Toxicity of nonlyphenol (NP) one of EDCs was studied with focus on reproduction of the crucian carp, Carassius auratus. Fishes were cultured under control and nonylphnol exposure conditions for 32 weeks. Experimental group was composed of total of 4 groups, 1 control condition and 3 nonylphenol exposure condition ($18\;{\mu}g\;NP\;L^{-1},\;37\;{\mu}g\;NP\;L^{-1}\;and\;83\;{\mu}g\;NP\;L^{-1}$). Survival rate was found to be similar in control and $18\;{\mu};NP\;L^{-1}$. However, it is lower In the $37\;{\mu};NP\;L^{-1}$ and $83\;{\mu};NP\;L^{-1}$ in comparison to the control group. Deformation of gonads was the highest in the exposure condition of $18{\mu};NP\;L^{-1}$ with the female illustrating higher ratio than the male. GSI was not much different in the male but in the female, NP exposure group illustrated lower value compared to the control group. HSI and GI did not illustrate any clear differences between the control and exposure group for both male and female. Intersex was 0% in the wild group, 4.16% in the laboratory control group, and 25.67% in the NP exposure condition with female illustrating higher compared to male. Concentration of blood vitellogenin in female illustrated no clear differences between the control and NP exposure group. However, in the male, it was higher in the NP exposure group in comparison to the control group, and illustrated higher values of vitellogenin compared to the figures found in the female of same con-centration condition.
어류의 성 성숙중의 암컷 혈액에는 수컷에서는 출현하지 않는 암컷 특이 난황 단백질, 즉 난황 전구 물질 (vitellogenin, VTG)이 출현한다. 이 물질은 자성호르몬 (17$\beta$-estradiol, E2)의 영향에 의해 간에서 합성되며 발달중인 난소에 들어간 후 난모세포의 난황물질을 구축하고, 수정 후 배 발생 중에 영양물질로써 이용된다(Wallace and Selman,1981). 또한, VTG는 미성숙한 암컷 및 수컷에 E2처리에 의해 합성되어지기도 한다(Mommsen and Walsh, 1988). (중략)
Background: The IGF system plays important roles in controlling growth, development, reproduction, and aging of organisms. Methods: To estimate maturation of the Pacific oyster Crassostrea gigas, we investigated the expression of insulin-like growth factor (IGF) system components and sex-specific genes. To determine the role of the IGF system in the growth and spawning period of female and male oysters, we examined mRNA expression levels of the C. gigas insulin receptor-related receptor (CIR), IGF binding protein complex acid labile subunit (IGFBP_ALS), and molluscan insulin-related peptide (MIP), as well as those of vitellogenin (Vg) and receptor-type guanylate cyclase (Gyc76C) in gonads of C. gigas collected between April and October, when sex can be determined visually in this species. Results: We found that MIP, IGFBP_ALS, and CIR mRNA expression levels were dependent on sex and month and were greater in males than in females. CIR and Vg mRNA expression levels were very similar among females, whereas IGF system components and Gyc76C were very similarly expressed among males. The highest expression values were observed in May, when oysters are mature; CIR and Vg mRNA expression levels were highest in females, and those of MIP, IGFBP_ALS, CIR, and Gyc76C were highest in males. Interestingly, we observed a 1:1 proportion of females to males during this period. Conclusion: Our results suggest that IGF system components, as well as Vg and Gyc76C, are associated with sexual maturation in C. gigas.
난생 생물의 알 생성유도 단백질인 비텔로제닌(viteILogenin, VTG)을 성숙한 암컷 황소개구리 (Rana catesbeiana)혈청으로부터 음이온 교환 크로마토그래피를 이용하여 정제 하였으며 정제한 비텔로제닌을 BALB/c mice에 주사하여 폴리크로날 항체를 생산하였고 이것은 protein A column으로 정제 하였다. 이렇게 정제된 폴리크로날 항체를 이용하여 황소개구리 비탈로제닌 측정용 효소면역측정법을 개발하였으며 그 측정 범위는 $12{\sim}1,560ng/mL$였다. 또한 이 효소면역측정법을 평가하기 위해 성숙한 수컷 황소개구리를 청정지역과 폐수처리장 하류 하천에서 서식하는 황소개구리 혈액 속의 비텔로제닌을 측정하였다. 그 결과 폐수처리장 하류 하천에 서식하는 수컷 황소개구리 비텔로제닌이 청정지역보다 현저하게 높게 유도됨을 알 수 있었다.
누에의 變態期 동안 貯藏蛋白質의 出現과 번데기 시기동안 각 組織에 따른 貯藏蛋白質의 分布를 살펴보기 위해 電氣泳動法, 免疫學的 方法 및 column chromatography法을 使用하였다. 혈림프의 貯藏蛋白質은 2개로 區分이 되었고, 5령 初期부터 出現하고 있으며 지방체 단백질과도 동일한 전기영동상의 移動度를 갖고 있다. 이의 量的 變化는 終令期에는 혈림프에서 높은 濃度를 유지하다. 化後에는 脂肪體에 축적이 되는 경향을 나타내며 특히 저장단백질-2가 암수에서 모두 두드러진 저장단백질의 양상을 보이고 있다. 이러한 貯藏蛋白質은 종령 末期에는 큐리클 단백질 형성에도 관여하는 것 같으며 번데기에는 中腸도 일시적으로 저장단백질을 저장하는 것 같다. 또한 貯藏蛋白質中 저장단백질-2는 vitellogenin과 정기영동 및 면역학적으로 동일한 이동도를 나타내고 있으며 특히 번데기시기동안 卵黃蛋白質의 항체에 대해 항원-항체반응을 나타내고 있어 卵形成過程에도 밀접하게 관여하는 것 같다.
Kim, Young-Ju;Kang, Hye-Eun;Cho, Gyu-Tae;Suh, Young-Sang;Yoo, Myong-Suk;Kim, Hyun-Woo
Fisheries and Aquatic Sciences
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제12권4호
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pp.276-285
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2009
Despite great commercial interest, relatively little has been described about molecular mechanism of bivalve reproduction. We investigated genes involved in ovarian maturation of the Yesso scallop, Patinopecten yessoensis. GSI index and histological analysis revealed that maturation of ovary begin in February and spawning period is from April to June which is similar to the previous study in the East Sea. As result of combination analysis of differential display RTPCR (DDRT-PCR) and histological examination, vitellogenin (Vg), ferritin (Ft) and ADT/ATP carrier protein (ACC) were identified as differently expressed genes in maturating ovary. Endpoint RT-PCR results showed that Vg is ovary-specific genes whereas Ft and ACC are expressed ubiquitously suggesting that Vg can be good molecular markers for ovarian development and sex determination in bivalves. Quantitative PCR results revealed that Vg were expressed highest during growth stage and appears to play a major role in oocyte maturation. On the contrary, expression of Ft was highest after spawning stage, which suggests that up-regulation may be involved in spawning and inactive stages in which the scallops recover from spawning. In addition, high level of the mitochondrial gene, ACC, may play a role in energy metabolism in maturating oocytes. Isolation and molecular studies of these key genes will expand our knowledge of the physiological changes from various exogenous factors including temperature, salinity, pH, even or numerous endocrine disrupting chemicals (EDCs) during reproductive cycle. In addition, further study of these genes implicates various industrial applications including the stable seed production, increased food quality, or economic aquaculture system.
기존의 미세주입 및 정자 electroporation에 의한 보다 효율적인 유전자 도입방법을 개선하여 간단하고 고효율성의 유전자 변환기술을 위한 유전자 도입장치의 시제품 개발로 다수의 난자를 전기적으로 단순화할 수 있는 상업화의 가능성을 보여주었다. 도입된 유전자는 모든 초기배에서 발현됨을 보여 주었다. 특히 난황내의 합포체세포(syncytium)에서의 transient성의 강한 발현은 전기자극에 의해 많은 수의 난자에 유전자를 도입하고 100% 발현되는 체계를 이용하여 transient 시기에서 인간 유용단백질 생산의 가능성을 타진할 수 있는 결과를 보여 주었다. 어류유전자 발현의 작동되는가를 검색하기 위해 신경세로조직특이 tubulin promoter 를 이용한 결과 gfp의 발현이 뇌주변과 척추를 중심으로 체내 전반의 신경세포내에 발현이 강하게 나타남을 보여 주었다. 한편 reporter 유전자 이외에 간세포로부터 전체 RNA를 분리시켜 vitellogenin의 분해산물인 phosvitin cDNA의 길이와 promoter지역인 1.6 kb에 대한 primer쌍들을 선정한 상태에서 PCR에 의해 각각 cDNA와 gDNA로부터 cloning 중에 있으며 human factor Ⅶ과 epidermal growth factor, vitellogenin의 3종의 target 단백 질유전자를 구축 및 검정 화인 중에 있다.
This study correlated changes in estradiol-l7$\beta$ ($E_2$), testosterone (T), 17$\alpha$,20-dihydroxy-4-pregnen-3-one (DHP), and vitellogenin (VTG) levels with changes in the gonadosomatic index (GSI) and ovarian histology during the annual reproductive cycle of the wild marbled sole, Limanda yokohamae. Synchronous oocyte development occurs in this fish. Ovary maturity was classified into four periods, based on histological observations: the spawning (December to February), post-spawning (February to April), recovery (May to August), and vitellogenic (September to November) periods. Seasonal changes in the GSI were inversely correlated with water temperatures and reflected the degree of ovarian maturity. Plasma VTG levels were correlated with changes in the GSI, which increased from September to a peak in January, and levels remained comparatively high until February. Estradiol-17$\beta$ was at baseline levels (<0.11 ng/mL) during the spring and summer, and peaked rapidly (1.55$\pm$0.445 ng/mL) from October to January. Plasma T and DHP levels had a similar profile; they rose markedly during the spawning period and remained low (or were not detectable) from spring through autumn. These data indicate that changes in plsama steroid hormones and VTG levels are correlated with the annual ovarian activity of the marbled sole. Based on these results and published reports, it appears that in this species DHP is the most important maturation-inducing steroid and that T is also related to final maturation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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