한국의 임상검체와 자연환경에서 분리된 Cryptococcus neoformans 58주에 대한 혈청형과 세포외효소 생성능에 관한 셍물학적 특성을 조사하였다. 환자로부터 분리된 임상균주 51주 중 48주는 혈청형 A (94.1%) 였으며 2주는 혈청형 B (3.92%),그리고 나머지 1주는 혈청형 D (1.96%)였다. 자연환경에서 분리된 7주는 비둘기 분변에서 분리된 것들이며 모두 혈정형 A였다. 모든 균주는 proteinase와 phnospholipase를 생성하였고, 또한 API-ZYM system을 이용한 19종류의 효소생성능 시험에서는 alkaline phosphatase, esterase (C4), esterase lipase (C8), leucine arylamidase, acid phosphatase, naphthol-AS-BI-phosphohydrolase, $\alpha$-glucosidase, 그리고 $\beta$-glucosidase를 생성하였으나, N-acetyl-$\beta$-glucosarninidase는 39주 (67.2%)에서만 생성하였다. 혈청형 B로 동정된 2주와 혈청형 A로 동정된 균주중 1주는$\beta$-glucuronidase를 생성하였다. 본 연구에 사용된 총21종류의 효소 생성능 시험을 기초로 하여 생물형을 구분하였는데, 모두 4가지의 유형을 나타내었고, 또한 임상과 환경균주에서 혈정형과 생물형 특성간의 유의한 상관성를 나타내었다.
밀기울 발효에서 효소회수의 모델로 Aspergillus niger를 고체상태로 발효시켜 조사하였다. 발효시킨 밀기울에서 증류수로 효소추출 효율은 초산 완충액, 구연산 완충액, 구연산-인산 완충액 및 5% 메탄올 처리보다 높았다. 따라서, 추출 용매로 증류수를 이용하여 최적 조건을 상세히 검토하였다. 최적 조건은 고체와 액체 용매를 1:5의 비율로 증류수로서 세 번 세척하였을 때에 최대 회수율을 0.025 U/g으로 확보하였다.
Lower termites need symbiotic microbes for cellulose digestion. Elizabethkingia miricola strain BM10 has been proposed as a symbiotic microbe that assists in low-temperature digestion and metabolism of Reticulitermes speratus KMT1, a termite on Bukhan Mountain, Seoul, Korea. In E. miricola strain BM10, β-glucosidase genes expressed at 10℃ were identified, and the psychrophilic enzymatic characteristic was confirmed by heterogeneously expressed proteins. Crude β-glucosidase in the culture broth of E. miricola strain BM10 showed specific enzymatic properties, and its substrate affinity was 4.69 times higher than that of Cellic CTec2. Among the genes proposed as β-glucosidase, two genes, bglB_1 and bglA_2, whose gene expression was more than doubled at 10℃ than at 30℃, were identified. They were heterogeneously expressed in Escherichia coli and identified as psychrophilic enzymes with an optimal reaction temperature of about 20℃-25℃. In this study, E. miricola strain BM10, a symbiotic bacterium of lower termites, produced psychrophilic β-glucosidases that contribute to the spread of the low-temperature habitat of a lower termite, R. speratus KMT1.
The GUE6 was isolated from ethyl acetate fraction of Glycyrrhiza uralensis and confirmed as liquiritin. Liquiritin(LQ) treated with ${\beta}$-glucosidase from plant(Prunus dulcis) and bacteria(Lactobacillus pentosus) crude enzymes. The ${\beta}$-glucosidase activities of crude enzymes were 229.8 U/g(Prunus dulcis) and 19.17 U/ml(Lactobacillus pentosus), respectively. Liquiritin(LQ) biotransformed into liquiritigenin(LQG) by ${\beta}$-glucosidase from crude enzymes. The EtOAc fraction(GUE6) and the converted product were identified as liquiritin and liquiritigenin, by TLC chromatogram, $^{1}H$-NMR and $^{13}C$-NMR.
The cellabiase (${\beta}$-glucosidase) gene in a Cellulomonas sp. CS1-1 was cloned into E. coli HB101 using the vector plasmid pBR322, and the expression of the gene in E. coli studied. The chromosomal DNA of the cellulomonas was digested by seveal restriction enzymes, each of which has only one cleaving site in plasmid pBR322. The recombinant plasmid, pSB2, created with Sal I frament, was expressed for the cellobiase gene in E. coli. The recombiant plasmid was estimated to contain 6.4 Kb foreign DNA at the Sal I site of plasmid pBR322 and the inserted DNA was mapped by single and double digestion with several enzymes. E. coli HB101(pSB2) has slowly grown in a mineral liquid medium containing cellobiose as a sole carbon source. The cellobiase activity in the transformed E. coli was 132 units per liter, which is equivalent to one twenty fifth of that in doner strain Cellulomonas sp. CS1-1. The transforned cell with plasmid containing cellulase gene grow well in the LB mediuns. The synthesis of cellobiase in the strain, E. coli HB101 (pSB2), was inhibited by glucose and at high concentration of cellobiose, and induced by cellobiose at low concentration.
A potent α-glucosidase inhibitor (compound I) was isolated from coffee brews by activity-based fractionation and identified as a β-carboline alkaloid norharman (9H-pyrido[3.4-b]indole) on the basis of mass spectroscopy and nuclear magnetic resonance spectra (1H NMR, 13C NMR, and COSY). The norharman showed potent inhibition against α-glucosidase enzyme in a concentration-dependent manner, with an IC50 value of 0.27 mM for maltase and 0.41 mM for sucrase. A Lineweaver-Burk plot revealed that norharman inhibited α-glucosidase enzyme uncompetitively, with a Ki value of 0.13 mM.
A total of 10 cellulase-producing bacteria were isolated from soil samples irrigated with paper and pulp mill effluents. The sequencing of 16S rRNA gene revealed that all isolates belonged to different species of genus Bacillus. Among the different isolates, B. subtilis IARI-SP-1 exhibited a high degree of ${\beta}$-1,4-endoglucanase (2.5 IU/ml), ${\beta}$-1,4-exoglucanase (0.8 IU/ml), and ${\beta}$-glucosidase (0.084 IU/ml) activity, followed by B. amyloliquefaciens IARI-SP-2. CMC was found to be the best carbon source for production of endo/exoglucanase and ${\beta}$-glucosidase. The ${\beta}$-1,4-endoglucanase gene was amplified from all isolates and their deduced amino acid sequences belonged to glycosyl hydrolase family 5. Among the domains of different isolates, the catalytic domains exhibited the highest homology of 93.7%, whereas the regions of signal, leader, linker, and carbohydrate-binding domain indicated low homology (73-74%). These variations in sequence homology are significant and could contribute to the structure and function of the enzyme.
김치는 한국인의 대표적인 발효식품으로서 정장 작용이 있다고 여겨져 왔다. 그러나 이를 입증하는 객관적인 자료가 미비한 상태이다. 이에 본 연구에서는 김치의 섭취가 인체의 장내 미생물에 미치는 영향을 조사하였다. 인체 실험대상자는 10명으로 실험기간중의 이들의 식이는 생균제, 항생제, 유산균 발효 제품을 제외한 자유식을 섭취하게 하였다. 실험 기간은 10주로 2주 간격으로 김치 비섭취 및 섭치 기간을 반복했으며 섭취 기간 중에는 매일 200 g의 김치를 섭취하게 하였다. 각 기간별로 분변의 장내 미생물 균총 분포도(Bacteroides, Bifidobacterium, Escherichia coli, Streptococcus, Lactobacillus, Leuconostoc, Staphylococcus, Clostridium perfringens), 변의 pH, 수분 함량 및 $\beta-glucosidase$, $\beta-glucuronidase$ 등의 효소활성도를 조사하였다. 조사 결과 김치의 섭취 기간 중 김치에 존재하는 젖산균인 Lactobacillus와 Leuconostoc의 수가 장내에서 유의적으로 증가하였으며(p<0.05) 그 외 조사된 다른 균총수의 변화는 유의적이지 않았다. 장내 유해효소로 알려진 $\beta-glucosidase$와 $\beta-glucuronidase$의 수준은 김치 섭취시에 유의적으로 감소하였다(p<0.05).
인삼 근계(근권, 근면, 근내부)로부터 ginsenoside Rb1 전환효소인 ${\beta}$-glucosidase 생산 균주(BGB)를 분리하였다. 인삼 근계부터 분리된 BGB 28균주의 계통학적 특성을 확인한 결과, 근권에서 Stenotrophomonas 속(3균주), Pseudoxanthomonas 속(1균주), Bacillus 속(1균주)로 확인되었다. 근면로부터 분리된 BGB는 Stenotrophomonas 속(16균주), Streptomyces 속(1균주), Microbacterium 속(1균주)이며, 근내부는 Stenotrophomonas 속(3균주), Lysobacter 속(2균주)를 포함하는 다양한 계통군이 확인 되었다. 특히 인삼 근계로부터 분리된 BGB 균주의 90%가 Stenotrophomonas 계통군에 속하는 특징을 나타내었다. 근권으로부터 분리된 4KR4 균주는 108.17 unit의 ${\beta}$-glucosidase 활성을 나타내었으며, ginsenoside Rb1을 Rd, Rg3 그리고 minor ginsenoside Rh2로 전환되었다. 4KR4 균주는 Stenotrophomonas rhizophila e-$p10^T$ (AJ293463)와 99.65%의 높은 상동성을 나타내었다. 본 연구에서 분리된 ginsenoside 전환세균 4KR4 균주의 계통학적 위치와 표현형적 특징, 균체 지방산조성, 생리 생화학적 특성을 검토한 결과, Stenotrophomonas sp. 4KR4 (=KACC 17635) 균주로 확인되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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