생쥐 배반포기 내부세포괴를 체외에서 분리 배양하여 분화가 억제된 내부세포괴 유래 증식세포를 미분화 상태에서 무한히 증식할 수 있는 전능성을 지닌 배아간세포(embryonic stem cell : ES cell)로 확립하고자 본 연구를 실시하였다. BCF1 생쥐 배반포를 10% FCS, 0.1mM nonessential amino acid, 0.1mM sodium pyruvate, 0.1mM 2-mercaptoethanol과 1,000U/ml LIF(세포분확억제인자)가 첨가된 DMEM 기초배양액에 mitomycin-C를 처리한 STO 단층배양세포에서 배양하여 분화가 억제된 내부세포괴 유래의 배아간세포를 분리하였다. 배반포를 STO 단층배양세포에서 4일간 배양하여 내부세포괴세포를 신선한 STO 단층배양세포에서 약 5일 간격으로 반복하여 계대배양을 실시하였다. 5차 계대배양후 뚜렷한 분화 양상없이 배양된 미분화 세포군에 대한 alkaline phosphatase (AP)염색과 체외분화능 검색을 실시한 결과 적색의 미분화 AP 양성반응이 확인되었으며 체외에서 배분화 형성이 유도됨에 따라 배양된 배아간세포주의 다능성 배아간세포 특성을 확인할 수 있었다.

The appearance and function of corpora lutea(CL) with a central cavity in the ovaries of Korean Native Cattle (KNC) were investigated endocrinologically and histochemically. The CL were enucleated from KNC ovaries within 2~3 hrs local slaughter house and classified with central cavity CL or not. Enzymatically dispersed luteal cell (1$\times$106 live cell/ml of Dulbecco's Modified Eagle Media) with or without cavity of CL cultured at 37$^{\circ}C$ in a humidified incubation (5% CO2 : 95% air) for 72hr. A central cavity in the CL of KNC was found in 58.8% of CL-1, 34.9% of CL 2, 39.1% of CL-3, and 11.1% of CL-4, respectively. There were no significant difference between protein content of CL with and without a central cavity. Mean progesterone secretion after 36h of in vitro luteal cell culture were significantly (p<0.05) higher in CL with central cavity than without cavity. However, the luteal cavitic wall was composed of the connective tissue band of the reticular and collagen fibers and then these connective tissue band extended into the CL with cavity. These results suggest that the central cavity of CL may be caused infertility in KNC.

Two experiments were conducted to study the production of in vitro fertilized bovine embryos and the viability of blastocysts cryopreserved by vitrification. In experiment 1, production rate of in vitro matured bovine oocytes after fertilization in medium containing bovine oviduct epithelial cells (BOEC), cumulus cells and granulosa cells to blastocysts were 18.4, 14.6 and 13.1%, respectively. Developmental percentages of blastocysts produced at day 6, 7 and 8 were 8.5, 10.6 and 15.2% respectively. Hatching rate of bovine embryos produced was 60.0%. In experiment 2, post-thawed surviving embryos in a vitrification solution consisting of 7.15M ethylene glycol, 2.5 mM ficoll and 0.3 M sucrose were 36.4% (56/154). Also, survival rate of bovine embryos after exposed to vitrification solution at 1, 2, 3, 4 and 5 min were 84.0, 88.0, 71.0, 48.0 and 24.0% respectively.

소 체외수정란의 체외배양 체계는 현재 완전히 확립되지는 않은 상태로서 8∼16 세포기 발육억제현상, 수정란의 파편하 현상, 성장지연 등 여러 가지 문제점들이 현 배양체계에서 나타난다. 그러나 hepler cell들과의 공배양에 의해 이러한 문제점들은 상당히 극복되며 또한 체외발생의 촉진 및 공배양된 수정란의 이식에 의해 임신율도 향상된다. 현재 소 체외수정란의 공배양에는 난관상피세포가 가장 널리 이용되나 이러한 시스템은 몇가지 문제점이 있다. 즉, primary culture를 확보하기 위하여 신선한 조직을 주기적으로 채취해야 하며 따라서 난관채취에 시간이 소요되고, 불편하며 또한 공배양에 이용되는 세포들이 균일하지 않은바 난관상피세포에 따라 배 발생 촉진작용에 변이를 나타내기도 한다. 그러나 확립된 cell line을 이용할 수 있다면 이러한 난관상피세포의 이용에서 나타나는 문제점들이 해결될 수 있다. Buffalo Rat Liver cell은 이러한 목적에 이용될 수 있는 cell line 중의 하나로서 이들은 여러 가지 성장인자(growth factor)를 분비하는 것으로 알려져 있다. 따라서 본고에서는 소 체외수정란의 공배양을 위한 BRL(Buffalo Rat Liver)cell의 이용성, 이용방법 및 이용에 있어서 고려하여야 할 요인들에 대하여 살펴보고자 한다.

가토 20마리의 혈액중 혈소판의 수를 수정 전후로 조사한 결과, 수정전과 비교하여 수정후 1일부터 유의하게 감소하였으며 (26.84%, P<0.01), 이러한 감소는 수정후 5일까지 계속되었다. 수정후 5일동안 혈소판의 감소율과 혈소판의 최저치를 수정란의 수와 비교한 바, 이들간의 유의한 상관관계(r=0.5032)가 있었다. 가토수정란 (2세포기) 각각 30∼40개를 5마리의 비장적출수란가토의 난관에 이식한 다음, 혈소판수의 변화를 조사한 결과, 이식전에 비해 이식후 90분 (P<0.025)과 135∼270분 (P<0.025)에 유의한 감소를 확인하였따. 특히 수정란 이식후 180분경에 가장 크게 감소하였다 (P<0.001). 60∼70개의 2세포기 가토수정란을 24시간 배양한 다음, 배양액을 3마리의 비장적출가토에 주사한 후 혈소판의 변화를 조사하였을 때, 주사후 120분경부터 혈소판의 수가 유의하게 감소하기 시작하였다. 이들 배양액을 동결, 해동한 다음 주사한 실험에서도 유사한 결가를 얻었다. 또한 이 배양액을 비장적출생쥐에 주사한 경우에도 가토에서와 마찬가지의 혈소판 촉진현상이 나타났다. 혈소판 촉진인자(PAF)의 길항제인 kadsurenone이 첨가된 배양액에서 24시간동안 가토수정란을 배양한 다음, 이 배양액을 4마리의 비장적출생쥐에 주사한 결과, 혈소판수의 변화가 일어나지 않았다. 또한 kadsurenone이 첨가된 배양액에서는 2세포기 가토수정란의 상실기와 배반포기까지 발달율은 각각 4와 7%로 대조구의 7과 49%보다 유의하게 낮았다. 따라서 본 연구에서 가토의 초기배는 가토나 생쥐의 혈소판수를 감소시키고, 특히 길항제 처리는 이러한 혈소판 감소현상을 억제시킬 뿐만 아니라 가토 초기배발달을 억제한다는 것을 확인하였다. 결론적으로 가토초기배에서는 PAF 또는 수정란 유래의 PAF가 분비된다는 것을 알 수 있었으며, 이러한 인자는 동결처리에서도 그 기능은 전혀 변하지 않는다고 본다. 이후에 있어서 mouse LIF의 첨가는 돼지의 수정란을 배반포 이후의 단계에까지 발달시킬 수 있었다. 있어서 더 적합한 것으로 판단되었다. 5. 개발된 모형은 논 관개의 물리적 측면과 관리목표 모두를 고려한 것으로 계산된 효율은 벼, 생육 각 단계에서의 효율 비교에 양호한 방법임을 알 수 있다.은 Sharpsburg 점질양토에 대한 S.C.S 한계허용치 10ton/ha/year 이내로 나타났다. 비처리구에서의 토양유실량은 평균 2.56ton/ha/year로 높게 나타난 반면 3개의 서로 다른 추리구인 비수구, 초생수로구 및 Bromegrass구에서는 각각 0.152, 0.192 및 0.290ton/ha/year로 낮은 결과를 가져왔다. 6. 평균 침전량에 대한 L.S.D. 검정 걸과 전시험구중 비처리구가 고도의 유의차를 나타낸 반면 비수구, 초생수로구 및 Bromegrass 목초구 간에는 아무런 유의차가 인정되지 않았다. 7. 농지보전 처리구인 배수구와 초생수로구는 비처리구에 비해 낮은 침두 유출량과 낮은 토양유실량을 나타내었다.구보다 14% 절감되는 것으로 나타났다.작용하는 것으로 사료된다.된다.정량 분석한 결과이다. 시편의 조성은 33.6 at% U, 66.4 at% O의 결과를 얻었다. 산화물 핵연료의 표면 관찰 및 정량 분석 시험시 시편 표면을 전도성 물질로 증착시키지 않고, Silver Paint 에 시편을 접착하는 방법으로도 만족한 시험 결과를 얻을 수 있었다.째, 회복기 중에 일어나는 입자들의 유입은 자기폭풍의 지속시간을 연장시키는 경향을 보이며 큰 자기폭풍일수록 현저했다. 주상에서 관측된 이러한 특성은 서브스톰 확장기 활동이 자기폭풍의 발달과 밀접한 관계가 있음을 시사한다.se that were all low in two aspects, named "the Nonsignificant group". And the issues were high risk perception in general

포유동물 초기 수정란의 성판별에 있어서 biopsied 수정란의 생존성과 성판별의 정확도는 동시에 중요하다. 본 연구자들은 이미 생쥐 수정란에 있어서 biopsy와 PCR을 이용한 성판별의 효율적인 방법을 개발할 바 있다. 본 연구에서는 생쥐 수정란에서 개발된 biopsy방법 (압착방법)을 이용하여 과배란 시킨 상실배기 소 수정란으로부터 몇 개의 할구세포를 분리할 수 있었다. 할구세포가 분리된 13개의 수정란은 biopsy 후 모두 생존하였으며, 이 중 10개의 수정란은 24시간 체외배양에서 정상적인 배반포기로 발달하여 77%의 체외발달율을 나타내었다. 이어서 이렇게 분리된 할구세포에서 PCR 방법으로 수정란의 성을 판별하였는데, 분석된 13개의 수정란 중 수컷은 7개, 암컷은 6개인 것으로 판명되었다. 결론적으로 본 연구에서는 압착방법을 이용하여 상실배기 소 수정란으로부터 적은 수의 할구세포를 쉽게 분리할 수 있었으며, 또한 분리된 할구세포로부터 PCR 방법을 이용하여 소 수정란의 성을 판별할 수 있었다.

The mammalian oviduct is a place where ontogeny of an animal begins. Nowadays, however, it is possilbe to manipulate a part of physiological events occurring in the oviduct so that fertilization of gametes and early embryonic development of zygotes could proceed outside oviductal environment. Rabbit zygotes readily develop to blastocysts in a conventional culture condition. Most of the mouse fertilized eggs do so when cultured under a specific environment, e.g., in a medium containing ethylenediamine tetraacetic acid. Similarly, a significant number of zygotes from rat, sheep, pig or cattle can develop to blastocysts if they are cultured in the presence of particular component which appear to be somewhat species-specific. Instead of changing the components of medium, somatic cells including oviductal epithelial cells, have widely been used to improve mammalian embryonic development in vitro. Many investigators have reported that mammalian zygotes, whether fertilized in vivo or in vitro, could develop to blastocysts when they were cultured on a monolayer of various kinds of somatic cells or even in a somatic cell-conditioned medium. While little is known about the nature of embryotrophic factor(s) produced in vitro by somatic cells, the existence fo oviduct-specific protein(s) has consistently been demonstrated in many laboratories. Some of these proteins are reported to be associated with oviductal eggs. However, the physiological role of these proteins has still to be determined. Recently we observed that the perivitelline space of mouse oocytes was fluorescently stained with various fluorochrome-protein conjugates following ovulation into the oviducts or upon their expossure to oviductal extracts. Furthermore, it was also found that cattle or pig oviductal fluid gave similar results when examined using mouse ghost ZP. These observations lead to suggest that mammalian oviduct induces changes of biochemical properties of oocytes. Further studies are needed to clarify the nature of oviductal factor(s) and the physiological meaning of the reaction.

전능성을 지닌 우 수정란 세포배양기술 체계 확립은 가축육종에 중요한 의의를 지닌다. 이러한 체계는 1) 핵치환에 의한 다수의 클론동물 생산에 대한 기전, 2) 형질전환세포를 선발하기 위한 marker의 사용으로 효과적인 유전자 전이체계와 3) site specific 유전자 전이에 대한 기전 또는 homologous DNA서열 재조합에 의한 결손 등에 대한 기전을 이해하는데 이용될 수 있다. 우 수정란세포의 배양은 배반포 내부 세포괴, 상실배와 16∼20세포기로부터 확립하였다. 이들 모든 세포들은 생쥐 배아간 세포형태와 유사하였으며 배양시 분화와 증식에서 다능성을 나타내었다. 배양체계는 미세소적이나 배양용기, 우 도는 설치류 섬유아 세포주를 단기간 배양 또는 장기간 배양방법을 이용하였다. 유사분열시 요구되는 배양체계나 배양액 그리고 분화 억제에 대한 괄목할만한 장점은 아직 밝혀지지 않고 있다. 현재 16∼20 세포기의 배양세포의 전능성에 대해서는 알려져 있지 않다. 배양된 ICM세포 전능성은 27일간 배양한 ICM 세포로부터 4마리의 산자 생산에 의해 입증되었다.