• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제33권10호
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• pp.3298-3302
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• 2012

Although offline enrichment of phosphorylated peptides is widely used, enrichment for phosphopeptides using $TiO_2$ is often performed manually, which is labor-intensive and can lead to irreproducible results. To address the problems associated with offline enrichment and to improve the effectiveness of phosphopeptide detection, we developed an automated online enrichment system for phosphopeptide analysis. A standard protein mixture comprising BSA, fetuin, crystalline, ${\alpha}$-casein and ${\beta}$-casein, and ovalbumin was assessed using our new system. Our multidimensional system has four main parts: a sample pump, a 20-mm $TiO_2$-based column, a weak anion-exchange, and a strong cation-exchange (2:1 WAX:SCX) separation column with LC/MS. Phosphorylated peptides were successfully detected using the $TiO_2$-based online system with little interference from nonphosphorylated peptides. Our results confirmed that our online enrichment system is a simple and efficient method for detecting phosphorylated peptides.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2004년도 춘계학술발표대회
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• pp.190-190
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• 2004

Tissue plasminogen activator (tPA) plays important roles in the brain after excitotoxic injury. This study was conducted to produce transgenic pig harboring human tissue plasminogene activator (htPA) gene. Recombinent htPA(rhtPA) genes containing bovine-β-casein promoter (bBC) were prepared for microinjection and testified the expression level of htPA protein from the Chinese hamster ovary (CHO) cell lines before NDA microinjection into the porcine pronuclei. (omitted)

• Journal of Dairy Science and Biotechnology
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• 제31권1호
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• pp.67-73
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• 2013

Food allergy is defined as adverse reactions toward food mediated by aberrant immune mechanisms. Cow's milk allergy is one of the most common food allergies in childhood. This allergy is normally outgrown in the first year of life, however 15% of allergic children remain allergic. Cow's milk allergy seem to be associated with casein (${\alpha}_{s1}$-CN), ${\beta}$-lactoglobulin and whey protein. In addition to this, many other milk proteins are antigenic and capable of inducing immune responses. Various food processing affects the stability, structure and intermolecular interactions of cow milk proteins, as a result reduction the allergenic capacity. Heating, hydrolysis, chemical, proteolytic and other processes such as gamma-ray irradiation, high pressure, using probiotics treatments of milk to obtain hypoallergenic milk have been developed to reduce allergic reactions.

• 한국축산식품학회지
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• 제21권1호
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• pp.56-63
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• 2001

In this study, three domestic and one foreign formulas for the infants up to 5 month old were examined to detect chemical changes such as pH, reactive sulfhydryl groups(RSH) content, 5-hydroxymethylfurfral(HMF) content, available lysine content, electrophoresis, and surface color caused by heat treatment for long term storage. In the SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, A and B products showed similar pattern, while C product had a clearly distinguishable $\beta$-lacto-globulin band, but in casein, only D product showed a few strong casein band. RSH content, which indicate the extent of whey protein denaturation, ranged from 4.40 to 5.93 mmole/g protein. HMF content. which indicate the extent of Maillard reaction, ranged from 192 to 432 $\mu$mole/100g in formulas. B product showed the highest RSH and HMF content. Available lysine content ranged from 31 to 46 mg/g protein. Among them D product contain the highest available lysine content and others showed no significant difference. In conclusion, the domestic infant formulas showed higher RSH and HMF content than the foreign product and the available lysine content of the domestic products were lower than of the foreign product.

• BMB Reports
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• 제44권7호
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• pp.490-495
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• 2011

Transcription factor AP-$2{\alpha}$ involves in the process of mammalian embryonic development and tumorigenesis. Many studies have shown that AP-$2{\alpha}$ functions in association with other interacting proteins. In a two-hybrid screening, the regulatory subunit ${\beta}$ of protein casein kinase 2 ($CK2{\beta}$) was identified as an interacting protein of AP-$2{\alpha}$; we confirmed this interaction using in-vitro GST pull-down and in-vivo co-immunoprecipitation assays; in an endogenous co-immunoprecipitation experiment, we further found the catalytic subunit ${\alpha}$ of protein casein kinase 2 ($CK2{\alpha}$) also exists in the complex. Phosphorylation analysis revealed that AP-$2{\alpha}$ was phosphorylated by CK2 kinase majorly at the site of Ser429, and such phosphorylation could be blocked by CK2 specific inhibitor 4,5,6,7-tetrabromobenzotriazole (TBB) in a dose-dependent manner. Luciferase assays demonstrated that both $CK2{\alpha}$ and $CK2{\beta}$ enhanced the transcription activity of AP-$2{\alpha}$; moreover, $CK2{\beta}$ increased the stability of AP-$2{\alpha}$. Our data suggest a novel cellular function of CK-2 as a transcriptional co-activator of AP-$2{\alpha}$.

• 한국식품과학회지
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• 제32권3호
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• pp.564-569
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• 2000

가공식품중의 우유단백질 분석을 위하여 효소면역측정법, ELISA를 개발하였다. 특이 항체를 생산하기 위해 열에 안정하고 우유의 주요한 단백질인 ${\alpha}_{s1}-CN$을 토끼에 면역하였다. 항${\alpha}_{s1}-CN$ 항체를 이용하여 간접경합 ELISA를 실시한 결과 검출한계는 $0.1\;{\mu}g/mL$ 이었고 ${\alpha}_{s1}-CN$, skim milk, ${\beta}-CN$과 whey protein isolate에 대한 특이항체의 반응성은 각각 100%, 37%, 0.14%과 0.04% 이었다. 그러나 다른 우유단백질인, ${\beta}-lactoglobulin,\;{\alpha}-lactalbumin$, bovine serum albumin 과 대두단백질인 isolated soy protein 에 대해서는 거의 반응성을 보이지 않았다. 샌드위치 ELISA 결과는 검출한계가 $0.01\;{\mu}g/mL$로 간접경합 ELISA 에 비하여 10배 정도 민감해져 따라서 이를 시료 분석에 이용하였다. 시유에 1-10%의 whole CN을 첨가한 spike test 결과 whole CN의 평균 회수율이 94.8%(CV, 8.2%)으로 나타났다. 식품재료와 유가공 제품에 대한 whole CN의 정량분석을 실시한 결과 탈지유는 29%, WPI는 0.03%, 농후 요구르트는 0.25%였으며 가공치즈는 6.9%로 나타났다.

• 한국식품과학회지
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• 제34권5호
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• pp.885-888
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• 2002

본 연구의 목적은 우리나라의 식품으로 인한 알레르기 발생 빈도를 파악하며 주 알레르기 원인 식품을 파악하는 것이다. 삼성서울병원에 알레르기 증상으로 1998년 5월부터 2001년 8월까지 방문한 환자의 혈청 특이 IgE 항체를 대상 식품에 대해 CAP 시스템을 이용하여 조사하였다. 총 9054건의 CAP 검사가 난백, 난황, 우유, ${\alpha}-lactalbumin,\;{\beta}-lactoglobulin$, 카세인, 밀, 쌀, 메밀, 대두, 복숭아, 게, 새우, 돼지고기, 쇠고기, 닭고기, 참치, 연어, 고등어 및 혼합식품에 대해 1707명의 방문자를 중심으로 이루어졌다. 조사 결과 CAP 수치가 +2(0.7 U/mL) 이상인 값을 양성으로 판단하였으며 CAP 검사결과 11.3% (1022/9054건)가 양성이었다. 각 알레르기 원인 식품별로는 난백이 336건, 우유가 266건, 난황이 95건, 대두가 76건 ${\alpha}-lactalbumin$ 이 69건, 카세인이 61건, ${\beta}-lactoglobulin$이 58건, 메밀이 39건, 밀이 12건, 쇠고기 3건, 게 2건, 쌀, 새우, 돼지고기, 닭고기, 고등어 가 각각 1건, 복숭아, 참치, 연어 혼합식품이 각각 0건이었다. 우리나라에서 제일 많은 5대 알레르기 원인 식품으로 계란, 우유, 대두, 메밀 및 밀이 확인되었으며 환자 1인당 평균 2가지의 알레르기 원인 식품을 갖고 있는 것으로 확인되었다.

• 한국식품영양학회지
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• 제10권2호
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• pp.246-253
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• 1997

단백질의 종류 및 급여수준이 고콜레스테롤혈증 흰쥐의 체내 지질대사에 미치는 영향을 구명학자 1% 콜레스테롤과 0.25%의 콜산나트륨을 첨가하여 고콜레스테롤 혈증을 유도토록 조제한 실험식이에 대두단백질과 카제인의 공급수준을 달리하여 급여하고 혈청내 지질대사를 관찰하였다. 혈중 총지질 함량은 콜레스테롤 투여시 정상군에 비해 유의적으로 증가되었으며 단백질 급여로 증가가 억제되는 것으로 나타났으며 대두단백질이 더 유의적으로 억제되었다. 트리글리세라이드는 콜레스테롤 투여군이 정상군에 비해 유의적으로 증가되었으며 단백질 급여로 증가가 억제되었으며, 단백질의 종류에 따른 차이는 관찰되지 않았고 인지질 함량은 콜레스테롤 투여군이 정상군에 비해 유의적으로 감소되었다. 총 콜레스테롤 함량과 유리 콜레스테롤 함량은 정상군에 비해 골레스테롤 투여군 모두에서 유의적으로 증가되었으며, 카제인 급여군에 비해 대두단백 급여시 유의적으로 증가가 억제되는 것으로 나타났다. VLDL- 및 LDL-콜레스테롤 함량은 정상군에 비해 콜레스테롤 투여시 유의적으로 증가하였으며, 단백질 급여 수준이 증가할수록 그 증가가 억제되는 것으로 나타난 반면, HDL-콜레스테롤 함량은 콜레스테롤 투여로 인해 유의적으로 감소되었으며 대두단백질이 카제인에 비해 감소 정도가 유의적으로 억제되었다. 이상의 결과에서 단백질의 종류와 급원이 지질함량에 영향을 미치므로써 고콜레스테롤 혈증을 예방·치료하기 위하여 단백 급여, 특히 대두단백 급여가 중요한 요인으로 작용할 것을 사료된다.

• Journal of Dairy Science and Biotechnology
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• 제27권2호
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• pp.7-16
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• 2009

본 연구는 소비자가 추구하는 친환경 기능성 자연 치즈제품의 다양한 아이템 개발을 위해 녹차를 자연 치즈에 접목시킴으로써 녹차의 약리 효과가 부여된 기능성 치즈의 개발 가능성 검토를 위해 실시되었다. 이 녹차 첨가 자연 치즈는 약 4개월간 숙성하면서 유산균의 생육과 pH, 질소화합물의 변화 및 단백질의 분해도 측정 및 카테킨 함량과 관능평가를 통하여 제품의 품질 평가를 실시하였다. 유산균 수는 숙성 12주까지 녹차 1.0% 이상을 첨가한 구에서 대조구에 비해 다소 낮은 유산균 수를 보였으나, 숙성 16주에는 대조구와 녹차 첨가구의 유산균 수 차이가 없었다. pH 5.0~5.3이던 것이 숙성 15주에는 pH 5.9~6.3 범위를 나타냄으로써 숙성이 진행됨으로 점차 상승하였다. 치즈의 숙성 기간 중 질소화합물의 변화는 비단백태 질소화합물(NPN)의 경우 숙성 시작보다 단백질 함량이 증가하였고, WSN과 NCN에 비해 다소 많이 함유되어 있었다. 전기영동 결과, 치즈의 숙성이 진행됨에 따라 $\alpha_s$-casein, $\beta$-casein 및 $\kappa$-casein 등 모든 종류의 casein이 점진적으로 분해되었고, 특히 $\alpha_s$-casein은 숙성 8주 후부터는 거의 분해되어 다른 casein에 비해 더 빠른 속도로 분해되는 것을 알 수 있었다. 카테킨 화합물의 종류로는 epigallocatechin(EGC), catechin(+catechin), epicatechin(EC), epigallocatechin gallate(EGCG), epicatechin gallate(ECG)등 5종이 동정되었으며, 이 중 EGC 함량이 12.39 mg%로 나타났다. 치즈에 함유된 총 카테킨 함량은 녹차 첨가량에 따라 증가하였으며, 치즈의 총 카테킨 함량은 각각 24.1, 46.0 및 103.9 mg%이었다. 녹차 첨가구 중 가장 선호도가 높은 구는 녹차 1.0% 첨가구로 맛 2.61, 외형은 2.28, 향미는 2.44, 조직은 2.33의 평가를 받았으나, 첨가구 간의 유의한 차이는 없었다. 치즈의 향미는 대조구 및 첨가구간에 유의적 차이를 보이지 않았다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 녹차를 첨가한 아펜젤러 치즈에서 치즈로 이행된 카테킨 성분이 숙성 종료 후에까지도 치즈 내에 일정량 보전됨이 확인되었고, 녹차 첨가는 아펜젤러 치즈의 숙성 과정에 크게 영향을 미치지 않았으나, 맛과 외관, 물성 등 관능적 기호도를 떨어뜨리는 결과를 가져와 향후 자연 치즈 제조 시 첨가 수준 및 가공 방법을 달리하는 등 관능적 특성 향상을 위한 추가적인 연구가 이루어 진다면 녹차 함유 기능성 자연 치즈의 제품 개발이 가능할것으로 기대되었다.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제64권3호
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• pp.481-499
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• 2022

This study aims to determine the effects of D-methionine (D-Met) isomer and the methionine precursor 2-hydroxy-4-methylthiobutanoic acid i (HMBi) supplementation on milk protein synthesis on immortalized bovine mammary epithelial cell (MAC-T). MAC-T cells were seeded using 10-cm dishes and cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium/F12 (DMEM/F12) basic medium. The basic medium of DMEM/F12 was replaced with the lactogenic DMEM/ F12 differentiation medium when 90% of MAC-T cells reached confluency. The best dosage at 0.6 mM of D-Met and HMBi and incubation time at 72 h were used uniformly for all treatments. Each treatment was replicated six times wherein treatments were randomly assigned in a 6-well plate. Cell, medium, and total protein were determined using a bicinchoninic acid protein assay kit. Genes, proteomics and metabolomics analyses were also done to determine the mechanism of the milk protein synthesis pathway. Data were analyzed by two-way analysis of variance (ANOVA) with supplement type and plate as fixed effects. The least significant difference test was used to evaluate the differences among treatments. The HMBi treatment group had the highest beta-casein and S6 kinase beta-1 (S6K1) mRNA gene expression levels. HMBi and D-Met treatments have higher gene expressions compared to the control group. In terms of medium protein content, HMBi had a higher medium protein quantity than the control although not significantly different from the D-Met group. HMBi supplementation stimulated the production of eukaryotic translation initiation factor 3 subunit protein essential for protein translation initiation resulting in higher medium protein synthesis in the HMBi group than in the control group. The protein pathway analysis results showed that the D-Met group stimulated fructose-galactose metabolism, glycolysis pathway, phosphoinositide 3 kinase, and pyruvate metabolism. The HMBi group stimulated the pentose phosphate and glycolysis pathways. Metabolite analysis revealed that the D-Met treatment group increased seven metabolites and decreased uridine monophosphate (UMP) production. HMBi supplementation increased the production of three metabolites and decreased UMP and N-acetyl-L-glutamate production. Taken together, D-Met and HMBi supplementation are effective in stimulating milk protein synthesis in MAC-T cells by genes, proteins, and metabolites stimulation linked to milk protein synthesis.