Helicobacter pylori(H. pylori) is the causative agent of chronic gastritis and the single most important factor in peptic ulcer disease, however, the pathogenetic mechanisms underlying H, pylori infection are not well understood. Futhermore, there is a strong association between H. pylori infection and gastric cancer. Various diagnostic methods for detecting H. pylori infection are available. These can be divided into invasive methods, requiring endoscopy, and non-invasive tests, mainly 13C-urea breath tests and serologic detection of antibodies. Rapid urease test is the most recommendable endoscopic test for the diagnosis of H. pylori infection, presently. CLO test kit is the represent of rapid urease test kits. The principles of CLO test kit is that hydrolysis of urea by urease Is detected by a dye indicators showing a color change. Our device is used same principle but we improved the reaction time is more faster and positive color change is more distinctive from the color of the negative specimen. So, this kit is more reliable because it response faster and accuracy.
Although ureases play important roles in microbial nitrogen metabolism and in the pathogenesis of several human diseases, little is known of the mechanism of metallocenter biosynthesis in this Ni-Containing enzyme. Klebsiella aerogenes urease apo-protein was purified from cells grown in the absence of Ni. The purified apo-enzyme showed the same native molecular weight, charge, and subunit stoichiometry as the holo-enzyme. Chemical modification studies were consistent with histidinyl ligation of Ni. Apo-enzyme could not be activated by simple addition of Ni ions suggesting a requirement for a cellular factor. Deletion analysis showed that four accessory genes (ureD, ureE, ureF, and ureG) are necessary for the functional incorporation of the urease metallocenter. Whereas the $\Delta$ureD, $\Delta$ureF, and $\Delta$ureG mutants are inactive and their ureases lack Ni, the $\Delta$ureE mutants retain partial activity and their ureases possess corresponding lower levels of Ni. UreE and UreG peptides were identified by SDS-polyacrylamide gel comparisons of mutant and wild type cells and by N-terminal sequencing. UreD and UreF peptides, which are synthesized at ve교 low levels, were identified by using in vitro transcription/translation methods. Cotransformation of E. coli cells with the complementing plasmids confirmed that ureD and ureF gene products act in trans. UreE was purified and characterized. immunogold electron microscopic studies were used to localize UreE to the cytoplasm. Equilibrium dialysis studies of purified UreE with $^{63}$ NiC1$_2$ showed that it binds ~6 Ni in a specific manner with a $K_{d}$ of 9.6 $\pm$1.3 $\mu$M. Results from spectroscopic studies demonstrated that Ni ions are ligated by 5 histidinyl residues and a sixth N or O atom, consistent with participation of the polyhistidine tail at the carboxyl termini of the dimeric UreE in Ni binding. With these results and other known features of the urease-related gene products, a model for urease metallocenter biosynthesis is proposed in which UreE binds Ni and acts as a Ni donor to the urease apo-protein while UreG binds ATP and couples its Hydrolysis to the Ni incorporation process.ouples its Hydrolysis to the Ni incorporation process.s.
감염된 환축을 찾는 진단과정에 완벽하지 못한 진단검사를 사용하는 경우 진단검사 결과는 흔히 왜곡되어 나타난다. 본 연구에서 저자는 Helicobacter pylori 감염을 진단하는데 사용되는 urease 검사, PCR 검사 및 조직학적인 검사법을 단독으로 사용하는 경우와 병행하여 사용하는 상황으로 구분하여 각각 진단적 특성을 평가하였다. 비선형 회귀모형 분석결과 민감도, 특이도, 양성우도비 및 음성우도비는 urease 검사법의 경우 99.9%, 99.9%, 99.9%, 99.6%, PCR 검사의 경우 88.6%, 99.9%, 99.9%, 70.5%, 조직검사법의 경우 78.3%, 97%, 78.3%, 97%fh 나타났다. 예측도는 유병율의 변화에 따라 다양한 값을 보였으며 Helicobacter pylori 감염의 유병율이 35% 이상일 때 조직 검사상 양성결과는 90% 이상의 일치도를 보였고, 유병율이 25% 미만일 때 조직 검사상 음성결과는 90% 이상의 일치도를 보였다. 본 연구결과 임상에서 감염된 개체를 스크리닝하는 목적으로 세가지 진단검사를 병행하는 것은 실질적인 이익이 없으며 단독검사로서 urease 검사와 PCR 검사가 가장 적합한 것으로 나타났다.
본 연구는 요소 센서 제작을 위한 과정으로서, 전기화학적 방법을 이용한 다공질 실리콘 구조 형성과, PDV(Physical Vapor Deposition) 법에 의한 백금 박막 코팅 및 전기화학적 전도성 고분자 코팅과 urease 고정화 단계를 고찰하고 감도 특성을 제시 하였다. 전극 기질로서 B을 도우핑한 p-type 실리콘웨이퍼를 사용하였고, HF:$C_2H_5OH:H_2O$=1:2:1의 부피비를 갖는 에칭 용액에서 5분간 -7 $mA/cm^2$의 일정 전류를 가하여 폭 2 ${\mu}m$, 깊이 10 ${\mu}m$의 다공질 실리콘(PS) 충을 형성하였다. 그 위에 200 ${\AA}$의 Ti 층을 underlayer로서 증착하고, 2000 ${\AA}$의 Pt를 중착하여 PS/Pt 박막 전극을 제작하고, 전도성 고분자로서 polypyrrole (PPy), 또는 poly(3-mehylthiophene) (P3MT)을 전기화학적으로 코팅한 후, urease(EC 3.5.1.5, type III, Jack Bean, Sigma)를 고정화 하였다. 고정화 시 전해질 수용액의 pH는 7.4로 하여 urease표면이 음전하를 갖도록 하고, 전극에 0.6 V (vs. SCE(Saturated Calomel Electrode))의 일정 전압을 가함으로써 urease가 전도성 고분자 표면에 전기적으로 흡착되도록 하였다. 이상의 방법으로 제작한 요소 센서의 감도는 PPy와 P3MT를 전자 전달 매질로 사용한 경우, 각각 8.44 ${\mu}A/mM{\cdot}cm^2$와 1.55 ${\mu}A/mM{\cdot}cm^2$의 감도를 보였다.
목적: 신속 요소 분해 효소 검사법은 헬리코박터 파이로리 감염의 진단에 있어서 빠르고 신뢰성 높은 검사이다. 그러나 내시경을 통한 위점막의 생검이 필요할 뿐 아니라 국내의 의료보험에서는 위암 환자에 대해 급여 인정이 되지 않는 제한점이 있다. 따라서 저자들은 대체 방법으로 위절제술 직후 생검된 위점막 검체를 이용하여 신속 요소 분해 효소 검사를 시행하였고 이를 소개하고자 한다. 대상 및 방법: 위절제술을 시행 받은 위선암 환자들 중 90명을 대상으로 헬리코박터 파이로리에 대한 IgG 항체 검사를 시행하였으며, 위절제술 직후 위전정부와 위체부 각각에서 점막 생검을 하여 신속 요소 분해 효소 검사 키트에 고정한 후 24시간 이내에 색깔변화를 통해 양성 여부를 판독하였다. 본 연구에서는 면역 혈청학적 검사에서 양성이거나 신속 요소 분해 효소 검사에서 양성인 경우 헬리코박터 파이로리 감염이 있다고 정의하였다. 결과: 신속 요소 분해 효소 검사와 면역 혈청학적 검사에서 양성인 경우가 각각 91.1%와 77.8%였다. 신속 요소 분해 효소 검사의 민감도, 특이도, 양성 예측률, 음성 예측률은 94.3%, 100%, 100%, 37.5%였으며, 면역 혈청학적 검사는 80.5%, 100%, 100%, 15%로 나타났다. 신속 요소 분해 효소검사의 정확도는 94.4%로 면역 혈청학적 검사의 81.1%보다 높았다. 신속 요소 분해 효소 검사의 헬리코박터 파이로리 감염 진단률이 면역 혈청학적 검사보다 더 높았다. 결론: 본 연구에서 위선암 환자에서 위절제술 후 생검된 위점막 검체를 이용한 신속 요소 분해 효소 검사법은 문헌상에 보고된 통상적인 신속 요소 분해 효소 검사법의 진단률과 대등하였다. 따라서 위절제술을 시행 받는 환자에서 헬리코박터 파이로리 감염의 대체 검사법으로 유용할 것으로 기대된다.
Purpose: We investigated the positivity rate and the time period to the positive color change of the urease test in children and adults and assessed the correlation of the urease test to histopathologic findings. Methods: From 1995 to 2000, endoscopic biopsies of the antrum and body were collected from 811 children and 224 adults and subjected to urease tests and histopathology. Results: The positivity rate of the urease test was 49.4% for 0-4 years, 48.4% for 5-9 years, 47.3% for 10-15 years, and 62.5% for 20-29 years in the antrum. The positivity rate was 85.1% in 0-4 years, 82.3% in 5-9 years, 74.7% in 10-15 years, and 74.1% in 20-29 years for the body. In the antrum, the highest positivity rate was <1 hour for the group aged 10-29 years and 6-24 hours in the group <10 years old (p<0.0001). In the body, the highest positivity rate was <1 hour in adults and 6-24 hours in children (p<0.0001). The proportions of the positive reactions within 1 hour were similar for the antrum and the body. In the cases of more severe chronic gastritis, active gastritis, and Helicobacter pylori infiltration, a positive urease test reaction occurred more quickly (p<0.0001). Conclusion: There were significant differences in urease tests according to age and sampling site. The discrepancy between the antrum and the body was greater in younger children. These results might be related to the low density and patchy distribution of bacteria in children and in the body.
ammonium thiosulfate(ATS)의 urease 활성 억제제로서의 효과를 thiourea와 비교하고, 온도 및 pH가 ATS의 효과에 미치는 영향을 실험한 바, 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. ATS의 요소 가수 분해 저해율은 $25^{\circ}C$에서 요소의 5% 수준으로 처리하였을 때에는 1.5~14.3%, 10% 처리시에는 7.6~20.5%였다. 이는 thiourea의 저해율보다 다소 낮은 수준이었다. 2. ATS의 효과는 고온보다는 저온에서 뚜렷하게 나타났다. 즉 요소의 10% 수준으로 처리하였을 때 $10^{\circ}C$와 $15^{\circ}C$에서의 가수 분해 저해율은 각각 62.6%와 41.7%였다. 3. 토양 pH에 따라서 ATS의 효과가 나타나기 시작하는 시간이 달랐다. 즉 pH가 6.0과 6.5에서는 24시간부터 저해 효과가 나타난 반면, 5.0과 7.0, 7.5에서는 48시간부터 효과가 나타났다. 처리후 72시간에 urease 활성 저해율은 pH에 관계없이 비슷하므로, pH와 저해 효과와는 일정한 경향성이 없는 듯하다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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