Regeneration of protoplast was effective by preincubating spore suspension containing 30$\mu g$/ml of 2-DG for 4 hours, and CBE medium containing casamino acid, bovine serum albumin, ergosterol and myoinositol was found to be more efficient than any other regeneration medium tested in this experiment. The regeneration frequency was about 30%. Optimal conditions for conidial protoplast fusion were obtained by treatment of protoplasts with 10 mM $CaCl_2$ and 30% polyethylene glycol 4000 (pH 7.5) as fusogenic agent at $37^{\circ}C$ for 10 minutes. The fusion frequency was $8.2\times 10^{-4}$. The higher productivity of enzyme of fusant FWN-56 was achived: 2.3-fold for CMCase, 1.5-fold for avicelase, 1.8-fold for $\beta$-glucosidase and 2.5-fold for xylanase compared to that obtained in two parental strains. The genetic stability of fusant after maintenance on minimal medium for more than 4 weeks was high because segregant rate was below 1%. The conidial DNA content of fusant was 1.4-1.6 times higher than that of the parental strains, The nucleus size of fusants were also higher than that of each parental strains.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.22
no.3
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pp.340-348
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1993
Cross-synergistic interactions were evaluated with purified enzymes from Trichoderma viride and Penicillium funiculosum cellulase. Different synergistic patterns between enzyme components were observed. Exo-exo type synergism was found to be the most effective for degrading Avicel in all cases. Exo-endo type synergism was found to be slightly less effective. Extended hydrolysis of Avicel was carried out using mixtures of purified enzyme components with the crude cellulase from a different source. Addition of $\beta$-glucosidase from P. funiculosum cellulase to T. viride cellulase provided the great enhancement of Avicel hydrolysis. In addition, exoglucanase from T. viride cellulase was found to enhance P. funiculosum cellulase in degradation of Avicel. In conclusion, it was possible to enhance the hydrolysis of Avicel by altering the proportions of enzyme components by supplementing enzyme components from a different source. Different types of synergisms acted together to achieve maximum conversion.
Trichoderma spp. are the aggressive causal agents for green mold disease on oyster mushroom (Pleurotus spp.) cultivation. Antifungal bacteria (KATB 99121, KATB 99122 and KATB 99123 strains) were isolated from the compost for Pleurotus ostreatus. Among these bacterial strains, KATB 99121 strain showed an excellent inhibitory activity to the pathogens for green molds such as T. harzianum, T. viride and T. hamatum and an animal pathogen, Candida albicans, but did not affect on the culture of Pleurotus ostreatus (2209, Chunchu 2 and Wonhyung strains). KATB 99121 strain secreted amylolytic, proteolytic and cellulolytic exoenzymes. KATB 99122 and KATB 99123 strains excreted amylolytic, proteolytic, cellulolytic, lipolytic exoenzymes and showed ${\beta}$-glucosidase activity. Further studies will be conducted on the development of microbial fungicides using the antagonistic bacteria for the control of green mold disease on Pleurotus spp.
Increasing atmospheric $CO_2$ affects the soil carbon cycle by influencing microbial activity and the carbon pool. In this study, the effects of elevated $CO_2$ on extracellular enzyme activities (EEA; ${\beta}$-glucosidase, N-acetylglucosaminidase, aminopeptidase) in salt marsh sediment vegetated with Suaeda japonica were assessed under ambient atmospheric $CO_2$ concentration (380 ppm) or elevated $CO_2$ concentration (760 ppm) conditions. Additionally, the community structure of sulfate-reducing bacteria (SRB) was analyzed via terminal restriction fragments length polymorphism (T-RFLP). Sediment with S. japonica samples were collected from the Hwangsando intertidal flat in May 2005, and placed in small pots (diameter 6 cm, height 10 cm). The pots were incubated for 60 days in a growth chamber under two different $CO_2$ concentration conditions. Sediment samples for all measurements were subdivided into two parts: surface (0-2 cm) and rhizome (4-6 cm) soils. No significant differences were detected in EEA with different $CO_2$ treatments in the surface and rhizome soils. However, the ratio of ${\beta}$-glucosidase activity to N-acetylglucosaminidase activity in rhizome soil was significantly lower (P < 0.01) at 760 ppm $CO_2$ than at 380 ppm $CO_2$, thereby suggesting that the contribution of fungi to the decomposition of soil organic matter might in some cases prove larger than that of bacteria. Community structures of SRB were separated according to different $CO_2$ treatments, suggesting that elevated $CO_2$ may affect the carbon and sulfur cycle in salt marshes.
Lower termites require symbiotic microbes in their gut. The microbial communities in the termites must adapt to the termite temperature. Reticulitermes speratus KMT001 from Bukhan Mountain in Seoul may require a special symbiotic microorganisms for growth in low temperature Korean habitat. A metagenomics analysis showed a dramatic change in the symbiotic bacterial flora in the gut of R. speratus KMT001 in response to low temperatures of $4^{\circ}C$ or $10^{\circ}C$. Elusimicrobia, which are endosymbionts of flagellate protists, is the dominant phylum in the termite gut at ${\geq}15^{\circ}C$ but its population decreased drastically at low temperature. Four representative bacterial strains isolated from R. speratus KMT001 in a previous study produced maximum ${\beta}$-glucosidase levels within the temperature range of $10^{\circ}C-30^{\circ}C$. Elizabethkingia sp. BM10 produced ${\beta}$-glucosidase specifically at $10^{\circ}C$. This strain supported the existence of symbiotic bacteria for the low temperature habitat of the termite. This identified bacterium will be a resource for studying low temperature adaptation of termites, studying the gene expression at low temperatures, and developing an industrial cellulase at low temperature.
The cellulases production in solid state fermentation (SSF) of Trichoderma harzianum FJ1 with high cellulases productivity using cellulosic wastes was investigated. Physical and chemical conditions of the fermentation, such as moisture content, initial pH, and composition of mixed substrate (wine waste, rice straw, and soybean flour) on FPase (Filter paper activity) production were examined. The enzyme production was optimized in the conditions of moisture content of 70%, pH 5.0, 3$0^{\circ}C$, and 1:1:1 composition of mixed substrate containing wine waste, rice straw, and soybean flour. The highest activities of FPA, CMCase, Xylanase, $\beta$-glucosidase, and Avicelase in the optimized culture conditions were 15.2, 69.1, 83.9, 29.2, and 4.2 unit/g-SDW in 5 day cultivation, respectively. Economical and efficient production of cellulolytic enzymes by T harzianum FJ1 using cellulosic wastes in solid state fermentation will contribute to the biological saccharification of cellulosic wastes with enormous potential resource value in future.
Three hundred and one cellulolytic bacterial were isolated from the 148 screening sources such as decomposed wood, soil, compost and leaf mold. Among them, strain KL-6 was found to have the highest of cellulase activity, and identified as species belonged to the genus Cellulomonas. Strain KL-6 was decompose up to 90% of the filter paper (whatman No. 1) substrate within 50 hours, and showed the colony halo formation (11 cm). The activities of CMCase (67 unit/ml), FPase (70 unit/ml) and ${\beta}-glucosidase$ (0.68 unit/ml) were obtained when this strain was cultured for 50 hrs at $30^{\circ}C$. Glucose was not found in detectable amounts at the FP medium. The optimum composition of nutrient medium for the cell growth by strain KL-6 was sucrose 0.5%, yeast extract 0.1%, $(NH_4)_2HPO_4\;0.1%$, $K_2HPO_4\;0.1%$, $MgSO_4{\cdot}7H_2O\;0.01%$, $CaCl_2\; 0.01%$, NaCl 0.6%, $CaCO_3\;0.1%$ and the optimum pH and temperature were 7.0 and $30^{\circ}C$, respectively.
The dried cinnamon was extracted with enzymes, salts, sugars and additives in order to find the most effective extraction material. Enzymatic hydrolysis of cinnamon suspension with cellulase, hemicellulase, pectinase, ${\beta}-1.4-glucosidase$, tannase and lipase showed a little increase of their cinnamic aldehyde contents. Solid yield, antioxidant activity and degree of browning were increased in hemicellulase treatment. Acid and alkali extraction of cinnamon showed a some increase in solid yields and antioxidant activity was increased by addition of glucose and Na-ascorbate. Cinnamic aldehyde contents and degree of browning were increased in extraction with Na-citrate addition.
In order to utilize natural cellulosic materials as a fermentative substrate, saccharification of a various kind of native cellulosic materials was performed by using cellulase from the isolated strain, Pseudomonas sp. LBC-505 which potently produced cellulase complex and xylanase. Cellulase complex production was repressed by the low concentration of glucose, induced by cellulosic compounds such as CMC, wheat bran and rice straw et al. and showed to be highest on the PY-CMC medium containing 5% (w/v) wheat bran instead of CMC. Optimal temperature for enzyme reactions of CMCase and xylanase was $50^{\circ}C$, and $55^{\circ}C$ for $\beta$-glucosidase. Optimal pH for these enzyme reaction was 6.6. Rate of saccharification for natural cellulose was low by the treatment of crude enzyme. Among their substrates, rice straw was the most effective substrate of enzymatic reaction in this work. After treating rice straw with 5% (v/v) HC1 and hydrolysing with crude enzyme, rate of saccharification was 18.4% (w/w) on dry substrate. Sugars of cellulosic hydrolyzate mainly contained glucose, xylose and cellobiose.
de Souza, Angelica Cristina;Carvalho, Fernanda Paula;Silva e Batista, Cristina Ferreira;Schwan, Rosane Freitas;Dias, Disney Ribeiro
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.23
no.10
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pp.1403-1412
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2013
Ethanol fuel production from lignocellulosic biomass is emerging as one of the most important technologies for sustainable development. To use this biomass, it is necessary to circumvent the physical and chemical barriers presented by the cohesive combination of the main biomass components, which hinders the hydrolysis of cellulose and hemicellulose into fermentable sugars. This study evaluated the hydrolytic capacity of enzymes produced by yeasts, isolated from the soils of the Brazilian Cerrado biome (savannah) and the Amazon region, on sugarcane bagasse pre-treated with $H_2SO_4$. Among the 103 and 214 yeast isolates from the Minas Gerais Cerrado and the Amazon regions, 18 (17.47%) and 11 (5.14%) isolates, respectively, were cellulase-producing. Cryptococcus laurentii was prevalent and produced significant ${\beta}$-glucosidase levels, which were higher than the endo- and exoglucanase activities. In natura sugarcane bagasse was pre-treated with 2% $H_2SO_4$ for 30 min at $150^{\circ}C$. Subsequently, the obtained fibrous residue was subjected to hydrolysis using the Cryptococcus laurentii yeast enzyme extract for 72 h. This enzyme extract promoted the conversion of approximately 32% of the cellulose, of which 2.4% was glucose, after the enzymatic hydrolysis reaction, suggesting that C. laurentii is a good ${\beta}$-glucosidase producer. The results presented in this study highlight the importance of isolating microbial strains that produce enzymes of biotechnological interest, given their extensive application in biofuel production.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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