The nar promoter of Escherichia coli was known to induce maximally under anaerobic or microaerobic conditions in the presence of nitrate. In this study, the nar promoter was tested to see whether the expression level of a reporter gene which fused lacZ gene at nar promoter's downstream, in the some gram negative host strains(Agrobacterium, Pseudomonas and Rhizobium). A nar promoter system(Combination of nar promoter and gram negative strain) was grown under aerobic conditions to absorbance at 600 nm of nearly 2.0 and then, the nar promoter was induced by lowering DO to 1-2% with alternating microaerobic and aerobic condition in the fermentor cultures, using different gram negative hosts. For a wild type nar promoter (pNW61), it was possible to maintain production of ${\beta}-galactosidase$ activity per cell(specific ${\beta}-galactosidase$ activity) at 14,000, 9600, 45 Miller units in the presence of 1% nitrate. and for a nitrate - independent nar promoter (pNW618) at 12,000, 10,400 and 58 Miller units in the absence of nitrate ion, respectively.
A yeast chromosomal superkiller gene (SK13) was cloned and expressed in $ski3^{-}$ Saccharomyces cerevisiae strains. The gene was fused to the structural region of E. coli lacZ gene at its C-terminus in a yeast-E. coli shuttle vector, pSR605. The fused gene complemented $ski3^{-}$ strains with SK13 activity and the quantitative level of expression was measured as determined by assaying $\beta$-galactosidase activity. The SDS-polyacrylamide gel electrophoresis and the Western blot analysis of this fused protein showed the immuno-reacted bands with a protein of the estimated molecular size (ca.250Kd).
The present study was conducted to assess gene expression of bacterial lacZ driven by the SV40 promoter at early developmental stages of bovine embryos. The lacZ gene was linearized with BamHI digestion and introduced into the pronucleus by microinjection at 20 hrs after the commencement of in vitro fertilization. Intact bovine blastocysts were not stained with X-Gal, suggesting that there is no endogenous beta-galactosidase activity in these blastocysts. In contrast, the bovine blastocyst cells microinjected with the lacZ gene exerted a characteristic greenish-blue color originating from the bacterial beta-galactosidase activity, albeit at a low rate, i.e. 2.1% of the total fertilized oocytes injected. It was concluded, therefore, that the lacZ gene driven by the SV40 promoter could be used for an indirect screening method in which the presence of transgene is evaluated from the product of transgene expression.
From S. lactis $KB_{21}$, stabilized strain by intergration of the lactose plasmid into the host chromosome, several lactose constitutive mutants were obtained by UV irradiation and spontaneous mutation. The rapid growth of the mutants in the medium containing lactobionate confirmed their constitutive nature. The mutants synthesized $phospho-{\beta}-galactosidase$ with an activity of 1.7 to 3.4 times that of the parent.
[ $\beta$ ]-Galactosidase was extracted from the internal organ of sea urchin, Hemicentrotus pulcherrimus The enzyme was purified 384.6-fold over the crude extract by the sequential chromatographic methods including DEAE-Sephadex A-25, CM-Cellulose, and Con A-Sepharose 4B affinity chromatography with a recovery $1.26\%$. The molecular weight of the purified enzyme was estimated approximately 94 kDa as monomeric term by SDS-PAGE and Sephadex G-150 gel chromatography. The maximum enzymatic activity was observed at pH 3.0 and $50^{\circ}C$ but the one was stable over the ph range or 3.0$\~$5.0 and below $37^{\circ}C$. The $K_m$ and $V_{max}$ values against PNPG (P-nitrophenyl $\beta$-D-galactopyranoside) were 15.0 mM and 214 $\mu$mole/min per mg protein, respectively. The enzymatic activity was activated by $Ba^{2+}$, but significantly inhibited by $DEP,\;Hg^{2+},\;Sn^{2+}$ and galactose.
This experiment was carried out to optimize the condition for the enzyme production by selected strain in the basal medium, to purify the enzyme and to characterize the purified enzyme. The results obtained were as follows. 1. The optimal conditions for the $\beta$-galactosidase production were initial pH 7.0 and temperature $65^{\circ}C$. 2. Enzyme was induced by the addition of lactose and galactose, and it was intracellular enzyme. 3. The purified enzyme was obtained with the increased level of activity approximately 28.5 folds as compared with crude enzyme and the yield of 15.2% by means of DEAE-Cellulose column chromatography, Sephadex G-150 gel filtration 4. $\beta$-galactosidase from final step of purification showed a sing1e protein band on polyacrylamide gel disc electrophoresis. 5. The optimal temperature and pH of the purified enzyme were $65^{\circ}C$, pH 6.5 for the hydrolysis of lactose.
Journal of the Society of Cosmetic Scientists of Korea
/
v.43
no.4
/
pp.373-379
/
2017
We carried out the enzymatic synthesis of 1, 2-hexanediol galactoside (HD-gal) by transgalactosylation reaction using recombinant Escherichia coli ${\beta}-galactosidase$ (${\beta}-gal$). The amounts of ${\beta}-gal$ and 1, 2-hexanediol (HD), pH, and temperature, respectively, were first optimized (${\beta}-Gal$, 4.8 U/mL; HD, 75 mM; pH, 7.0; temperature, $37^{\circ}C$). Under these optimal conditions, about 96% HD was converted to HD-gal. When we investigated the water holding capacities (WHCs) of HD and HD-gal using pig epidermis in the concentrations of 84.4, 126.6, 168.8, 211.0 mM, WHC of HD-gal was superior to HD. In particular, at 168.8 mM HD and HD-gal, WHC of HD-gal showed about 20% greater than that of HD. However, it was observed that MIC values against Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus of HD-gal were about three to ten times greater than those of HD, although MIC value of HD-gal against Enterococcus faecalis was almost the same as that of HD. Finally, it was concluded that the covalent bonding of a galactose molecule to HD (transgalactosylation) resulted in an increase in WHC of HD-gal and a decrease in anti-bacterial activity.
Han Tae Un;Jeong Do-Won;Cho San Ho;Lee Jong-Hoon;Chung Dae Kyun;Lee Hyong Joo
Microbiology and Biotechnology Letters
/
v.33
no.4
/
pp.241-247
/
2005
A new lactococcal shuttle/expression vector for lactococci, pWgal13T, was constructed using a $\beta$-galactosi-dase gene (lacZ) from Lacfococcus lactis ssp. lactis ATCC 7962 as a screening marker. The pWgal 13T was introduced into Escherichia coli DH5a and L. lactis MG1363, and was easily detected by the formation of blue colonies on a medium containing X-gal without any false transformants. Also, the quantitatively lacZ activity of pWgal13T was measured in L. lactis ssp. cremoris MG1363, and was found to be four times higher than that of L. lactis ssp. lactis ATCC7962 grown on a medium containing glucose, which shows that the lacZ gene of pWgal13T can be used for the efficient screening of L. lactis on general media. The pWgal13T was equipped with a lactococcal replicon of pWV01 from L. lactis Wg2, the new promoter P13C from L. lactis ssp. cremoris LM0230, multiple cloning sites, and a terminator for the expression of a relevant gene. The vee-tor pWgal13T was used for the expression of the EGFP gene in E. coli and L. lactis. These results show that the lactococcal expression/shuttle vector constructed in the present study can be used for the production of foreign proteins in E. coli and L. lactis.
Wild-type V. vulnificus cannot grow using lactose as the sole carbon source or take up the sugar. However, prolonged culture of this species in media containing lactose as the sole carbon source leads to the generation of a spontaneous lactose-utilizing (LU) mutant. This mutant showed strong ${\beta}$-galactosidase activity, whereas the wild-type strain showed a barely detectable level of the activity. A mutant with a lesion in a gene homologous to the lacZ of E. coli in the bacterium no longer showed ${\beta}$-galactosidase activity or generated spontaneous LU mutants, suggesting that the lacZ homolog is responsible for the catabolism of lactose, but the expression of the gene and genes for transport of lactose is tightly regulated. Genetic analysis of spontaneous LU mutants showed that all the mutations occur in a lacI homolog, which is located downstream to the lacZ and putative ABC-type lac permease genes. Consistent with this, a genomic library clone containing the lad gene, when present in trans, made the spontaneous LU mutants no longer able to utilize lactose as the sole carbon source. Taken together with the observation that excessive amounts of exogenously supplemented possible catabolic products of lactose have negative effects on the growth and survivability of V. vulnificus, we suggest that V. vulnificus has evolved to carry a repressor that tightly regulates the expression of lacZ to keep the intracellular toxic catabolic intermediates at a sublethal level.
To enhance expression of foreign gene by the novel expression vector, pBmKSK1, of Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus, E. coli $\beta$-galactosidase gene expressing recombinant virus was infected in BmN-4 cells and various concentrations of silkworm hemolymph were added to the recombinant virus-infected BmN-4 cells containing fetal bovine serum. The expression efficiency of foreign gene was determined by $\beta$-galactosidase activity in the culture media. The results showed that the silkworm hemolymph was effective to expression of foreign gene in the BmN-4 cells, suggesting that the silkworm hemolymph could be substituted for fetal bovine serum in the BmN-4 cells to enhance expression of foreign gene.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.