본 실험은 yoghurt와 yoghurt culture에서의 ${\beta}-galactosidase$의 활성도를 측정하였다. Liquid medium에서 자란 yoghurt culture의 ${\beta}-galactosidase$의 활성도는 S. thermophilus가 Lactobacillus에 비해 $5{\sim}10$배 높은 것으로 나타났으며 제조 yoghurt를 저장온도에 따른 차이를 실험한 결과 냉장보관$(4^{\circ}C)$시 한달 정도까지는 효소활성도와 생균수를 보전함을 볼 수 있었으나 실온저장시는 5일 정도 밖에 효소활성도와 생균수를 유지하지 못했다. 실험을 통해 ${\beta}-galactosidase$ activity는 생균수와 비례함을, 특히 S. thermophilus의 생균수와 비례함을 알수 있었다. 시판 yoghurt와의 비교실험에서는 활성도와 생균수에 있어서 반정도의 수준도 못 미침을 알수 있었는데 이는 다음호에 계속될 여러 요인들에 기인함을 짐작케 한다.
Lactobacillus salivarius subsp. salivarius Nam27 with a high ${\beta}$-galactosidase activity was selected for enzymatic characterization. For purification, cell pellet was disrupted by Bead Beater, by DEAE-Sepharose and Mono-Q chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 5,312 units/mg. The molecular weight of native monomeric ${\beta}$-galactosidase was estimated to be 30,000 dalton (monomer) by the SDS-PAGE. The optimum temperature and optimum pH were $50^{\circ}C$ and 5.0, respectively. This enzyme was stable between 35 and $55^{\circ}C$. ${\beta}$-galactosidase activity was lost rapidly above pH 7.0. But ${\beta}$-galactosidase was more stable at pH 4.0 (acidic conditions). And ${\beta}$-galactosidase activity was lost rapidly above $65^{\circ}C$ after 10 min incubation. $Ca^{2+}$ and $Zn^{2+}$ metal ions enhanced ${\beta}$-galactosidase activity by 164.09% and 127.37% while $Cu^{2+}$, $Fe^{3+}$ and $Mn^{2+}$ lowered ${\beta}$-galactosidase activity by 58.29%,85.10% and 77.66% respectively. Other metal ions didn't affect ${\beta}$-galactosidase activity significantly.
토양으로부터 세포외로 $\beta$-galactosidase를 분비 생산하는 방선균 YB-10이 분리되었으며, 분리균의 배양ㆍ형태ㆍ생리적 특성을 조사한 결과 Streptomyces속 균주로 확인되었다. 분리균의 배양상등액을 30%~70% ammonium sulfate로 처리하고 투석하여 얻은 $\beta$-galactosidase를 조효소액으로 사용하였을 때 para-nitrophenyl-$\beta$-D-galactopyranoside (pUP$\beta$Gal)는 pH 6.0과 6$0^{\circ}C$의 반응조건에서 가장 잘 분해되었으며, lactose는 galactose와 glucose로 가수분해되는 것으로 확인되었다. 분리균이 생산하는 $\beta$-galactosidase는 galactose에 의해 lactose와 pNP-$\beta$Gal의 가수분해 활성이 모두 저해되었으나, glucose에 의해서는 lactos의 가수분해 활성만 저해되었다. 특히 pUP-$\beta$Gal의 가수분해 활성은 glucose에 의해 약 1.8배 증진되었다.
We observed that an inclusion body (IB) of recombinant ${\beta}$-galactosidase that was produced by the araBAD promoter system in Escherichia coli (E. coil) showed enzyme activity. In order to improve its activity, the lowering of the transcription rate of the ${\beta}$-galactosidase structural gene was attempted through competition between an inducer (L-arabinose) and an inducer analog (D-fucose). In the deep-well microtiter plate culture and lab-scale fermentor culture, it was demonstrated that the addition of D-fucose caused an improvement in specific ${\beta}$-galactosidase production, although ${\beta}$-galactosidase was produced as an IB. In particular, the addition of D-fucose after induction led to an increase in the specific activity of ${\beta}$-galactosidase IB. Finally, we confirmed that the addition of D-fucose after induction caused changes in the structure of ${\beta}$-galactosidase IB, with higher enzyme activity. Based on these results, we expect that an improved enzyme IB will be used as a biocatalyst of the enzyme bioprocess, because an enzyme IB can be purified easily and has physical durability.
This examined some conditions for the induction of ${\beta}$-D-galactosidase synthesis in Candida kefyr CBS 834. The optimal pH, temperature, and inoculum size either for growth or${\beta}$-D-galactosidase synthesis were 5.5, $30^{\circ}C$ and above 0.2 at A610nm, respectively. Enzyme activity began to increase at 2h after the addition of inducer, and continued to increase linearly up to $2{\sim}3h$ before reaching stationary phase, and thereafter its activity was decreased. ${\beta}$-D-galactosidase was induced either by lactose or galactose but not either by glucose or ethanol. The greater activity of ${\beta}$-D-galactosidase on galactose than on lactose indicated that the former might be natural inducer for ${\beta}$-D-galactosidase synthesis. The rate of its induction as a function of lactose concentration showed that enzyme activity increased linearly above 4mM, while it was very low below that. Glucose represed the induction of ${\beta}$-D-galactosidase, and the period of adaptation to inducer from other carbon sources was relatively short.
가정에서 제조된 된장으로부터 lactose를 glucose와 galactose로 가수분해하는 균체외 ${\beta}$-galactosidase의 생산균이 분리되었다. 분리균 YB-1414는 형태적 특성, 생화학적 성질 및 16S rRNA 유전자 염기서열에 근거하여 Bacillus licheniformis로 확인되었다. 탄소원과 질소원으로 밀기울 (1%)과 yeast extract (2.5%)를 사용하였을 때 B. licheniformis YB-1414의 ${\beta}$-galactosidase 생산성이 최대 6.2 U/ml에 이르렀다. 특히 밀기울의 불용성 성분이 수용성 성분보다 ${\beta}$-galactosidase 생산성을 더 증가 시키는 것으로 확인되었다. ${\beta}$-galactosidase의 para-nitrophenyl-${\beta}$-D-galactopyranoside 가수분해 활성은 pH 6.0과 $55-60^{\circ}C$에서 가장 높았으며, 낮은 농도의 galactose에 의해서도 크게 저해를 받았다. 그러나 glucose에 의해서는 ${\beta}$-galactosidase의 가수분해 활성이 약하게 저해를 받으며 400 mM glucose가 존재하여도 최대 활성의 85%에 해당하는 가수분해 활성을 보였다.
가정에서 제조된 청국장으로부터 lactose를 glucose와 galactose로 가수분해하는 ${\beta}$-galactosidase의 생산균을 분리하였다. 분리균 YB-1105는 형태적 특성, 생화학적 성질 및 16S rRNA 유전자 염기서열에 근거하여 Bacillus licheniformis로 확인되었다. B. licheniformis YB-1105의 배양상등액과 균체파쇄액에서 모두 ${\beta}$-galactosidase 활성이 관찰되었으며 이들은 모두 pH 6.5와 $50^{\circ}C$의 반응조건에서 paranitrophenyl-${\beta}$-D-galactopyranoside의 가수분해 활성이 최대로 나타났다. 그러나 균체파쇄상등액에 비해 배양상등액의 ${\beta}$-galactosidase 활성은 산성 pH와 고온에서 크게 영향을 받았다. 한편 두 분획의 가수분해 활성은 낮은 농도의 galactose에 의해도 급격하게 저해되었으나, glucose와 mannose는 고농도에 의해서는 약하게 저해를 받는 것으로 확인되었다.
${\beta}$-Galactosidase was extracted and purified from strawberry. The purified ${\beta}$-Galactosidase from strawberry was investigated their physicochemical characteristics. ${\beta}$-Galactosidase was purified 25.74 fold from strawberry. The purification procedure include ammonium sulfate fraction, acetone powder treatment and gel and ion exchange chromatography. Yield of the enzyme purification was 18.11%. The purified enzyme has native molecular weight of 116,000 dalton. Vmax value and Km value of ${\beta}$-Galactosidase were 0.077 mM ONPG/ml/15mim and 1.75x10-2mM, respectively. The optimum temperature and pH of ${\beta}$-Galactosidase were 43$^{\circ}$C and pH 4.0, respectively. The ${\beta}$-Galactosidase activity was stable below 50$^{\circ}$C and at pH 4.0 to pH 6.0. Among the metal ions Ca and Mg were did not affect, whereas K, Cu and Zn show a little effect on the enzyme activity. The ${\beta}$-Galactosidase activities were inhibited by treatment with EDTA and SDS.
Aspergillus phoenicis의 ${\beta}-galactosidase$ 활성을 ONPG와 lactose를 기질로서 사용하여 조사하였다. 이 효소 활성은 성장의 대수기 동안은 서서히 증가하였으나 정지기가 시작되면서 급격하게 감소하였다. 또한 이 효소는 높은 온도에서도 좋은 효소 활성을 유지하였으며, 산성 pH에서 최고의 효소활성을 나타내었다. ${\beta}-galactosidase$는 lactose보다 ONPG에 대한 기질의 친화력이 더 좋았으며, 효소 활성도 ONPG의 경우가 더 높았다. Lactose의 가수분해율은 반응액중의 lactose의 농도가 낮을 수록 높았으며, 사용균의 무게에 따라 초기에는 증가하다가 어느 수준 이상에서 부터는 점근값을 나타내었다. 효소의 활성은 효소의 고정 방법 및 조건에 영향을 받았으며, matrix의 가교가 pH 7.2 및 0.35 vol. %의 glutaraldehyde 농도에서 행하여졌을 때, 가장 높은 효소 활성을 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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