• 한국양식학회지
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• 제11권2호
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• pp.241-248
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• 1998

Vitellogenin(VTG) 합성에 미치는 A23187의 영향을 무지개송어의 배양 간세포를 이용하여 실험을 행하였다. 간세포는 2일간 배양한 후, Estradiol-$17^{\beta}$($E_2$, $2{\times}10^{-6}$M) 및 A23187 ($10^{-7)$~$10^{-5}$M)을 첨가하여 7일간 배양하였다. 그리고, $E_2$에 의한 VTG 합성시의 A23187이 미치는 영향에 대해서도 조사하였다. A23187이 미치는 영향에 대해서도 조사하였다. A23187 ($10^{-7)$~$10^{-5}$M)의 첨가에 의해 간세포에서의 VTG 합성은 농도의 증가에 따라 감소하였다.$E_2$에 의해 합성된 VTG는 A 23187 ($10^{-5}$M)의 첨가에 의해 대조군($E_2$만의 첨가)의 약 18%로 유의하게 감소하였다. 그러나,$E_2$제거로는 대조군의 약 47% 밖에 감소되지 않았다. 이러한 결과로 보아, 세포내의 저장 Ca은 번역 단계 또는 번역 후 단계를 조절함으로써, VTG 합성을 조절하는 것으로 추정된다.

• Animal cells and systems
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• 제7권3호
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• pp.227-235
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• 2003

Bisphenol A (BPA), nonylphenol (NP), and 4-tert-octylphenol (OP) are known endocrine disrupting chemicals (EDCs) with estrogenic activity in fish. This study compared the effects of BPA, NP and OP on in vitro vitellogenin (VTG) synthesis in primary cultures of hepatocytes of the Chinese minnow Phoxinus oxycephalus. The VTG secreted into the culture medium was measured using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), which we developed in this study using an antibody prepared from homogenates of Chinese minnow egg. VTG synthesis was induced by estradiol-17$\beta$ ($E_2$) and phenols (BPA, NP and OP) treatment. $E_2$ at concentrations of 10$^{-6}$ M or higher increased VTG levels significantly (P < 0.05). Exposure to 10^5\;M\;BPA\;or\;10^-4$M NP and OPinduced in vitro VTG synthesis (P < 0.01). However, $10^-3$ M BPA, NP or OP did not induce VTG synthesis. These results suggest that SPA has the highest estrogenic potential in Chinese minnow hepatocytes. Tamoxifen, an anti-estrogen, drastically blocked the production of VTG by phenols (BPA, NP and OP) suggesting that phenols (BPA, NP and OP) may act via binding to estrogen receptor (ER) in Chinese minnow hepatocytes.

• 한국수산과학회지
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• 제25권5호
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• pp.432-442
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• 1992

동남참게, Eriocheir japonicus의 난황단백전구체 합성부위를 면역조직화학적인 방법으로 구명하기 위하여, 난황단백질을 정제하고, 이 단백질에 대한 항혈청을 제작하여 난황단백질에 대한 면역학적인 성질을 밝힌 후, 난황단백전구체의 항체가 존재하는 항 난황단백혈청을 사용하여 PAP(peroxidase-antiperoxidase)법으로 생식소, 간췌장, 근육조직을 대상으로 면역조직화학 반응을 시켰다. 성숙한 암, 수혈청에 대한 면역전기영동과 Ouch-terlony 면역확산 실험에 의하여 암혈청내에는 암 특이성혈청단백질이 있음이 밝혀졌다. 암, 수혈청에 대한 항혈청과 난황형성중인 암혈청에 대한 조난황단백추출액에 대하여 면역전기영동과 Ouchte-rlony 면역확산 실험을 행한 결과, 암 특이성혈청 단백질은 난황단백전구체임이 밝혀졌다. 조난황단백추출액으로 부터 DEAE 이온교환 chro-matography와 sepharose CL-4B gel 여과법에 의하여 난황단백질을 정제하였으며, 이 난황단백질의 분자량을 sepharose CL-4B gel 여과법에 의하여 추정한 결과 분자량은 약 245,000 dalton이었다. 또한 난황단백질은 면역학적인 분석에 의하여 난황 단백질에 대한 항혈청에는 난황단백전구체에 대한 항체가 존재하고 있음이 증명되었다. 난황단백질에 대한 토끼 항혈청을 이용하여 PAP법에 의한 면역조직화학반응을 시킨 결과, 난황형성중인 난모세포와 성숙한 암참게의 간췌장은 양성반응이 나타는데 반하여 난소내의 여포세포층과 난황형성전 난모세포, 근육층 그리고 성숙한 수참게의 간췌장은 전혀 양성반응이 나타나지 않았다. 따라서 본 종의 난황단백전구체의 합성부위는 간췌장임을 알 수 있다.

• 환경생물
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• 제18권3호
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• pp.291-298
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• 2000

난황형성(vitellogenesis)은 난생동물의 번식에서 매우 중요한 과정으로 간에서 난황전구물질(vitellogenin,Vg)의 생성과 단백질 수준에서 Vg의 변형과 난자내 축적 및 난황물질(vitellin)로의 전환을 포함한다. 난황은 경골어류의 배아의 영양물질 및 삼투압 조절을 통한 부유특성의 조절에 관여한다. 척추동물의 Vg유전자는 lipoprotein계열의 유전자로 복수의 Vg유전자가 존재하며 서로 다른 크기의 Vg단백질을 암호화한다. 에스트로젠에 의해 이들 단백질이 발현되는 정도에는 차이가 있다. 난생 척추 동물의 암컷에서 에스트로젠의 조절하에 생성되는 Vg은 천연 에스트로젠 및 합성에스트로젠에 의해 어류, 양서류, 파충류, 조류 등 다양한 척추동물의 수컷 체내에서도 형성되며 수온 및 생식주기에 의존적이다. 따라서 수컷에서 일어나는 난황전구물질의 생성은 환경오염물질 가운데 여성호르몬과 유사한 작용을 하는 물질의 규명과 위해성 여부를 판정할 수 있는 생물학적 지표로서 전세계적으로 이용되고 있다. 국내의 경우 Vg유도여부를 통한 야생생태계에서 환경호르몬 오염과 동물의 번식장애에 대한 연구에 있어서 번식주기, 동물의 지리적 분포와 생물다양성의 차이에 대한 고려가 중요하다.

• 한국어류학회지
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• 제12권3호
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• pp.173-179
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• 2000

Estradiol-$17{\beta}(E_2)$와 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2, 4- D)가 난황 전구물질의 합성에 미치는 영향을 넙치 Paralichthys olivaceus 간세포의 초대 배양을 통하여 조사하였다. 배양간세포의 생존율은 배양온도 $27^{\circ}C$에 서 가장 높게 나타났으며, $15^{\circ}C$에서는 생존율이 급격히 감소하여 약 50%의 생존율을 나타내었다. $E_2$에 의한 VTG 의 합성은 $10^{-6}M$에서 최대치를 나타내었다. 2, 4-D $10^{-7}\sim10^{-5}M$의 첨가에 의해 VTG의 합성은 이루어지지 않았다. 그러나, 저농도인 $10^{-8}M$에서는 VTG의 합성이 증가하였다. $E_2$ 및 2, 4-D에 의해 합성된 VTG는 $10^{-6}M$ tamoxifen의 첨가에 의해 유의하게 억제되었다 (P<0.01). 본 연구 결과에서 $E_2$와 2, 4-D의 동시 첨가는 VTG의 합성을 억제하지 않았다. 이러한 결과는 2, 4-D의 작용이 $E_2$와 유사한 작용을 가지지만, VTG의 합성에 있어서 $E_2$ 수용체에의 작용 양식은 서로 다른 것으로 추정된다.

• 한국어업기술학회:학술대회논문집
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• 한국어업기술학회 2003년도 춘계 수산관련학회 공동학술대회발표요지집
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• pp.285-286
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• 2003

Vitelllogenin(Vg) is a sex specific protein appearing in the blood of sexually maturing female fish as well as other oviparous vetebrates. It is synthesized in the liver in response to estradiol-l7$\beta$(E$_2$). Although E$_2$ is a main induce. of Vg synthesis, other hormonal requirements have also been reported to be important in Vg synthesis(lazier et al., 1996; Peyon et at., 1997). (omitted)

• 한국잠사곤충학회지
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• 제30권2호
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• pp.96-104
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• 1988

누에 난황단백질의 주성분인 난황소(vitellin)를 분리하고 그 면역반응적 특성과 난소 이식과의 관계 및 배발생중의 양적 변화를 조사한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 누에의 용혈액 vitellogenin과 난황소는 원심분리에 이은 DEAE-cellulose column chromatography에 의해 거의 순수하게 분리되었으며 두 단백질의 polyacrylamide gel 전기영동상의 이동도는 같았다. 2. 누에의 난황소와 이의 전구물질인 용혈림프 vitellogenin은 면역반응적으로 서로 동질임이 확인되었고, 가잠의 근록곤충인 상잠(Bombyx mandarina)의 난황단백질에는 가잠의 난황소와 면역학적으로 같은 반응을 나타낸 항원이 있는 반면, 천잠(Antheraea yamamai)의 난황단백질에는 가잠과의 공통항원이 없었다. 3. 수누에에 이식한 난소에서 생성된 난황단백질에는 난황소가 결여됨이 확인되어 난황소의 합성에는 난소이외의 다른 암컷 기관에서 생성된 전구물질이 필요함을 나타내었다. 4. 배발생중의 난황소는 배자발육 후기에 주로 기관의 형성에 이용되어 배자발육 초기부터 꾸준하게 이용되는 난특이단백질(ESP)과는 이용상 다른 특성을 보였다.

• 한국양식학회지
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• 제13권1호
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• pp.79-85
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• 2000

자성 및 웅성스테로이드 호르몬들이 Vg 유전자발현에 영향을 미치는지를 미성숙 무지개송어의 배양간세포 막간을 이용하여 조사하였다. 이미 보고된 송어의 Vg gene의 염기배열을 참고로 Vg cDNA 단편(600 bp)을 증폭시킬 수 있는 primer들을 작성하였다. 이들 primer를 이용하여 증폭된 PCR 산물의 염기배열을 결정하여 송어의 Vg cDNA임을 확인하였고, RT-PCR법을 이용하여 배양간세포 그리고 E$_2$ 및 MT 처리된 송어의 간으로부터 Vg mRNA의 전사량 변화를 조사하였다. 호르몬 처리된 간세포 및 송어의 간에서 추출한 total RNA를 이용하여 RT-PCR법으로 분석한 결과 in vivo, in vitro 실험 모두에서 E$_2$ 또는 MT처리된 간세포 및 송어의 간으로부터 Vg mRNA와 Vg 단백질합성이 유도되었고, 이들의 증가 경향은 처리된 호르몬 농도 및 시간에 의존하고 있음이 밝혀졌다. 또한 progesterone, androsterone 그리고 testosterone 등의 웅성호르몬들도 Vg mRNA의 전사를 유도하고 있다는 것이 시사되었다. 이와 같은 결과로부터E$_2$ 뿐 아니라 웅성스테로이드들도 Vg mRNA의 발현을 유도하고 있음이 송어의 in vivo 또는 in vitro 실험에 의해서 확인되었다.

• 한국양식학회지
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• 제15권1호
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• pp.31-37
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• 2002

이 연구는 무지개송어, O. mykiss 간세포 배양을 이용해 합성화학물질인 2,4-Dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D)가 vitellogenin (VTG) 합성과 estrogen (E$_2$) - estrogen receptor (ER) binding affinity에 미치는 영향을 조사하였다. 간세포는 2일간 전 배양한 후에 E, (2$\times$10$\^$-6/ M) 또는 2,4-D (10$\^$-9/∼10$\^$-6/ M)를 배지에 첨가해 5일간 배양한 후, VTG과 E$_2$-ER binding affinity를 SDS-PAGE와 ELISA를 이용해 각각 조사하였다. 사용된 2,4-D의 농도는 세포의 형태, 생존력 및 DNA 함량에는 영향을 미치지 않았다. 또한, 2,4-D는 VTG의 합성에도 어떠한 영향도 미치지 않았으나 E$_2$-ER binding affinity를 억제하였다. 이 binding affinity는 2,4-D의 농도가 증가할수록 증가하는 경향을 나타내어 10$\^$-7/과 10$\^$-6/ M에서 25%와 30%를 각각 억제하였다. 이 결과들은 비록 2,4-D가 VTG의 합성에는 영향을 미치지 않지만, ER에서 xeno-estrogenic contaminant로서 행동하는 것을 제시하였다.

• 한국동물학회지
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• 제36권3호
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• pp.416-424
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• 1993

홍모기 난소에서 일어나는 난황단백질의 합성을 조사하였다. 지방체의 난황단백질합성양과 난소에 축적되는 난황단백질의 양을 rocket immunoelectorphoresis 방법과 in vitro organ culture 방법으로 조사한 결과 지방체에서의 난황단백질 합성을 흡혈 후 6시간째 부터 시작되어 24시간에 최대의 합성양을 나타낸 후 48시간 이내에 완료되었으며, 난소내로의 축적은 6시간부터 시작되어 60시간까지 계속되었다. 흡혈 후 0, 24, 48, 72시간된 난소추출물을 전기영동 및 Western blotting한 결과 24시간된 난소에서는 한종류의 난황단백질이 존재한 반면, 48, 72시간된 난소에서는 두종류의 난황단백질이 나타났다. 흡혈 후 48시간된 난소와 지방체를 $^3$H-leucine이 함유된 배지에서 배양하였을 때 지방체에서는 단백질의 합성이 거의 일어나지 않았으나 난소에서는 난황단백질을 포함한 다량의 단백질합성이 일어났다. Crossed immunoelectrophoreses의 결가 YP1과 YP2는 분자량에서는 차이를 보이나 면역성은 동일한 것으로 나타났다. 이상의 결과 홍모기에서는 난소에서도 난황단백질의 합성이 일어나는 것으로 나타났다.