Tobacco plants(Nicotiana tabacum cv. NC82) transformed with TMV CP cDNA were self-fertilized until 8th generation (R$_{8}$), and the transgenic plants from 6th to 8th generation were analized for their resistance to tobacco mosaic virus(TMV) and stability of the gene expression. The 6th generation of the plants(R$_{6}$) showed high resistance(81-91 %) to TMV at eight weeks after artificial inoculation with the virus. The transgenic cell line 601 was the most prominant in the expression of resistance. 98 % of the plants showed no symptom without any agronomic phynotepe variation when they were inoculated with the virus in a experimental field. However, 2% of the plants were revealed as delay type of symptom with mild mosaic on a few leaves. The viral resistance in greenhouse tests of the 7th generation (R$_{7}$) was 54-64%, and the number of delay type plants were increased than that of 6th generation plants. In the 8th generation, 81 % of the plants was complete resistant to the virus. The TMV CP cDNA of the transgenic plants of each generation was also confirmed by genomic PCR, and there was no systemic viral multiplication in the resistant plants. It suggests that the viral resistance and gene expression of the transgenic plants might be stable through the generations.ons.s.
Kingsley Ochar;Ho-Cheol Ko;Hee-Jong Woo;Hae-Ryun Kwak;On-Sook Hur
Proceedings of the Plant Resources Society of Korea Conference
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2022.09a
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pp.68-68
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2022
The pepper mild mottle virus (PMMoV), belonging to the tobamovirus genus, is currently one of the most destructive pathogens in pepper production. Tobamoviruses have been classified in terms of increased pathogenicity as pathotypes P0, P1, P1,2, P1,2,3 and P1,2,3,4, based on their ability to infect systemically Capsicum L0 , L1 , L2 , L3 and L4 resistant plants, respectively. Two hundred eighty pepper germplasms and 5 reference accessions known as resistant L alleles, were analyzed to select the resistance cultivars against PMMoV- P1,2,3 (CV130614-2) using bioassay and genetic markers. The susceptible accessions showed systemic symptom when inoculated with PMMoV- P1,2,3. However, accessions including IT223737, were resistant as they developed necrotic local lesions only on inoculated leaves, whereas no symptoms were observed on the upper leaves. Moreover, RT-PCR results for detecting the presence of virus were also negative. Thus, those accessions will be used as a novel source to facilitate introduction the resistant gene into commercial cultivars of pepper.
Tobacco plants resistant (cvs. Xanthi-nc and Samsun-NN) and susceptible (cv. NC 82) to tobacco mosaic virus (TMV) were inoculated with TW to obtain basic information about the characteristics of resistance expression in tobacco plants by examining the viral populations, symptom development and gene expression of pathogenesis-related proteins (PR-proteins) such as PR-1 and $\beta$-1, 3-glucanase in different temperature conditions. TMV populations in resistant plants increased more at 37$^{\circ}C$ than at 27$^{\circ}C$, while the viral populations increased continuously and were not significantly influenced by the temperature conditions in the susceptible tobacco plants. Infection sites of resistant tobacco leaves were remarkably expanded in proportion with increased time at the high temperature.
Plant virus coat (CP) gene-mediated protection is one of the best known approaches to protect against virus resistant transgenic plants. Transgenic N. benthamiana plants containing the CP gene of Zucchini green mottle mosaic virus (ZGMMV) were used for the environmental risk assessment of the living modified (LM) plants with plant virus resistance. The most optimal co-infection method of both ZGMMV and CMV (Cucumber mosaic virus) on Non-LM and CP-expressing LM tobacco plants was established and co-infection of CMV and ZGMMV was confirmed by polymerase chain reaction (PCR). To address the effects of LM tobacco plants on the mutation of the virus, in-vitro transcripts of CP and Replicase (Rep) derived from CMV and/or ZGMMV were inoculated onto Non-LM or LM tobacco plants. Mutation frequency of CP and Rep from CMV and ZGMMV was examined through six serial passages in Non-LM and LM tobacco plants. Little actual frequency of mutation was estimated, probably due to the limited number of transgenic plants tested in this study. However, it does not suggest environmental safety of these CP-mediated LM plants. Further study at a larger scale is needed to evaluate the environmental risk associated with the CP-expressing LM plants.
Hu, Chenxi;Chen, Zheng;Zhao, Wenjun;Wei, Lirong;Zheng, Yanwen;He, Chao;Zeng, Yan;Yin, Bin
Biomolecules & Therapeutics
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v.22
no.2
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pp.114-121
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2014
Refractoriness of acute myeloid leukemia (AML) cells to chemotherapeutics represents a major clinical barrier. Suicide gene therapy for cancer has been attractive but with limited clinical efficacy. In this study, we investigated the potential application of herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir (HSV-TK/GCV) based system to inhibit chemoresistant AML cells. We first generated Ara-C resistant K562 cells and doxorubicin-resistant THP-1 cells. We found that the HSV-TK/GCV anticancer system suppressed drug resistant leukemic cells in culture. Chemoresistant AML cell lines displayed similar sensitivity to HSV-TK/GCV. Moreover, HSV-TK/GCV killing of leukemic cells was augmented to a mild but significant extent by all-trans retinoic acid (ATRA) with concomitant upregulation of Connexin 43, a major component of gap junctions. Interestingly, HSV-TK/GCV killing was enhanced by expression of vesicular stomatitis virus G glycoprotein (VSV-G), a fusogenic membrane protein, which also increased leukemic cell fusion. Co-culture resistant cells expressing HSV-TK and cells stably transduced with VSV-G showed that expression of VSV-G could promote the bystander killing effect of HSV-TK/GCV. Furthermore, combination of HSV-TK/GCV with VSV-G plus ATRA produced more pronounced antileukemia effect. These results suggest that the HSV-TK/GCV system in combination with fusogenic membrane proteins and/or ATRA could provide a strategy to mitigate the chemoresistance of AML.
Kim, Tae-Sung;Yu, Min-Su;Koh, Kong-Suk;Oh, Kyoung-Hee;Ahn, Hong-Il;Ryu, Ki-Hyun
The Plant Pathology Journal
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v.22
no.4
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pp.353-359
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2006
Transgenic Nicotiana benthamiana plants harboring the coat protein(CP) gene of Zucchini green mottle mosaic virus(ZGMMV) were chosen as a model host for the environmental risk assessment of genetically modified plants with virus resistance. This study was focused on whether new virus type may arise during serial inoculation of one point CP mutant of ZGMMV on the transgenic plants. In vitro transcripts derived from the non-functional CP mutant were inoculated onto the virus-tolerant and -susceptible transgenic N. benthamiana plants. Any notable viral symptoms that could arise on the inoculated transgenic host plants were not detected, even though the inoculation experiment was repeated a total of ten times. This result suggests that potential risk associated with the CP-expressiing transgenic plants may not be significant. However, cautions must be taken as it does not guarantee environmental safety of these CP-mediated virus-resistant plants, considering the limited number of the transgenic plants tested in this study. Further study at a larger scale is needed to evaluate the environmental risk that might be associated with the CP-mediated virus resistant plant.
Kim, In-Seop;Choi, Yong-Woon;Kang, Yong;Sung, Hark-Mo;Shin, Jeong-Sup
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.18
no.5
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pp.997-1003
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2008
Viral safety is a prerequisite for manufacturing clinical antihemophilic factor VIII concentrates from human plasma. With particular regard to the hepatitis A virus (HAV), a terminal dry-heat treatment ($100^{\circ}C$ for 30 min) process, following lyophilization, was developed to improve the virus safety of a solvent/detergent-treated antihemophilic factor VIII concentrate. The loss of factor VIII activity during dry-heat treatment was of about 5%. No substantial changes were observed in the physical and biochemical characteristics of the dry-heat-treated factor VIII compared with those of the factor VIII before dry-heat treatment. The dry-heat-treated factor VIII was stable for up to 24 months at $4^{\circ}C$. The dry-heat treatment after lyophilization was an effective process for inactivating viruses. The HAV, murine encephalomyocarditis virus (EMCV), and human immunodeficiency virus (HIV) were completely inactivated to below detectable levels within 10 min of the dry-heat treatment. Bovine herpes virus (BHV) and bovine viral diarrhea virus (BVDV) were potentially sensitive to the treatment. However porcine parvovirus (PPV) was slightly resistant to the treatment. The log reduction factors achieved during lyophilization and dry-heat treatment were ${\geq}5.55$ for HAV, ${\geq}5.87$ for EMCV, ${\geq}5.15$ for HIV, 6.13 for BHV, 4.46 for BVDV, and 1.90 for PPV. These results indicate that dry-heat treatment improves the virus safety of factor VIII concentrates, without destroying the activity. Moreover, the treatment represents an effective measure for the inactivation of non-lipid-enveloped viruses, in particular HAV, which is resistant to solvent/detergent treatment.
Anato, Vital Kouessi Sixte;Agnoun, Yves;Houndjo, Joel;Oludare, Aderonke;Agbangla, Clement;Akoroda, Malachy;Adetimirin, Victor O.
The Plant Pathology Journal
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v.37
no.4
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pp.375-388
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2021
Rice yellow mottle virus (RYMV) is the most harmful virus that affects irrigated and lowland rice in Africa. The RBe24 isolate of the virus is the most pathogenic strain in Benin. A total of 79 genotypes including susceptible IR64 (Oryza sativa) and the resistant TOG5681 (O. glaberrima) as checks were screened for their reactions to RBe24 isolate of RYMV and the effects of silicon on the response of host plants to the virus investigated. The experiment was a three-factor factorial consisting of genotypes, inoculation level (inoculated vs. non-inoculated), and silicon dose (0, 5, and 10 g/plant) applied as CaSiO3 with two replications and carried out twice in the screen house. Significant differences were observed among the rice genotypes. Fifteen highly resistant and eight resistant genotypes were identified, and these were mainly O. glaberrima. Silicon application did not affect disease incidence and severity at 21 and 42 days after inoculation (DAI); it, however, significantly increased plant height of inoculated (3.6% for 5 g CaSiO3/plant and 6.3% for 10 g CaSiO3/plant) and non-inoculated (1.9% for 5 g CaSiO3/plant and 4.9% for 10 g CaSiO3/plant) plants at 42 DAI, with a reduction in the number of tillers (12.3% for both 5 and 10 g CaSiO3/plant) and leaves (26.8% for 5 g CaSiO3/plant and 28% for 10 g CaSiO3/plant) under both inoculation treatments. Our results confirm O. glaberrima germplasm as an important source of resistance to RYMV, and critical in developing a comprehensive strategy for the control of RYMV in West Africa.
Kim, Yul-Ho;Kim, Ok-Sun;Moon, Jung-Kyeong;Roh, Jae-Hwan;Im, Dae-Joon;Hur, Il-Bong;Lee, Sang-Chul
KOREAN JOURNAL OF CROP SCIENCE
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v.46
no.1
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pp.17-21
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2001
Soybean mosaic virus (SMV) resistance of Korean recommended soybeans was evaluated naturally and by mechanical inoculation in Suwon. Based on the differential reaction of forty-four soybean genotypes tested to nine different SMV strains, soybeans were classified into twenty-four groups. Myeongjunamulkong and Ilpumgeom-jeongkong showed a high degree of resistance to nine SMV strains, having no symptom. The other cultivars produced various reactions according to inoculation of each SMV strain: symptomless, mosaic or systemic necrosis. Only five cultivars such as Kwangankong, Eunhakong, Tawonkong, Namhaekong, Sobaegnamulkong were totally susceptible to every strain. There was variation in disease incidence. Soybeans, having the highest levels of resistance to G5H and G7H in the greenhouse, showed the lowest levels of SMV incidence in the field of Suwon. Myeong-junamulkong, Ilpumgeomjeongkong, Soyangkong, Pungsannamulkong, Sodamkong, Jangmikong, Geomjeong-kong2, Pureunkong, Sinpaldalkong2, Duyoukong, and Geumgangkong were fairly resistant to SMV. And SMV incidence of Taekwangkong, Saealkong and Baegunkong was over 45% with symptom of bud necrosis. And soybeans, highly resistant to SMV in the field and the greenhouse, were mainly derived from Jangyeobkong and Hwang-keumkong resistant to G1-G7.
Potato virus X (PVX) resistance in potato is one of the best-characterized resistance models, however little is known in pepper. To evaluate the resistance to PVX in Capsicum annuum, a total of eleven pepper accessions were used for resistance screening against two PVX strains, USA and UK3. None of them were resistant against strain UK3, whereas four resistant genotypes were found against strain USA, three of which were further characterized. Two unlinked dominant genes were identified for both genotypes Bukang and Perennial; resistance in the genotype CV3 seemed to be conferred by two complementary dominant genes. These results demonstrated that the resistance to PVX in C. annuum is different from that in potato. This is the first report on genetic analysis of PVX resistance in C. annuum.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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