• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제24권2호
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• pp.261-265
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• 1997

본 연구는 EGF가 체외수정 및 체외배양에 의해 생산된 생쥐배의 체내 발달에 미치는 영향을 조사하고자 실시하였다. 본 실험에 사용된 난자는 체외수정 후 얻어진 2-세포기배를 EGF 첨가유무에 따라 배양 (5-6 embryos/25${\mu}l$/drop)하여 얻어진 4일령의 배반포기배로서, 각 처리군의 배반포기배는 가임신 3일된 대리모의 자궁내에 이식되어졌다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1,2-세포기배를 EGF의 첨가유무에 따라 배양하여 배반포기배로의 발달율과 세포수를 조사하였던 바, 처리군간의 유의한 차이는 나타나지 않았다. 2. 하지만, 각 처리군에서 회수된 배반포기배의 체내 발달을 조사하였던 바, 총 수태율의 결과에 있어서는 대조군과 EGF 처리군 각각 64.4%와 69.8%로서 두 군간에 유의한 차이를 나타내지 않았지만, 정상태아 발생율에 있어서는 EGF 처리군 (51.2%)이 대조군 (31.1%)보다 매우 높게 나타냈다. 따라서, 비록 EGF 처리군이 대조군과 비교하여 볼 때 체외수정 및 체외배양에 의해 생산된 난자의 유의한 발달은 나타내지 않았지만 난자의 질적인 향상을 통해서 체내발달을 증진시킬 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제21권9호
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• pp.559-568
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• 2020

세포 분열 및 성장 촉진에 영향을 주는 상피세포 성장인자(Epidermal Growth Factor, EGF)는 다양한 의학적 용도를 갖고 있는 호르몬 단백질이다. 본 연구에서는 human EGF 유전자를 대장균 코돈에 최적화 하고 pRSET 벡터에 클로닝하여 발현벡터를 구축하였다. Human EGF를 봉입체가 아닌 활성이 있는 형태로의 과량 발현을 위해 코돈의 최적화와 더불어 최초로 샤페론 공발현이 시도되었다. 발현된 Native protein 형태의 재조합 human EGF는 고순도로 정제하기 위해 Ion Exchange Chromatography를 2번 연속적으로 수행하여 순수 분리 정제되었고, ELISA 분석결과 99% 이상으로 재조합 EGF의 활성도가 상업용 EGF와 유사하게 나타났으며, 세포증식시험 결과 인간 재조합 EGF는 인체 피부 섬유아세포의 세포증식을 촉진하는 것으로 확인 되었다. 본 연구의 인간 EGF 발현 시스템은 양적인 측면 뿐 아니라 성공적인 활성형태의 발현으로 추가적인 재접힘 과정 및 N 말단의 융합부분을 제거하기 위한 크로마토그래피 작업이 필요가 없다는 점에서 기존의 방법들에 대체 될 수 있는 효과적인 인간 EGF 발현 시스템을 제공하고 있다.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제28권11호
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• pp.1311-1316
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• 2005

To better define the relationship between dermal regeneration and wound contraction and scar formation, the effects of epidermal growth factor (EGF) loaded in collagen sponge matrix on the fibroblast cell proliferation rate and the dermal mechanical strength were investigated. Collagen sponges with acid-soluble fraction of pig skin were prepared and incorporated with EGF at 0, 4, and 8 $\mu$g/1.7 $cm^{2}$. Dermal fibroblasts were cultured to 80$\%$ confluence using DMEM, treated with the samples submerged, and the cell viability was estimated using MTT assay. A deep, $2^{nd}$ degree- burn of diameter 1 cm was prepared on the rabbit ear and the tested dressings were applied twice during the 15-day, post burn period. The processes of re-epithelialization and dermal regeneration were investigated until the complete wound closure day and histological analysis was performed with H-E staining. EGF increased the fibroblast cell proliferation rate. The histology showed well developed, weave-like collagen bundles and fibroblasts in EGF-treated wounds while open wounds showed irregular collagen bundles and impaired fibroblast growth. The breaking strength (944.1 $\pm$ 35.6 vs. 411.5 $\pm$ 57.0 Fmax, $gmm^{-2}$) and skin resilience (11.3 $\pm$ 1.4 vs. 6.5 $\pm$ 0.6 mJ/$mm^{2}$) were significantly increased with EGF­treated wounds as compared with open wounds, suggesting that EGF enhanced the dermal matrix formation and improved the wound mechanical strength. In conclusion, EGF-improved dermal matrix formation is related with a lower wound contraction rate. The impaired dermal regeneration observed in the open wounds could contribute to the formation of wound contraction and scar tissue development. An extraneous supply of EGF in the collagen dressing on deep, $2^{nd}$ degree-burns enhanced the dermal matrix formation.

• Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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• 제24권1호
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• pp.21-26
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• 1997

본 연구는 체외생산된 생쥐 배반포기배의 ICM 세포에서 EGF-R 발현유무를 immunosurgery와 indirect immunofluorescence (간접 면역 형광방법) 을 이용하여 조사하고자 실시하였다. 본 실험에 사용된 ICM 세포는 체외수정 후 96시간째에 회수된 생쥐 배반포기배를 immunosurgery 방법을 이용하여 얻어졌으며, 회수된 ICM세포는 생사유무와 EGF-R 발현유무 조사에 공시 되어졌다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. ICM세포의 회수율은 rabbit anti-mouse serum (antiserum) 과 guinea pig serum (complement) 에 각각 15-30 분과 15-60분 동안 처리 했을 경우 8.0-84.2% 였으며, 또한 처리시간이 각각 30분과 60분일 때 가장 높은 회수율 (84.2%) 을 얻었다. Immunosurgery 후 얻어진 ICM세포의 생존 유무를 조사하기 위해 live/dead염색 방법을 이용하였던 바, 처리된 ICM세포중 93.8-100%의 생존율을 나타내어 회수된 ICM세포는 유해한 영향을 받지 않았다는 것을 알 수 있었다. 또한, 간접면역 형광방법을 이용하여 ICM세포에서 EGF-R가 발현되는 것을 확인 하였다. 따라서, ICM세포에서의 EGF-R의 발현은 인위적으로 첨가된 EGF의 이용가능성을 높임으로서 체외에서의 착상전 배 발달을 증진시킬 수 있을 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제12권2호
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• pp.164-172
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• 2002

유방암세포는 여러 종류의 성장인자 수용체를 가지며, 이를 통해 성장신호를 전달한다. 따라서, 이러한 수용체들의 신호전달 경로에 있는 공통적인 2차전달자들의 조절기작을 밝히는 것이 중요하다. 이 연구는 MCF-7 cell에 있어서, 에스트로젠과 TGF-$\alpha$ , EGF와 같은 성장인자의 mitogenic signal을 전달하는 second messenger에 폴리아민이 어떤 영향을 미치는지, 또 membrane-associated proteins의 인산화에 폴리아민이 어떤 조절기작을 가지는지를 알아보고자 한다. 폴리아민 생합성 억제제인 DFMO는 154, 134, 116, 104 kDa의 membrane-associated proteins의 인산화를 억제하였고, DFMO에 의해 억제된 단백질 인산화는 폴리아민 첨가로 다시 회복 되었다. $E_2$, TGF-$\alpha$, EGF, DFMO는 모두 단백질의 타이로신 인산화에는 크게 영향을 미치지 않았으나, 처리해준 폴리아민에 의해 154, 134, 116 kDa의 단백질의 타이로신 인산화는 급격히 증가하였다. 또한 $E_2$, TGF-$\alpha$, EGF는 모두 같은 단백질에서 유사하게 인산화를 유도하였다. 이러한 결과로 볼 때, $E_2$와 TGF-$\alpha$, EGF와 같은 성장촉진인자의 signaling pathway는 154, 134, 116, 104 kDa 단백질을 기질로 하는 여러 가지 다양한 종류의 protein kinase를 통해서 서로 cross-talk하고 있으며, 폴리아민은 154, 134, 116, 104 kDa와 같은 여러 가지 membrane-associated proteins의 인산화를 조절함으로서 이러한 cross-talk pathway에 관여하고 있는 것으로 사려된다.

• 대한치과보철학회지
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• 제59권4호
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• pp.379-394
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• 2021

목적: 이전 연구에서 치은섬유아세포 혹은 성견 구개 연조직에 trichloroacetic acid (TCA)를 적용하는 것이 세포주기진행 유전자 발현의 변화를 일으키는 것으로 밝혀졌다. 이에 따라 본 연구에서는, hydrophobically modified glycol chitosan (HGC)기반의 나노방출제어시스템을 이용한 TCA 및 상피세포성장인자(EGF)의 순차적 방출시스템에서 이 효과를 검증하기 위하여 다양한 세포주기진행 유전자들의 발현을 규명하였다. 재료 및 방법: TCA와 EGF를 담지하는 HGC기반 나노방출제어시스템을 제작하였다. 실험군은 대조군(CON); TCA-담지형 나노방출제어시스템 투여군(EXP1); TCA- 및 EGF-담지형 나노방출제어시스템 투여군(EXP2)으로 정의되었다. 24시간 및 48시간 배양 시 37개 세포주기 유전자들의 발현을 분석하였다. 영향인자로서의 유전자 및 상관관계에 대해서도 분석하였다. 결과: Cyclins (CCNDs), cell division cycles (CDCs), cyclin-dependent kinases (CDKs), E2F transcription factors (E2Fs), extracellular signal-regulated kinases (ERKs)와 같은 다수의 유전자들과 기타 다른 세포주기 유전자들의 발현이 EXP1과 EXP2에서 상향조절되었다. E2F4, E2F5, GADD45G와 같은 세포주기차단 유전자들의 발현도 상향조절되었으나, 또다른 세포주기차단 유전자인 SMAD4의 발현은 하향조절되었다. 다중회귀분석에서 CCNA2, CDK4 그리고 ANAPC4가 ERK 유전자 발현에 가장 영향력 있는 유전자로 선정되었다. 결론: HGC기반 순차적 나노방출제어시스템을 이용한 TCA 및 EGF의 적용은 다양한 세포주기진행 유전자들의 발현을 상향조절함이 밝혀졌고, 이를 토대로 한 구강연조직증대시스템 개발의 가능성이 확보되었다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제19권2호
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• pp.171-175
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• 2006

The aim of this in vitro study was to test the effect of microinjection (Mi) of foreign gene into the rabbit egg pronucleus and epidermal growth factor (EGF) addition on the blastocyst rate, the cell number and the diameter of embryos, and to determine possible relationships between embryo cell number and embryo diameter. Blastocyst rate was significantly decreased in gene- Mi (G-Mi/E0) group (63.1%) comparing to intact ones (83.5%, $p_1$<0.05). The addition of EGF at 20ng/ml (G-Mi/E20) or 200 ng/ml (GMi/ E200) to gene-Mi embryos did not affect blastocyst rate (65.6 and 55.2% resp.). As a control for Mi, the eggs were microinjected with the same volume of phosphate-buffered solution (PBS-Mi) instead of the gene construct solution. Cell numbers and embryo diameters were measured from embryo images obtained on confocal laser scanning microscope. Bonferroni-modified LSD test showed that the embryo cell number in PBS-Mi group was significantly lower ($p_1$<0.05) and in gene-Mi group was tended to decrease compared with intact embryos. Embryo diameter was not different among experimental groups. No effect of EGF given at any doses both on the cell number and embryo diameter was found. A positive correlation between cell number and embryo diameter was observed in all groups of embryos. Since embryo diameter was not changed under the influence of Mi or EGF addition in this study, this seems to be more conservative characteristics of the embryo morphology. These results suggest that the pronuclear microinjection compromises developmental potential of embryos, decreasing blastocyst rate and embryo cell number, whilst embryo diameter is not affected. No effects of EGF on studied parameters were confirmed. Declined quality of Mi-derived embryos is caused by the microinjection procedure itself, rather than by the gene construct used.

• 대한화장품학회지
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• 제45권2호
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• pp.175-184
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• 2019

상피세포성장인자(epidermal growth factor, EGF)는 인간의 표피 및 진피에서 세포막 수용체와 상호작용을 통하여 세포의 생장 및 증식을 유도하는 기능을 갖고 있다. 이 같은 EGF의 기능은 의료 및 화장품 분야에서 상처치유 의약품 및 노화방지 화장품의 주요원료로 사용되고 있다. 화장품 원료로서 EGF는 피부장벽으로 알려져 있는 피부 각질층의 투과가 잘 안되기 때문에 가지고 있는 본연의 효능을 구현하는 데 문제가 있다. 본 연구에서는 EGF의 경피투과 효율을 개선하기 위하여 피부 투과능이 확인된 거대분자 전송 도메인(macromolecule transduction domain, MTD) 151이 융합된 형태로 재조합 인간 상피세포성장인자 ($MTD_{151}-EGF$)를 개발하였다. $MTD_{151}-EGF$의 유전자가 coding된 vector로 형질전환된 대장균에서 $MTD_{151}-EGF$ 발현시킨 후 정제를 진행하였다. 정제된 MTD-EGF를 대상으로 세포증식시험, 세포독성시험, 생체외 피부흡수시험 그리고 인공피부를 이용한 경피투과능을 평가하였다. 99% 이상 고순도로 정제된 $MTD_{151}-EGF$의 세포증식 활성은 EGF 대비 동등 이상의 수준이었으며, 세포독성은 관찰되지 않았다. 또한, 인공피부 투과모델에서 FITC로 표지된 EGF와 $MTD_{151}-EGF$의 진피층까지의 투과를 공초점 현미경으로 관찰한 결과, $MTD_{151}-EGF$는 EGF 대비 우수한 투과능을 보였으며, 경피흡수 시스템을 이용한 투과물질의 정량분석 결과, EGF 대비 약 16 배 이상 투과량이 많은 것으로 확인되었다. 이러한 결과들은 다양한 활성물질들의 화장품용 원료로서의 경피투과에 MTD가 기존의 물리적인 경피투과 방법을 효율적으로 개선한 대안이 될 것으로 판단된다.

• 대한치과교정학회지
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• 제23권1호
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• pp.89-100
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• 1993

The purpose of this study was to evaluate the effect of orthodontic force on periodontal cellular activity by immunoperoxidase stain of epidermal growth factor, one of the tissue hormone. And supplementarily, to investigate of the changes of periodontal structures, periodontium was stained by H-E, Masson's Trichrome, P. A. S. stain after orthodontic force application. The experimental animals were four young adult dogs of average 8 month old. The fixed orthodontic appliance was cemented on mandibular right 4th premolar and 1st molar of each animal as experimental site. Mandibular left 4th premolar area of the same animal was used as control. The appliance consist of two silver crown soldered with 0.030' tube, $0.018\times0.022'$ S.S. sectional arch wire, and 0.009' open coil spring for manifestating of orthodontic force for bodily tooth movement of mandibular 4th premolar toward mesial direction. Experimental group was sacrificed at 1, 2, 3, 5 weeks from beginning of the experiment, and was investigated immunohistochemically and bistochemically by several staining methods. Findings were as follows: 1. The degree of EGF staining in control group was highest in epithelium of periodontium, and osteoclasts, osteoblasts and fibroblasts around the capillary were stained at higher level in periodontium. Generally, control group shows positive distribution of EGF all around the periodontal area. 2. The degree of EGF staining in control and 5 week group were similar, and did not show the significant different level between tension and pressure side. 3. All of 1, 2, 3 week group showed the same staining degree and distribution of EGF, and the tension side was more positive reaction of EGF stain than the pressure side. 4. The features of collagen fiber and periodontal fiber arrangement observed by H-E, Masson's Trichrome and P. A. S. stain revealed that oblique periodontal fibers were strectched in tension side, compressed in pressure side of all experimental group. Some fiber group in pressure side of 5 week group recovered the regular arrangement along the capillaries.

• KSBB Journal
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• 제23권3호
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• pp.205-212
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• 2008

본 연구의 목적은 위치특이적 펩타이드 및 단백질을 사용하여 재조합 대장균에서 활성형 인간 상피세포성장인자(hEGF)를 고효율로 발현할 수 있는 방법을 찾아내는 데 있다. 재조합 대장균내 cytoplasm 및 periplasm 영역에서 hEGF의 발현을 위해 각각 세개의 응합 펩타이드 및 단백질을 선정하여 상호 비교하였다. 재조합 대장균에서 hEGF의 발현유도시 대부분 불용성 단백질로 생산되는 현상을 극복하기 위해 cytoplasm영역에서는 ATS, thioredoxin, 리파제를 융합파트너로 사용하였으며 periplasm 영역에서는 foldase인 DsbA와 DsbC, 용융성 고발현 단백질인 maltose binding protein을 선택하여 사용하였다. Periplasm영역에서 발현유도를 시키는 융합단백질의 경우 cytoplasm영역에서의 발현양도 용융성 형태로 고발현 되는 것을 알 수 있었으며 전체적으로 약 2배가량의 용융성 형태로 발현되었다. hECF의 발현율을 가장 높일 수 있는 융합단백 질은 maltose binding protein이었으나 발현된 융합단백질의 24%가 불용성 단백질로 형성되어 활성형 형태로 얻는 데 한계가 있었으며, 활성형 형태로 hEGF의 발현을 위해서는 DsbA를 응합단백질로 사용한 경우에 18.1 mg/L로 가장 높은 발현농도를 보였다. Cytoplasm 영역에서 발현유도를 한 경우에는 ATS와 thioredoxin을 응합파트너로 hEGF를 발현한 경우 용융성 형태로 높은 발현율을 보였다. 특히 ATS와 같은 펩타이드를 N-말단에 융합시킨 경우 불용성을 방지하는 효과를 보여 이황화결합의 불완전성이나 소수성으로 인해 불용성 단백질로 발현되는 기존의 단백질을 활성형 형태로 발현하는데 될 수 있음을 확인할 수 있었다.