 7.0 and 30$\circ$C, respectively. Furthermore the most of bioemulsifier was produced during the exponential growth phase, and this suggested that the bioemulsifier production was growth-associated. The bioemulsifier showed good emulsification activity on various emulsifying substrates such as hydrocarbons, edible oils, and petroleum fractions.
A bioflocculant producing bacterium for wastewater treatment was isolated and identified as Lactobacillus jensenii. The bioflocculant was supposed as a polysaccharide. Lactobacillus jensenii YW-33 produced the flocculant with highest activity in the medium composed of 2% sucrose, 0.05% tryptone, 0.5% yeast extract, 0.01% K$_{2}$HPO$_{4}$, 0.01% KH$_{2}$PO$_{4}$, 0.01% NaCl, 0.005% MnSO$_{4}$, 5H$_{2}$O and 0.2% Tween 80. The optimal culture pH and temperature were 7.0 and 25$\circ$C, respectively. In the time course of production with jar fermentor, the productivity of the flocculant was increased in proportion to the cell growth and the cultivation time for maximum production was 24 hrs, showing flocculating activity of 1,130 units per ml.
본 실험은 노루궁뎅이버섯(Hericium erinaceus isolate KU-1)의 균사생장에 관한 영양원 실험으로 대량의 균사체 수확을 위한 배양기 조성을 밝히기 위한 기초를 확립하고자 실시하였다. 최적온도는 $25^{\circ}C$이며 pH4에서 160.5 mg으로 가장 건물중이 높았고 탄소원 중 glucose, sucrose, galactose, mannose 순으로 균사생장 및 균사밀도가 우수하였다. 무기태질소원으로는 ammonium acetate 30 mM에서 균사생장이 가장 양호하였다. 아미노산 중 arginine 15 mM에서 우수하였다. C/N율 200에서 35.9 mm로 균사생장의 최대치를 보였다. 상술한 실험의 결과를 토대로 Table 1과 같은 새로운 합성배지를 조제할 수 있었고, 이를 Ko배지라 명명하였다. 이 Ko배지와 기존배지간의 한천배지상에서 균사생장 비교한 결과, Ko배지에 가장 우수한 균사생장과 균사밀도를 나타냈다. Ko배지의 조성은 glucose 18.02g, arginine 3.613g, ammonium acetate 2.313g, $CaCl_2\;0.33g$, $KH_2-PO_4\;8.5g$, $MgSO_4{\cdot}7H_2O\;2.0g$, $FeSO_4{\cdot}7H_2O\;0.02g$, $ZnSO_4{cdot}7H_2O\;0.02g$, $MnSO_4{\cdot}7H_2O\;0.02g$, water 1 liter이다.
전보(前報)에서 변이처리에 의해서 얻은 Brevibacterium ammoniagenes BA 17-2로부터 5'-XMP aminase를 생산(生産)하기 위하여 인산염, 마그네슘이온, 망간이온, thinamine의 예비적정농도를 정(定)하고자 생육도(生育度)를 조사했다. 본실험(本實驗)에서 배지중(培地中)의 인산염의 농도(濃度)가 균(菌)의 생육(生育)에 중요한 영향을 미치는 것을 보여주었다. $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.2% $MnSO_4{\cdot}H_2O$ 3mg/l, $thiamine{\cdot}HCl$를 포함한 배지(培地)를 사용하면 최대 균체량은 $KH_2PO_4$, $K_2HPO_4$ 각각 0.4%의 농도에서 얻어졌다. 이러한 인산염 농도 이상에서 균생육(菌生育)은 인산염 농도가 1%까지 증가함에 따라 저해되었지만 저해작용은 1%의 $MgSO_4{\cdot}7H_2O$와 3mg/l의 $thiamine{\cdot}HCl$을 첨가하여 해소되었다. 5'-XMP aminase 역가도 역시 인산염, 마그네슘이온, 망간이온, thiamine의 농도에 영향을 받았다. 그밖에 효소역가에 대한 배양 최적 pH와 온도는 각각 6.8과 $32^{\circ}C$로 밝혀졌다.
앞의 실험에서 선별된 34菌株의 니코틴 분해세균 중에서 Pseudomonas putida로 동정된 Strain NCT 27과 Arthrobacter oxydans biotype xanthum으로 동정된 strain NCT30에 대해서 이들의 니코틴 분해를 위한 최적 배지조건 및 그 밖의 생장특성을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 니코틴 분해를 위한 최적배지조성은, $KH_2PO_4 2.Ogr$, KCI 5.Ogr, $MgSO_4\cdot7H_2O$ 20mg, $MnSO_46H_2O$ 0.2mg, $FeSO_4\cdot7H_2O$ 1.0mg, Co (Cobalt Acetate) 2.0$r$Ni (NiSO4.6H2O) 0.5${\gamma}$, yeast extract 80mg/1iter 이고 최적 초기 니코틴 농도는 Pseudomonas가 0.4%, Arthrobacter는 0.1%이었다. 그리고 최적생장온도는 두 경우 모두 3$0^{\circ}C$, pH는 7.0이며 배 양중의 pH변화는, Pseudomonas는 대수생장기에서 산성으로 기울었다가 24~40시간 후에 염기성으로 변화하는데 비해 Arthrobacter는 전 기간 중 pH가 거의 일정하게 유지되었다. 니코틴에 대한 저항성은 Arthrobacter가 0. 7%이상의 농도에서 생장이 완전히 저해됨에 비해 Pseudomonas는 1.0%까지 생장 가능하며 또한 담배추출물에서나, Nicotine 외의 다른 탄소, 질소 영양원이 포함되어 있는 배지에서도 니코틴을 효과적으로 분해할 수 있다. 그리고 최적배지조건에 서 최대 니코틴 분해도는 각각 1.22g/hr/1iter 및 0.186g/hr/1iter이었다.
This study was carried out to obtain the basic data on artificial culture of Hohenbuehelia petaloides. The optimum medium are glucose peptone medium (GP), Hennerberg medium, Phellinus igniarius medium (PIM), Lentinus edodes medium (LEM), Czapek dox medium. The optimum condition for the mycelial growth was $30^{\circ}C$ and pH 6.0. The carbon sources such as dextrine, fructose and lactose were favorable to mycelial growth. The optimal concentrations of carbon sources are 10% dextrin and fructose. As nitrogen sources, tryptone, casamino acid and histidine appeared to be favorable. The optimal concentrations of nitrogen sources are 1% soy tone and 0.3% ammonium nitrate. The optimal concentration of yeast extract is 0.4%. The mineral nutrients of $KH_2PO_4$, $K_2HPO_4\;and\;MgSO_4{\cdot}7H_2O$ were effective and the optimal concentrations were 0.046, 0.1 and 0.05%, respectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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