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Effect of Activation Method and Culture Medium on the Development of Porcine Nuclear Transfer Embryo using Fetal Fibroblast

  • Im, Gi-Sun;Yang, Byoung-Chul;Park, Jin-Ki;Kim, Hyun-Ju;Chang, Won-Kyung;R. S. Prather;B. N. Day
    • 한국동물번식학회:학술대회논문집
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    • 한국동물번식학회 2001년도 춘계학술발표대회
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    • pp.66-66
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    • 2001
  • Since the first birth of pig derived from embryonic cells by nuclear transfer, many researches to produce cloned pig have been carried out. Recently, two reports about the birth of somatic cell cloned pigs using in vivo oocytes and also Betthauser et al. (2000) reported the birth of somatic cell cloned pigs using in vitro oocytes. So here we investigated the effect of activation method and culture medium on in vitro development of porcine nuclear transfer embryo using fetal fibroblast. Oocytes derived from slaughter house obtained ovaries were matured for 42 to 44 h in TCM 199. Matured oocytes were denuded using 0.1% hyaluronidase and then Oocytes with the first polar body were used for enucleation by aspirating the first polar body and adjacent cytoplasm in TCM 199 supplemented with 7.5 $\mu\textrm{g}$ cytochalasin B. Petal fibroblast cells were prepared from 35 days old fetus. To be used as donor cells, fetal fibroblast cells were serum starved for 3 to 5 days and then isolated into single co:1 by trypsinization. Nuclear transfer embryos were fused using 2 times 1.25㎸ for 30$mutextrm{s}$. Fused NT embryos were activated with calcium ionophore (CI) and 6-dimethyl-aminopurine (6-DMAP). Activated oocytes were cultured in NCSU 23 or BECM 3 for 6 days. There was no significant difference between chemical activation and no chemical activation for blastocyst development rate(11.6 vs. 14.8%). However, cell number was significantly higher when NT embryos were activated with CI and 6-DMAP (31.2 vs. 22.6). When NT embryos were cultured in NCSU 23 or BECM 3, blastocyst development rate was 16.4 and 13.2%, respectively, and cell number was 31.5 and 24.1, respectively. These results suggest that chemical activation after fusion and culture in NCSU 23 could increase cell number of porcine NT embryos.

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척추 신경의 허혈성 손상 예방을 위한 허혈성 전처치의 효과 (Effect of Ischemic Preconditioning for Preventing Ischemic Injury of the Spinal Cord)

  • 홍종면;차성일;송우익;홍장수;임승운;임승운;임승평
    • Journal of Chest Surgery
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    • 제34권11호
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    • pp.823-830
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    • 2001
  • 배경: 흉부나 흉복부 대동맥 수술중 대동맥 혈류의 일시적 차단에 의해 유발되는 낮은 혈류압으로 인한 척추신경의 허혈성 손상에 의한 하지마비는 심각한 수술 합병증으로 남아 있다. 심장이나 뇌에 있어서 잠깐 동안의 허혈성 자극을 주는 허혈성 전처치는 이어지는 장기간의 허혈성 손상을 이길 수 있는 내성을 유발하는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 돼지 모델을 이용하여 이러한 허혈성 내성이 척추신경의 허혈성 전처치를 통하여도 생길 수 있는지의 여부를 알아보고자 하였다. 대상 및 방법 : 실험은 세 군으로 나뉘어 시행되었다 : sham 군(n=3), 대조군(n=6)과 허혈성 전처치군(n=8). Sham 군에서는 척추 신경의 허혈성 손상 없이 좌측 개흉술 만을 시행하였다. 대조군과 허혈성 전처치군은 30분간의 대동맥 차단을 통한 척추신경의 허혈성 손상이 가해졌다. 하지만 허혈성 전처치군은 48시간전에 20분간의 허혈성 자극이 선행되었다. 24시간 후에 신경학적 검사를 시행하였으며, 조직 병리와 MPA (malonedialdehyde) spectrophotometry 검사를 위하여 척추 신경을 취득하였다. 결과: 허혈성 손상 24시간 후에 행하여진 신경학적 검사에서 대조군과 허혈성 전처치군 사이에 통계학적으로 유의한 차이가 있었다(p=0.028). 조직병리와 MDA 검사에서는 통계적으로 유의한 차이를 얻을 수 없었으나, MDA 검사상 경계선상의 통계적 유의성은 보이고 있었다. 결론: 본 돼지 실험 연구를 통해 비록 실험 동물들이 걷거나 설 수 있을 정도의 완전한 척추신경의 회복을 보이지는 못했으나, 허혈성 전처치가 척추신경의 30분간의 허혈성 손상에 대하여 견딜 수 있는 내성을 유발시키는 것을 알 수 있었다. 허혈성 전처치가 기존의 척추신경의 허혈성 손상을 보호하기 위한 방법들과 병행될 때 상승 보호 효과를 얻을 수 있으리라 기대되며, 이에 대한 실험들이 뒷받침되어야 할 것이다.35.81 $\textrm{mm}^2$(Level 1), 181.88$\pm$34.74 $\textrm{mm}^2$(Level 2)로 두 위치에서 단면적은 남녀간에 유의한 차이가 있었다(p 0.05). 기관의 각각의 위치에서 내경과 단면적은 연령군에 따라 고연령층에서 증가하는 추세를 나타내었으나 통계적인 의미는 없었다. 결론: 한국 정상 성인의 기관내경과 단면적의 크기는 성별에 따라 통계적으로 유의한 차이가 있었으나 연령에 따른 차이는 없었고, 전산화 단층촬영은 기관의 내경과 단면적의 크기를 얻는데 비교적 정확하고 안전한 방법이라 생각된다.의한 약물학적 전처치는 재관류 후 심근기능 회복에 유익한 효과를 나타냈으며, 이러한 전처치 효과는 교감신경계 신경전달물질의 고갈이나 $\alpha$1-수용체 차단제에 의해 소멸되는 것으로 보아 전처치에 의한 심근보호효과는 교감신경계 전달물질 및 $\alpha$1-수용체를 통해 유도됨을 알 수 있다.380$\pm$71 mL, p=0.05).방 및 치료에 도움이 될 수 있는 물질을 개발할 가치가 있다고 사료된다을 공급한 대조구에 비해 높았다. 어미의 성 성숙 및 산란은 두 번의 실험에서 대조구보다 저염분구에서 원만히 이루어졌다. 암컷 성숙 개체의 경우 1차 실험은 대조구 6마리, 저염분구 12마리였으며, 2차 실험은 대조구 5마리, 저염분구 12마리였으며, 2차 실험은 대조구 5마리, 저염분구 14마리로서 성숙유도에 있어 염분의 조절에 의한 성숙이 이루어진 것을 알 수 있다. 산란 시기는 1차 실험에서 대조구나 저염분구의 산란 개시 시점이 거의 동일한 데 비해, 2차 실험에서는 저염분구가 대조구에 비해 대략 20일 정도 빠르게 나타났다. 또한 산란에 가입한 암컷 어미의 개체수도 두 차례의 실험 모두 저염분구가 많았다. 또한

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Fabrication of MFISFET Compatible with CMOS Process Using $SrBi_2Ta_2O_9$(SBT) Materials

  • You, In-Kyu;Lee, Won-Jae;Yang, Il-Suk;Yu, Byoung-Gon;Cho, Kyoung-Ik
    • Transactions on Electrical and Electronic Materials
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    • 제1권1호
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    • pp.40-44
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    • 2000
  • Metal-ferroelectric-insulator-semoiconductor field effect transistor (MFISFETs) were fabricated using CMOS processes. The Pt/SBT/NO combined layers were etched for forming a conformal gate by using Ti/Cr metal masks and a two step etching method, By the method, we were able to fabricate a small-sized gate with the dimension of $16/4{\mu}textrm{m}$ in the width/length of gate. It has been chosen the non-self aligned source and drain implantation process, We have deposited inter-layer dielectrics(ILD) by low pressure chemical vapor deposition(LPCVD) at $380^{circ}C$ after etching the gate structure and the threshold voltage of p-channel MFISFETs were about 1.0 and -2.1V, respectively. It was also observed that the current difference between the $I_{ON}$(on current) and $I_{OFF}$(off current) that is very important in sensing margin, is more that 100 times in $I_{D}-V_{G}$ hysteresis curve.

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Cd$^{2+}$ 에 의한 닭의장풀의 식물 독성에 Indole acetic acid가 미치는 영향 (The Effects of Indole Acetic Acid (IAA) on Cd$^{2+}$_induced Physiological Toxicities in Commelina communis L.)

  • 이준상
    • 환경생물
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    • 제21권3호
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    • pp.234-239
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    • 2003
  • 3주간 정상적으로 생장한 닭의장풀을 Hoagland용액 ($\pm 100 \mu M \;Cd^{2+}, 100 \mu M \;Cd^{2+}+10 \mu M\;IAA,100 \mu M\; Cd^{2+}+100 \mu M \; IAA,100 \mu M \; Cd^{2+} +1 \mu M \; IAA)$에서 3주간 수경재배 한 후 생장, 기공개폐, 엽록소 함유량, 엽록소 형광 및 수분퍼텐셜을 조사하였다. Hoagland용액에 $Cd^{2+}$ 처리시 3주 동안 2.0 cm 생장했으나, 대조구는 7.0 cm생장했다. 반면에 카드뮴에 10$\mu$M IAA를 같이 처리한 경우는 3주 동안 3.7 cm자랐으며, 100 $\mu$M IAA를 같이 처리하면 3주 동안 5 cm그리고 1mM IAA의 경우는 3.3 cm 생장하였다. $Cd^{2+}$은 기공열림을 촉진하였으며, 아울러 IAA첨가는 $Cd^{2+}$을 단독처리 한 경우보다 기공열림을 더 촉진하였다. 엽록소 함량의 변화는 $Cd^{2+}$ 처리구에서 뚜렷하게 관찰되었다. Cd$^{2+}$ 처리구는 대조구에 비해 3주 때 엽록소 함량이 13%억제되었다. $Cd^{2+}$과 IAA를 함께 처리한 경우는 10 $\mu$M과 100 $\mu$M에서는 뚜렷한 엽록소 함량의 변화가 관찰되지 않았다. 1 mM IAA 처리구에서는 약 9% 엽록소 함량이 감소하였다. 모든 처리구에서 정상적인 엽록소 a/b비율을 보여주었으나, $Cd^{2+}$처리구에서 3주 배양한 경우 2.38을 보여주었다. Fv/Fm 측정 결과 $Cd^{2+}$ 처리는 Fv/Fm값에 영향을 주었다. 카드뮴 처리 1주에는 큰 변화가 없었으나,2주와 3주 처리시에는 대조구에 비해 각각 9%와 11% 억제되었다. $Cd^{2+}$처리시 약 3주 후에 약 67%가 수분퍼텐셜이 감소하였다. 반면에 $Cd^{2+}$에 IAA를 다양한 농도에서 첨가하면 수분퍼텐셜의 변화는 미미하였다. 위의 결과들로부터 IAA는 식물의 생장, 엽록소 함량,Fm/Fv그리고 수분퍼텐셜에서 $Cd^{2+}$에 의한 심각한 독성을 뚜렷하게 완화시키는 것으로 사료된다.

가잠난각의 구조 및 물리화학적 특성에 관한 연구 (Studies on the Structure and Some Physical and Chemical Properties of the Egg Shell in the Silkworm, Bombyx mori L.)

  • 마영일;박광의
    • 한국잠사곤충학회지
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    • 제24권2호
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    • pp.55-72
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    • 1983
  • 가잠의 휴면성을 난각의 조직학적 특성을 보고자 난각층에 대한 전자현미경상을 관찰하였고 또한 난각의 물리화학적 특성에 대해서는 수분투과성, 염산투과성, 염색성 및 난각 구조단백질을 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 난각구조를 전자현미경으로 보면 뚜렷이 4층으로 되어 있으며, 또한 휴면난과 비휴면난 및 즉침난 사이에 구조적인 차이가 보인다. 즉 외층 밖에 또 다른 전자밀도가 낮은 얇은 층이 휴면난에는 존재하고 있으나 비휴면 및 즉침난에는 이 층을 볼 수 없다. 2. 산난후 20∼24시간째의 휴면난과 비휴면난 및 즉침난 사이에 난각염산투과성의 차이를 보면 휴면난에 비해 즉침난 및 비휴면난이 모두 투과성이 높았고 또한 난령이 지남에 따라 휴면난은 투과성이 떨어지는데 반하여 즉침난 및 비휴면난은 투과성이 높아졌다. 3. 휴면난의 ether 처리난은 무처리난에 비해 난각의 투과성이 변하는 것으로 보아 난각물질 중 ether 용출물이 존재한다. 4. 난각의 수분투과성도 염산투과성에 있어서와 같이 휴면난이 즉침난 및 비휴면난에 비해 수분투과성이 낮았다. 5. 가잠난각의 조직화학적 특성은 단백질과 당에 대한 염색성이 높아 난각에는 단백질과 당이 풍부하며 특히 지질에 대한 염색성은 거의 음성이나 내층으로 갈수록 진하게 염색되었다. 6. 누에의 난각점착물은 PAS-alcian 반응으로 보아 mucopolysaccharides이다. 7. 난각 구조단백질 중 SH단백질에 대한 전기영동상에 있어서 휴면난과 비휴면난 모두 2개의 band가 인정되나 비휴면난의 경우 이동거리가 빠른 band는 매우 흔적적이며 또한 영동거리도 원점으로부터 멀리 이동하여 두 처리간에 minor component에 차이가 보였다. 8. SH단백질에 대한 아미노산조성에 있어서는 휴면난 및 비휴면난 사이에 큰 차이를 인정할 수 없었고 난각단백질중 SH단백질의 구성아미노산에는 glycine이 가장 많고 cystine함량은 적었다. SI K-2 는 Penicillin, Ampicillin과 Cephalothin에 저항성을 나타냈고 ts-U171, A-N92와 A-N115는 이 세항생제에 민감성을 나타냈다. Temperature - sensitive돌연변이균주를 42$^{\circ}C$에서 24시간 배양후에 28$^{\circ}C$로 옮기어 배양한 결과 ts-U601, -U603, -U604와 -U171은 성장을 더 이상하지 않았다.ta-exotoxin을 생산했는데, 48시간 배양 배지 $m\ell$당 70$\mu\textrm{g}$을 분비한 균주는 BTK-1이고, BTK-37 균주는 $m\ell$당 88$\mu\textrm{g}$(6.1$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$) BTK-35 균주는 $m\ell$당 81$\mu\textrm{g}$(5.2$\times$$10^{8}$ Cells/$m\ell$)을 생산했고. 그외는 모두 70$\mu\textrm{g}$미만이었다. 3. Beta-exotoxin과 B. thuringiensis 균체을 동시에 per os, interaperitoneal injection, subcuntaneous injection, nasal cavity inoculation, intracerebral injection을 120시간 처리했어도 치사효과를 나타내지 않았다.삼각호마법 and Japan#s 병음한자변환방식 have prospect to be prevalent. The following suggestions can be made from these results, 1) All the

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점토광물 급여가 한우교잡우의 산육능력 및 육질에 미치는 영향 (Effect of Scoria, Quartz Porphyry and Oak Charcoal Powder Feeding on the Meat Quantity and Quality of Fattening Cross Bred Hanwoo Bulls)

  • 강수원;손용석;박남건;진신흠;고서봉
    • 한국축산시설환경학회지
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    • 제5권3호
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    • pp.157-170
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    • 1999
  • This study was conducted to investigate the effects of Scoria, Quartz porphyry and Oak charcoal powder feeding by 1% level of concentrate on the fattening cross bred bulls(5/8 Korean Native Cattle, 2/8 Charolais, 1/8 Brahman germ plasma) Feeding trial was conducted with 4 treatment groups which were T1(Full feeding of concentrate and roughage for 12 months), T2(T1 and Scoria addition), T3(T1 and Quartz porphyry addition) and T4(Oak charcoal addition) for 360 days, consisting of 32 heads whose initially weights were about 299.7kg. The results obtained are summarized as follows; 1. During the over-all period, average daily gains by T3, T4, T2 and T1 were 1.024, 0.987, 0.977kg and 0.964, respectively, without a significant difference by treatments. 2. Concentrate intakes per body weight and TDN intakes required per unit of kilogram gain were lower in addition agent groups than in control, and in all the treatments feed efficiency was higher at early stage for 360 fattening day than at end stage. 3. Carcass weight, dressing percent, back-fat thickness and loin eye muscle area by treatments were 330.9 to 348.4kg(average 340.3kg), 55.2~56.2(average 55.8%), 0.41~0.55(average 0.46cm)and 76.0~80.9$\textrm{cm}^2$(average 77.6$\textrm{cm}^2$), respectively, and were improved in addition agent groups than in control. 4. Meat quality grade is higher in addition agent groups than in control, and heads of 1st grade by treatments was 3, 2, 1 and none in T4, T2, T3 and T1, respectively. 5. Incidence heads of diseases by treatment were not apparently different, but diseases of digestive system was decreased in addition agent groups than in control. 6. The nitrate nitrogen content of fattening bull dung which collected in rectum were 0.082~0.089% (average 0.084%), and the content in addition agent groups was smaller than in controll. 7. Income was higher in order of T4, T3, T2, and T1 and incomes of treatment groups were grater than that of control group by 21.4 to 33.5 percent. According to the above results it may be concluded that fattening bulls may be required to feed no more than 1% of Scoria, Quartz porphyry and Oak charcoal powder based on the concentrate feeding level during the fattening period(12 to 24 month of age) to produce high quality meat and increase income.

Amino Acids Supplemented with Culture Medium Stimulated On Development of Porcine Embryos

  • Lee, Y.S.;S.H. Song;Lee, S.N.;K.H. Chung;Park, C.S.
    • 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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    • 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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    • pp.80-80
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    • 2002
  • This study was carried out that to investigate the effects of amino acids supplemented with culture medium on development of porcine embryos cultured in vitro. Cumulus oocyte complexes (COCs) were cultured in the maturation medium containing hormones (0.5$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ LH, 0.5$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ FSH and 1$\mu\textrm{g}$/$m\ell$ estradiol-17${\beta}$) for 20-22 h at 39$^{\circ}C$ in an atmosphere of 5% CO$_2$in air. Subsequently, COCs were cultured in hormone-free maturation medium for 20-22 h. After maturation for 40-44h, oocytes were removed cumulus cells by pipetting and cultured with epididymal sperm for 5 h in the mTBM. Embryos obtained were divided in 4 groups (1) cultured in NCSU 23 containing 0.4% BSA to blastocyst stage(Control), (2) essential amino acids (EA), (3) non-essential amino acids (NA), (4) mixture of essential and non essential amino acid (EA+NA). All treated groups(2-4) were used a glucose free NCSU 23 medium supplemented with pyruvate (0.33 mM), lactate (4.5 mM) to morula stage. From morula to blastocyst stage embryos of all treated groups were cultured in NCSU 23 containing 0.4% BSA. The rates of cleaved oocytes at 48 h after IVF were from 82% to 88% in the groups of control, EA, NA and EA+NA, respectively. The in vitro developmental rates into blastocysts in the groups of EA and EA+NA were significantly (P<0.05) higher than those of group of control (35.1, 35.4 vs. 19.4%, respectively), however, no significant (P<0.05) between control and NA. In conclusion, supplemented with essential amino acid or mixture of essential and non essential amino acid in the culture medium at morula stage increased the rate of development to blastocyst on in vitro produced porcine embryos.

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결구상추의 수경재배시 배양액내 전질소량 조절이 엽중 nitrate 함량에 미치는 효과 (Effect of Total Nitrogen on the Nitrate Content of Crisp Lettuce Leaf in Deep Flow Culture)

  • 김혜진;김영식
    • 생물환경조절학회지
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    • 제8권3호
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    • pp.216-221
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    • 1999
  • 결구상추의 엽중 nitrate 함량을 줄이고자 수확 7일전 Yamazaki 상추 배양액에 포함되어있는 질소의 양을 조절하였다. Yamazaki 상추 배양액내의 질소를 1배(6.Sme/$\ell$), 3/4배(4.gme/$\ell$), 2/4배(3.3me/$\ell$), 1/4배 (1.6me/$\ell$)로 처리해 주었다. 배양액 pH는 전반적으로 7.2~8.4로 높은 수준을 유지하였다. 질소의 양이 많을수록 pH와 EC는 상승하였다. 엽중 nitrate 함량은 1/4배 처리구에서 가장 낮았으며, 다른 처리구 사이에는 유의성이 없었다. 처리에 관계없이 결구되지 않은 겉잎이 결구된 잎보다 nitrate 함량이 낮았다. 결구부의 무게, 폭 및 지상부중은 1/4배 처리구에서 가장 낮은 경향을 보였다.

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Di- and Sesqui-Terpenoids Isolated from the Pods of Sindora sumatrana and Their Potential to Inhibit Lipopolysaccharide-Induced Nitric Oxide Production

  • Jang, Dae-Sik;Min, Hye-Young;Jeong, Yeon-Hee;Lee, Sang-Kook;Seo, Eun-Kyoung
    • Archives of Pharmacal Research
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    • 제27권3호
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    • pp.291-294
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    • 2004
  • Activity-guided fractionation of the n-hexane and ${CHCl_3}-soluble$ fractions of Sindora sumatrana using a bioassay based on the inhibition of lipopolysaccharide (LPS)-induced nitric oxide (NO) production by inducible nitric oxide synthase (iNOS) in murine macrophage RAW 264.7 cells led to the isolation of the known compound, $(+)-7{\beta}-acetoxy-15,16-epoxy-3$, 13(16), 14-clero-datriene-18-oic acid (2) as an active constituent. In addition, a new trans-clerodane diterpenoid, (+)-2-oxokolavenic acid (1), together with six known compounds, (+)-3, 13-clerodadiene-16,15-olide-18-oic acid (3), $(+)-7{\beta}-acetoxy-3$,13-clerodadiene-16,15-olide-18-oic acid (4), $(+)-7{\beta}-acetoxy-16-hydroxy-3$,13-clerodadiene-16, 15-olide-18-oic acid (5), ${\beta}-caryophyllene$ oxide (6), $clovane-2{\beta},9{\beta}-diol (7),{\;}and{\;}caryolane-1,9{\beta}-diol$ (8) were isolated and found to be inactive. The structure of compound 1 was determined using physical and spectroscopic methods such as 1D and 2D-NMR experiments. The known compounds 2-8 were identified by the spectroscopic data and by comparison with the published values. Of eight isolates (1-8), only compound 2 exhibited an iNOS inhibitory activity with $IC_{50}$/ value of $51.6{\;}\mu\textrm{m}M$.

마늘중 지용성 성분의 암세포증식 억제효과 연구 (A Study on the Cytotoxic Activity of Garlic(Allium Sativum) Extract Against Cancer Cells)

  • 손흥수
    • Journal of Nutrition and Health
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    • 제23권2호
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    • pp.135-147
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    • 1990
  • 본 연구는 유기용매로 추출한 마늘의 항암성 성분을 in vitro에서 흰생쥐의 백혈병성 임퐈모 세포인 L$_{1210}$과 P${388} 및 인체 직장암 세포인 HRT-18과 인체 결장암 세포인 HCT-48과 HT-29 또한 invivo에서 흰쥐 복수 육종암세포인 sarcoma-180세포를 대상으로 선별 시험한 것이다. S-180을 제외한 각 암세포는 in vitro에서 마늘추출물을 농도별로 첨가한 배양액에서 배양시험하였다. 암세포의 증식억제효과는 마늘의 석유에텔추출물이 알코올추출물보다 높았다. 마늘의 지용성 성분은 in vitro에서 흰생쥐의 백혈병성 임퐈모 세포, 인체 직장암 및 결장암 세포에 대해 항암효과물을 나타내었다. 각 암세포의 증식률은 첨가한 마늘추출물의 농도가 증가할수록 감소한 영향을 보였다. Petroleum ether/ethyl ether/acetic acid(90:10:1, v/v/v)의 전개용매로 사용한 TCL에서 분리한 유효한 활성성분의 Rf치는 0.18이었고, 정제하지 않은 마늘추출물보다 L$_{1210}$세포에 대해 2.3배 높은 활성을 나타냈다. S-180 암세포로 유발한 흰생쥐에 마늘 추출물을 투여한 군이 투여하지 않은 군보다 생존 기간이 1.5내지 2배 가량 연장효과를 보였다. S-180 암세포를 함유하고 있는 흰 생쥐에 마늘추출물(3ug/head)을 복강내 주사하고 3시간 후에 관찰한 결과 S-180 암세포의 뚜렷한 형태변화를 관찰하였다.

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