Optimization of Lipase-Catalyzed Interesterification for Production of Human Milk Fat Substitutes by Response Surface Methodology

반응표면분석에 의한 모유대체지의 효소적 합성조건 최적화

1,3-Dioleoyl-2-palmitoylglycerol (OPO)-rich human milk fat substitute (HMFS) was synthesized from tripalmitin (PPP)-rich fraction and oleic ethyl ester by a lipase-catalyzed interesterification. Response surface methodology (RSM) was employed to optimize the presence of palmitic acid at sn-2 position ($Y_1$, %) and of oleic acid at sn-1,3 ($Y_2$, %), with the reaction factors as substrate molar ratio of PPP-rich fraction to oleic ethyl ester ($X_1$, 1:4, 1:5 and 1:6), reaction temperature ($X_2$, 50, 55 and $60^{\circ}C$), and time ($X_3$, 3, 7.5 and 12 h). The optimal conditions for HMFS synthesis were predicted at the reaction combination of $55^{\circ}C$, 3 h and 1:6 substrate ratio. HMFS re-synthesized under the same conditions displayed 70.70% palmitic acid at the sn-2 position and 69.58% oleic acid at the sn-1,3 position. Reaction product was predominantly (90.35%) triacylglycerol (TAG) was observed in which the major TAG species, OPO, comprised 31.24%.

모유대체지를 합성하기 위하여 palm stearin을 acetone fractionation으로 획득한 PPP rich fraction과 oleic ethyl ester를 기질로 사용하고, sn-1,3 위치 선택성을 가진 Lipozyme TLIM을 이용하여 에스테르 교환반응을 수행하였다. 반응 조건(반응 온도, 반응 시간, 기질의 비율)을 요인 변수로 하여 중심 합성 계획에 의한 반응표면분석을 이용하였고, 비 용매 계에서의 반응을 통해 sn-2 위치에 팔미트산의 함량이 높고, sn-1,3에 올레산의 함량이 높은 1,3-dioleoyl-2-palmitoyl glycerol(OPO) 합성 조건을 최적화 하였다. 모델에 의하여 구해진 최적화 조건은 반응온도=$55^{\circ}C$, 반응시간 =3시간, 기질비율=1:6이었고 이때 sn-2 위치의 팔미트산($Y_1$, %)의 함량은 70.70%이었고 sn-1,3 위치의 올레산($Y_2$, %) 함량은 69.58% 이었다. 최적조건에서 합성된 모유대체지를 silver ion HPLC분석 결과 SSS(5.22%), SSU(36.28%), SUU(12.94%), USU(31.24%), UUU(11.04%)로 나타났다. 한편, TAG(90.35 g/100 g), 1,3-DAG (5.66 g/100 g)와 1,2-DAG(4.00 g/100 g)로 구성되어 있었고, 1,3-DAG 가 1,2-DAG 보다 많이 생성되는 것으로 나타났다.