A Comparison Study of MMP Inhibitors' and Doxorubicin's Effects on the Apoptosis of U2OS Osteosarcoma Cell Line

U2OS 골육종 세포주의 세포자멸사에서 MMP억제제와 Doxorubicin 작용의 비교연구

Purpose: The purpose of this study was to compare the proapoptotic effects of matrix metal-loproteinase inhibitor (MMPI) and doxorubicin on wild-type p53 osteosarcoma cell line, socalled U2OS cell line. Materials and Methods: U2OS cells were treated with MMP inhibitor III (MMPI III) and doxorubicin, either respectively or simultaneously. In cells treated with doxorubicin, Fas-neutralizing antibody so called ZB4 was additionally treated to examine whether the doxorubicin played a role through the Fas/FasL pathway. Cells were analysed regarding to apoptosis and cell death by flow cytometry. Results: U2OS cells incubated with doxorubicin showed significant amount of cell death in dose-dependent manner. However, those incubated with MMPI III mostly remained viable state. In addition, there is no relationship between two drugs. Cells treated with doxorubicin and ZB4 at the same time did not show down regulation of apoptosis through inhibition of Fas/FasL pathway. Conclusion: It is important to re-examine MMP inhibitor's effect on other osteosarcoma cell line with wild-type p14 as well as wild-type p53 to evaluate its proapoptotic effect.

목적: wild-type p53 단백질을 가지고 있는 U2OS 인간 골육종 세포주의 세포자멸사에서 MMP억제제와 doxorubicin의 작용을 비교하고자 하였다. 대상 및 방법: 배양한U2OS 세포주에 Doxorubicin, MMP억제제(MMPI III)를 따로 투여한 것과 두 약물을 동시에 투여한 것을 비교하였다. 또한 Doxorubicin의 작용이 Fas/FasL 경로를 통해 유발되는지 알아보기 위해 Fas 중화항체를 doxorubicin과 함께 투여하였다. 약물을 처리하여 배양한 세포에서 발생한 세포자멸사와 세포괴사를 확인하기 위해서 유세포 검사를 시행하였다. 결과: Doxorubicin을 처리한 세포가 처리하지 않은 세포보다 약물 농도에서 더 많은 세포괴사(p=0.000)를 보였다. 이에 반해 MMPI III를 처리한 세포는 약물 농도와 반응시간에 따른 세포자멸사 및 세포괴사에서 차이를 보이지 않았다. 두 약물을 동시에 투여한 군은 그렇지 않은 군에 비해 세포 자멸사 및 세포괴사에서 차이가 없었다. Doxorubicin에 Fas 중화항체를 추가한 군과 doxorubicin 단독 투여 군 사이에 세포자멸사 및 세포괴사에서 차이가 없었다. 결론: Doxorubicin과 같이 MMP 억제제를 골육종 치료에 사용하려면 wild-type p53 뿐만 아니라 wild-type p14를 가지고 있는 골육종 세포에 대한 검사가 필요할 것으로 사료된다.