Cloning and Transcription Analysis of Sporulation Gene (spo5) in Schizosaccharomyces pombe

Sporulation in the fission yeast Schizosaccharomyces pombe has been regarded as an important model of cellular development and differentiation. S. pombe cells proliferate by mitosis and binary fission on growth medium. Deprivation of nutrients especially nitrogen sources, causes the cessation of mitosis and initiates sexual reproduction by matting between two sexually compatible cell types. Meiosis is then followed in a diploid cell in the absence of nitrogen source. DNA fragment complemented with the mutations of sporulation gene was isolated from the S. pombe gene library constructed in the vector, pDB 248' and designated as pDB(spo5)1. We futher analyzed six recombinant plasmids, pDB(spo5)2, pDB(spo5)3, pDB(spo5)4, pDB(spo5)5, pDB (spo5)6, pDB(spo5)7 and found each of these plasmids is able to rescue the spo5-2, spo5-3, spo5-4, spo5-5, spo5-6, spo5-7 mutations, respectively. Mapping of the integrated plasmid into the homologous site of the S. pombe chromosomes demonstrated that pDB(spo5)1, and pDB(spu5)Rl contained the spo5 gene. Transcripts of spo5 gene were analyzed by Northern hybridization. Two transcripts of 3.2 kb and 2.5kb were detected with 5kb Hind Ⅲ fragment containing a part of the spo5 gene as a probe. The small mRNA(2.5kb) appeared only when a wild-type strain was cultured in the absence of nitrogen source in which condition the large mRNA (3.2kb) was produced constitutively. Appearance of a 2.5kb spo5-mRNA depends upon the function of the meil, mei2 and mei3 genes.

Schizosaccharomyces bombe 포자형성 유전자(spo5)의 Cloning 및 전사조절

분열효모 S. pombe의 포자형성은 배지상의 질소원 고갈에 의해 유도되어지며 감수분열로부터 포자형성에 도달하는 과정에는 다수의 특이적인 유전자들이 관여하고 있다. 본 실험에서는 S. pombe genomic library 형질 전환법으로 spo5 유전자를 상보하는 clone을 screening한 후, sport 유전자를 단리하였다$^{8)}$ . 전포자막 구축에 필수적인 sport 유전자를 보유하는 약 5kb의 DNA 단편을 대장균, 효모 shuttle vector pTB248'의 Hind III 부위에 subclonning하였다. 그리고 이 DNA단편으로부터 제한 효소 지도를 작성하여(Fig. 2), spo5 변이체의 상보 능력을 조사하였다 (Fig. 3). 결과에서 서술한 바와 같이 상보능력은 동일하였으며, 이러한 상보성 실험 결과로부터 삽입된 단편상의 유전자 발현은 벡터의 promoter로부터 전사가 일어나는 것이 아니라, 삽입 단편상의 효모 고유의 promoter 에 의해서 전사가 일어나는 것으로 확인되었다. 따라서 clone화 한 DNA 단편 배열상에는 변역영역뿐만 아니라 promoter 영역이 포함된 것으로 판단되었다. 결실변이 도입 해석으로부터, spo5 유전자는 Sma I 부터 Hind m의 3kb 영역에 존재하였고 (Fig. 3), Nor-thern분석에 의해서 spo5 유전자의 전사를 조사한 결과, spo5 -mRNA는 Sma I 부터 Hind III 의 3kb 영 역에서 약2.5kb 크기로 검출되었다. 이 단편의 유전해석으로 부터 약 2.5kb의 전사산물은 최대 800개의 아미노산 잔기를 code하는 단백질로 판단되었다(Fig. 4). 그리고, Northern 분석법에 의해서 spo5 유전자의 전사를 조사한 결과, 서술한 바와 같이, 이 유전자는 질소기아 조건하에서만 유전자가 발현되는 것을 확인하였다(Fig. 4-2.5kb 단편).었다. 그리고 Edman법으로 결정한 PPIase의 39아미노산 잔기가 이 배열내에 완전히 보존되어 있었다. 이 결과로부터 이 ORF는PPIase구조 유전자의 1/3에 해당하는 단편임을 확인하였다. training system to a dangerous work like as "Interruption-free live-line work exchanging COS(Cut-Out-Switch)". In this program, the user works with a instruction on the window and speaker and can't work other tasks until each part of the task completed. The workers using this system can use their hands and viewpoint movement as he is in a real environment but the trainee can't use all parts and senses of a real body with the current VR technology. Despite of this weak point, when we consider the trends of improvement in electrical devices and communication technology, we can say that 3D graphic VR application has a high potentiality.) 야생화 초지(NWP, IWP)는 관행 혼파초지나 하번초 혼파초지에 비하여 동물상이 다양하고 많게 분포되었으며 그중 외국산 야생화초지의 동물 개체수가 가장 많게 나타났다. 이상의 결과를 종합할 때, 야생화 초지는 봄부터 가을까지 야생화가 지속되었고, 양서류 및 곤충의 개체 수가 증가되었던 것으로 보아 야생화 초지의 공익적인 측면에서의 활용 가능성도 클 것으로 기대된다