보리 맥아로부터 발견된 서로 다른 알파아밀라제 동질효소(AMY1, AMY2)는 80%에 달하는 높은 아미노산 서열의 상동성을 보이지만, 두 효소의 특성은 서로 달라 AMY1 효소는 낮은 농도의 칼슘 조건에서 최대 활성을 보이는 반면, AMY2 효소는 높은 칼슘이온 농도에서 높은 활성을 나타낸다. 또한 BASI (Barley ${\alpha}$-Amylase/Subtilisin Inhibitor) 단백질은 AMY2 효소만을 특이적으로 저해한다. 따라서 본 연구에서는 AMY1과 AMY2 효소의 유전자를 I, II, III의 세 부위로 나눈 후, 제한효소 처리에 의해 일부 부위를 상호 치환한 4종의 chimera 효소를 추가로 제조하고, Pichia pastoris 균주에서 대량 발현하였다. 이들 효소의 특성을 비교한 결과, 제 I 부위만이 상호치환된 AMY211 및 AMY122 효소의 경우, AMY1과 AMY2의 중간적 칼슘 의존성을 나타내었으며, BASI에 의한 저해효과는 AMY2의 제 I, II 부위를 포함하는 AMY221 효소에서만 관찰되었다. 따라서 보리 아밀라제의 제 I 부위 및 제 II 부위에 존재하는 아미노산 잔기들이 칼슘 의존성 및 BASI와의 결합에 중요한 역할을 담당하는 반면 제 III 부위는 이들 효소의 활성 차이에 영향을 미치지 않음을 확인하였다.
보리 맥아로부터 발견된 서로 다른 알파아밀라제 동질효소(AMY1, AMY2)는 80%에 달하는 높은 아미노산 서열의 상동성을 보이지만, 효소적 특성은 서로 매우 다르다. 따라서 본 연구에서는 staggered extension process(StEP) 기술을 이용하여 AMY1과 AMY2 유전자가 조합된 5종의 chimera 효소를 제조하고, 각각의 특성을 비교하여 총 8개 부위(I~VIII)의 영향을 확인하였다. 결과적으로, AMY-D2, D8, E12 chimera 효소의 경우, AMY1과 AMY2의 중간적 칼슘의존성을 보였으며, BASI(barley $\alpha$-amylase/subtilisin inhibitor) 단백질에 의한 저해효과는 AMY-E10 효소에서만 관찰되었다. 한편 AMY-C6의 경우, AMY1과 유사한 효소특성을 보였으며, AMY-E10은 AMY2 형태의 칼슘의존성을 나타내었다. 따라서 보리 아밀라제의 제 II, III, IV부위가 BASI와의 상호작용에 중요한 역할을 담당하며, 제 III, V, VI, VII부위는 칼슘의존성에 부분적인 영향을 미치는 것으로 판단하였다.
본 연구에서는 산사 발효액의 품질특성 및 항산화 및 소화활성 효과를 평가하였다. 산사 발효액의 수분함량은 $39.3{\pm}0.06%$이었으며, 조회분 $0.20{\pm}0.01%$, 조지방 $1.40{\pm}0.59%$, 조단백질 $1.77{\pm}0.04%$이었다. 그리고 산사 발효액의 총페놀 함량 분석 결과 $3,015{\pm}250$(GAE ${\mu}g/g$)로 나타났다. 색도 분석에서 L값은 79.24으로 나타났으며, a값과 b값은 각각 1.58과 31.28으로 측정되었다. 다양한 항산화 평가 모델(DPPH, FRAP, 환원력, ABTS)을 통하여 산사 발효액의 항산화 활성을 측정한 결과, 산사 발효액의 농도가 증가함에 따라 항산화능이 유의적으로 증가하는 것으로 나타났다. 한편, 산사 발효액의 혈당 조절능을 평가하기 위해, Porcine pancreas, Human saliva 및 Bacillus licheniformis 기원의 ${\alpha}$-amylase와 효모 기원의 ${\alpha}$-glucosidase에 대한 추출물의 저해 활성을 조사한 결과, ${\alpha}$-amylase에서는 저해활성을 보이지 않은 반면 ${\alpha}$-glucosidase에서는 10.4%의 저해활성을 보였다. 산사 발효액의 단백분해능을 측정한 결과, 대조품으로 사용한 pancreatin보다 우수한 활성을 나타내었다. 산사 발효액의 우수한 생리활성을 나타내는 성분에 대해서는 더욱 연구가 필요할 것으로 사료되며, 이러한 결과로 보아 산사 발효액을 소화제 등의 천연소재로 이용할 수 있을 것으로 사료된다. 따라서 산사의 발효액을 제조 시 기능성 향상을 위한 발효공정의 개선 및 최적화 등의 추후 연구가 필요한 것으로 사료된다.
The purpose of this research was to investigate the inhibitory effect of jicama extract on ${\alpha}$-glucosidase activity, ${\alpha}$-amylase activity, and postprandial hyperglycemia in streptozotocin (STZ)-induced diabetic mice. Jicama extract showed prominent inhibitory effects against ${\alpha}$-glucosidase and ${\alpha}$-amylase. The $IC_{50}$ values of jicama extract against ${\alpha}$-glucosidase and ${\alpha}$-amylase were $0.083{\pm}0.004$ and $0.091{\pm}0.017mg/mL$, respectively. The increase in postprandial blood glucose levels was more significantly suppressed in the jicama extract-administered group than in the control group of both STZ-induced diabetic and normal mice. Blood glucose levels of the control group increased to $383.75{\pm}11.54$ and $402.50{\pm}15.32mg/dL$ at 30 and 60 min after a meal and decreased to $349.67{\pm}11.62mg/dL$ at 120 min. However, postprandial blood glucose levels were significantly decreased, when diabetic mice were fed with jicama extract ($342.00{\pm}15.73$, $367.00{\pm}13.00$, and $329.67{\pm}12.43mg/dL$ at 30, 60, and 120 min, respectively). Furthermore, the area under the curve was significantly decreased with jicama extract administration in diabetic mice (P<0.05). Therefore, these results indicate that jicama extract may help decrease postprandial blood glucose level by inhibiting ${\alpha}$-glucosidase.
The hyperthermophilic archaebacterium Thermococcus profundus Isolated from a deep-sea hydrothermal vent system, produced several amylolytic enzymes such as extracellular amylase and pullulanase, intracellular a-1,4-91ucosidase in respone to the presence of complex carbohydrates In the growth medium. This strain showed high activities on 0.5% maltose than on complex carbohydrates One of the amylases was partially purified by ammonium sulfate precipitation, DEAE-Toyopearl chromatography. The amylase exhibited maximal activity at pH 5.5 and 80$^{\circ}C$, and was stable in the range of pH 5.5 to 9.5 and up to 80$^{\circ}C$ for 30 min. The enzyme activity was no dependence on Ca2+ and not inhibited by detergents. The amylase hydrolyzed soluble starch, amylose, amylopectin and glycogen to produce maltose and maltotriose with trace amounts of glucose, but not pullulan and ${\alpha}$-, ${\beta}$-, ${\gamma}$-cyclodextrin. Malto-oligosaccharides ranging from maltotetraose to maltoheptaose were hydrolyzed in an endo fashion.
직접채취(直接採取)한 3종(種)의 벌꿀을 표준으로 하여 시판(市販)꿀의 당조성(糖組成), 효소력(酵素力) 및 화분수(花粉數)를 조사비교(調査比較)한 결과(結果)는 다음과 같다. 1. 시판(市販)꿀의 전당함양(全糖含量)은 표준꿀보다 약간 많았다. 2. 표준꿀의 화분수(花粉數)는 시판(市販)꿀보다 약 5배(倍)나 많았다. 3. 표준꿀은 시판(市販)꿀보다 ${\alpha}-amylase$는 5배(倍), ${\beta}-amylase$는 2배(倍), protease activity는 평균 2배(倍)나 높았다. 4. 이상(以上)의 결과(結果)로 보아 시판(市販를)꿀은 sugar honey이거나 synthetic honey가 일부 들어 있는지 의심스럽다. 그래서 표준꿀에 대한 조사(調査)를 충분(充分)히 해서 판정기준(判定基準)을 설정(設定)하여 불량시판(不良市販)꿀이 없도록 해야겠다.
생대두를 이용한 발효장류의 개발을 위한 기초조사로서 대두의 처리조건을 찾고저 처리방법 [생콩(A), 수침탈각(B), 건열처리(C) 및 습열처리(D)]을 달리한 대두의 일반성분과 효소활성변화를 검토하였다. 그 결과 일반성분 중 수분함량은 A, D구가 B, C구 보다 $2.0{\sim}3.0%$, 조지방 함량은 A, B구가 C, D구 보다 약 2%, 조단백질 함량은 C, D구가 A, B구 보다 $1.16{\sim}1.74%$, 조섬유 함량은 A구가 B, C, D구 보다 $0.11{\sim}1.41%$ 많았으나, 회분은 B, C, D구가 A구 보다 0.49% 많았다. ${\alpha}-amylase$, ${\beta}-amylase$, protease, lipase 활성도는 생콩(A) 및 수침탈각(B) 구가 전열처리(C) 및 습열처리(D)구 보다 약 $2{\sim}5$배 이상 높았다. Trypsin inhibitor 활성도 크기는 $B(56.7{\sim}119.2%)>A(42.9{\sim}95.6%)>D(32.9{\sim}39.6%)>C(20.8{\sim}38.3%)$구 순이었다.
치커리의 종근으로 치콘을 재배하여 엽색이 노란색과 붉은색인 다섯 가지 종류의 치콘 추출물에 대한 항산화효과 및 혈당강하효과와 단백분해능을 측정하였다. DPPH free radical 소거능으로 항산화활성을 측정한 결과, 실험에 사용한 모든 시료가 우수한 항산화 활성을 가지고 있었으며 특히, 엽색이 노란색인 네 종류 (Kibora, Metafora, Vintor, Halifax)의 치콘보다 엽색이 붉은색인 Redoria종이 1 mg/mL의 농도에서 94.2%의 높은 항산화 활성을 나타냈다. 치콘 추출물의 혈당 조절능을 평가하기 위해, Porcine pancreas, Human saliva 및 Bacillus licheniformis 기원의 $\alpha$-amylase와 효모기원의 $\alpha$-glucosidase에 대한 추출물의 저해 활성을 조사한 결과, $\alpha$-amylase에서는 저해활성을 보이지 않은 반면에 $\alpha$-glucosidase에는 17.5~38.6%의 저해활성을 보였다. 치콘의 단백분해능을 측정한 결과, 실험에 사용한 다섯 종류의 치콘추출물 모두 대조품으로 사용한 Pancreatin보다 우수한 활성을 나타냈으며 항산화 활성과 마찬가지로 Redoria 추출물의 활성이 가장 우수하였다. 이러한 결과로 보아 치콘을 항산화제나 소화제 등의 천연 소재로 이용할 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구에서는 한국인에게 적합한 비만 개선책을 찾고자 지방 흡수억제 기천뿐만 아니라 과잉의 탄수화물 흡수억제가 함께 작용하는 분화억제에 대한 지방흡수 억제 물질과 율무 열수에서 ${\alpha}$-amylase 활성 저해에 대한 탄수화물 흡수 억제물질이 첨가된 비만 개선 식이조성물이 동물 실험 시 체중 증가가 억제됨을 확인하였다. 호박의 열수 추출물을 ethyl acetate로 추출하여 췌장 lipase 활성 저해를 확인하였으며, 호박의 ethyl acetate 추출물을 농축하여 silica gel column chromatography와 C-18 column chromatography를 이용하여 활성 저해 물질을 분리하였다. 또한 율무 열수는 chloroform으로 추출하여 호박 열수와 같은 방법으로 분리하여 ${\alpha}$-amylase 활성 저해를 확인하였다. 3T3-L1 분화억제 확인 실험에서는 3T3-L1에 분화 유도물질만 처리한 경우 지방 세포로 분화되어 세포내에 지방축적이 일어났지만, 분화 유도물질과 호박 추출물을 동시처리 결과 지방 세포로의 분화가 호박 추출물 $120\;{\mu}g/mL$ 처리 시약 5% 이하로 일어났으며, 세포내에 지방축적도 거의 일어나지 않았다. 동물실험에서 고지방 식이와 비만개선용 식이조성물을 동시에 섭취한 군의 체중 증가가 고지방 식이만 섭취한 군보다 13% 정도 감소함을 확인할 수 있었고, 비만개선용 식이 조성물을 8주간 경구 투여한 뒤 간 기능 지표와 혈액학적 지표 및 흰쥐의 행동학적 소견에서 차이를 나타내지 않아 비만개선용 식이조성물이 경구 투여에 의한 안전성이 있는 것으로 확인되었다. 이들 결과를 종합하면, 호박의 췌장 lipase 활성 저해물질과 율무의 ${\alpha}$-amylase 활성 저해물질을 첨가한 비만개선용 식이조성물이 동물 실험에서 체중 증가를 효과적으로 억제할 수 있음을 관찰하였으며, 이는 비만 환자들의 다이어트 식이로 유용할 것으로 사료되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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