• BMB Reports
• /
• 제31권1호
• /
• pp.77-82
• /
• 1998

To purify the geranylgeranyl protein transferase type I (GGPT-I) efficiently, a gene expression system using the pGEX-4T-1 vector was constructed. The cal1 gene, encoding the ${\beta}$ subunit of GGPT-I, was subcloned into the pGEX-4T-1 vector and co-transformed into E. coli cells harboring the ram2 gene, the ${\alpha}$ subunit gene of GGPT-I. GGPT-I was highly expressed as a fusion protein with glutathione S-transferase (GST) in E. coli, purified to homogeneity by glutathione-agarose affinity chromatography, and the GST moiety was excised by thrombin treatment. The purified yeast GGPT-I showed a dose-dependent increase in the transferase activity, and its apparent $K_m$ value for an undecapeptide fused with GST (GST-PEP) was $0.66\;{\mu}M$ and the apparent value for geranylgeranyl pyrophosphate (GGPP) was $0.071\;{\mu}M$.

• 농약과학회지
• /
• 제6권1호
• /
• pp.31-35
• /
• 2002

본 논문의 목적은 benfuracarb 원제(90.2%)에 함유된 불순물의 glutathione-S-transferase와 amidase에 대한 저해 특성과 해당 불순물의 구조를 밝히는데 있다. Benfuracarb 원제, 유효성분 및 불순물은 glutathione-S-transferase(GST)를 효과적으로 저해하였으나, 그 저해력은 GST 효소 저해제인 ethacrynic acid의 저해력보다는 낮았다. 즉, GST에 대한 benfuracarb 원제, 유효성분 및 불순물의 $I_{50}$은 각각 $9.7{\times}10^{-4}M,\;>1.0{\times}10^{-3}M,\;1.8{\times}10^{-4}M$이었으나, ethacrynic acid의 $I_{50}$은 $1.7{\times}10^{-5}M$이었다. Benfuracarb 원제, 유효성분 및 불순물은 amidase를 저해하였는데, 이들의 효소저해력은 iprobenfos의 저해력($I_{50},\;8.2{\times}10^{-7}M$)보다는 낮은 $6.0{\times}10^{-5}M,\;4.3{\times}10^{-4}M,\;7.6{\times}10^{-5}M$이었다. Benfuracarb 원제에는 4종의 불순물(IM $1{\sim}4$)이 검출되었는데, 이들 중 IM 2와 3은 GST와 amidase의 활성을 저해하였던 반면, IM 4는 효소활성을 저해하지 않았다. 이들 불순물 중 효소활성 저해특성을 갖는 IM 2와 3을 IR, $^1H$-NMR, $^{13}C$-NMR, LC-MS를 이용하여 구조를 분석한 결과, IM 2는 ethyl-N-isopropylamino propionate로, 그리고 IM 3은 ethyl-N-isopropyl-N-(chlorosulfenyl) aminopropionate로 확인되었다.

• 농약과학회지
• /
• 제7권1호
• /
• pp.38-44
• /
• 2003

본 연구는 다양한 계열의 농약을 대상으로 체내에서 농약을 무독화하는 효소로 알려진 glutathione-S-transferase(GST) 와 esterases 에 대한 저해정도를 조사하고, 이 중 저해력이 높은 약제를 선발하여 무독화 효소에 의하여 분해되는 것으로 보고된 약제와 혼합 처리하였을 때 나타나는 약효의 변화를 조사하고자 수행하였다. 무독화효소를 저해하는 농약을 선발하기 위하여 34종의 살충제와 31종의 살균제를 대상으로 glutathione-S-transferase와 esterases 에 대한 저해력을 측정한 결과, thiodicarb $(I_{50}:1.87{\times}10^{-4}M)$, thiocyclarn $(I_{50}:7.40{\times}10^{-4}M)$, dithianon $(I_{50}:7.55{\times}10^{-5}M)$, tolylfluanide $(I_{50}:8.66{\times}10^{-5}M)$은 glutathione-S-transferase의 활성을 강게 저해하였고, dichlorvos $(I_{50}:8.95{\times}10^{-8}M)$, pirimicarb $(I_{50}:2.74{\times}10^{-6}M)$, pyrazophos $(I_{50}:3.31{\times}10^{-5}M)$, benomyl $(I_{50}:4.96{\times}10^{-5}M)$은 esterases의 활성을 강하게 저해하였다. Glutathione-S-transferase를 저해하였던 thiodicarb, thiocyclarn, dithianon, tolylfluanide와 glutathione-S-transferase 에 의해 대사되는 것으로 알려진 aeephate를 혼합 (1:1)하여 배추좀나방 (Plutella xylostella L.) 에 처리하고 약효를 관찰한 결과, 각각의 단제를 처리하였을 때보다 약효가 상승되었다. 특히 dithianon과 thiocyclam을 acephate 와 혼합시 각각 7배와 4배 약효가 상승하였다. 그리고 esterase를 저해한 약제인 dichlorvos, pirimicarb, pyrazophos, benomyl 을 esterase 에 의해 대사되는 것으로 알려진 phenthoate 와 혼합하였을 경우에도 단제 처리시의 약효보다는 혼합처리시의 약효가 높았다. Phenthoate와 dichlorvos 혼합시 18배, phenthoate 와 benomyl 혼합처리시 12배의 약효상승효과가 나타났다. 본 연구의 결과들은 무독화과정 효소에 의해 무독화되는 약제를 무독화효소 저해제와 혼합처리시 약효상승이 유발된다는 것을 나타내는데, 이러한 결과들은 향후 혼합제 개발에 유용하게 사용될 수 있을 것이라 생각된다.

• 한국식품영양학회지
• /
• 제28권3호
• /
• pp.458-464
• /
• 2015

본 연구에서는 진피의 활용도를 높이기 위한 연구의 일환으로 유기용매별에 따른 생리활성물질의 용출량을 측정하기 위해, 진피와 에탄올 진피 추출물을 대상으로 유기용매인 에틸 아세테이트, 아세톤, 염화 메틸렌, 메탄올을 이용하여 추출한 시료를 대상으로 총 폴리페놀 함량, 전자공여능, glutathione S-transferase(GST)의 활성 저해력을 측정한 결과는 다음과 같다. 1. 총 폴리페놀 함량은 ethyl acetate인 경우 진피는 $928.48{\pm}1.19{\mu}g\;GAE/mL$, 에탄올 추출 진피는 $664.64{\pm}0.74{\mu}g\;GAE/mL$로, acetone인 경우 진피는 $886.03{\pm}0.44{\mu}g\;GAE/mL$, 에탄올 추출 진피는 $702.67{\pm}0.85{\mu}g\;GAE/mL$로, methylene chloride인 경우 진피는 $413.08{\pm}1.39{\mu}g\;GAE/mL$, 에탄올 추출 진피는 $429.64{\pm}0.61{\mu}g\;GAE/mL$로, methanol인 경우 진피는 $12,648.60{\pm}0.56{\mu}g\;GAE/mL$, 에탄올 추출 진피는 $16,108.20{\pm}0.73{\mu}g\;GAE/mL$로 나타나, 진피나 에탄올 추출 진피는 모두 methanol로 추출한 것이 상대적으로 높게 나타났으며, 총 폴리페놀의 함량 차이는 유기용매별 통계적으로 유의한 차이가 나타났다(p<0.05). 2. 전자공여능은 ethyl acetate인 경우 진피는 62.80%, 에탄올 추출 진피는 51.49%로 나타났으며, acetone인 경우 진피는 97.43%, 에탄올 추출 진피는 63.17%로 나타났으며, methylene chloride인 경우 진피는 52.20%, 에탄올 추출 진피는 67.68%로 나타났으며, methanol인 경우 진피는 97.63%, 에탄올 추출 진피는 96.18%로 나타났다. Electron donating ability(EDA)는 유기용매 중 메탄올로 추출하였을 때가 상대적으로 가장 높게 나타났으며, 유기용매별로 통계적으로 유의한 차이가 나타났다(p<0.05). 3. Glutathione S-transferase(GST)에 대한 활성 저해능은 ethyl acetate인 경우 진피는 76.22%, 에탄올 추출 진피는 75.54%로 나타났으며, methylene chloride인 경우 진피는 31.73%, 에탄올 추출 진피는 73.53%로 나타났으며, methanol인 경우 진피는 97.48%, 에탄올 추출 진피는 48.70%로 나타났다. Glutathione S-transferase(GST)에 대한 활성 저해능은 진피인 경우 유기용매 중 메탄올로 추출하였을 때가 가장 높게 나타났고, 에탄올 추출 진피인 경우는 에탄올과 methylene chloride로 추출할 때가 높게 나타났으며, 유기용매별로 통계적으로 유의한 것으로 나타났다(p<0.05).

• BMB Reports
• /
• 제29권2호
• /
• pp.111-115
• /
• 1996

A novel glutathione S-transferase from Pseudomonas sp. DJ77 was expressed in E. coli and purified by glutathione-affinity chromatography. The enzyme was composed of two identical subunits. The molecular size of the enzyme was 42 kDa by sephadex G-150 gel permeation chromatography and Mr of each subunit was 23 kDa by sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. pI value of the enzyme was approximately 5.8 by isoelectric focusing. This enzyme showed the highest activity toward 1-chloro-2,4-dinitrobenzene as the electrophilic substrate. The relative activities toward p-nitrobenzyl chloride and 1,2-dichloro-4-nitrobenzene were 3.8% and 1.3% of the activity toward 1-chloro-2,4-dinitrobenzene, respectively. $K_m$ and $V_{max}$ values for 1-chloro-2,4-dinitrobenzene calculated by Lineweaver-Burk plot were 0.76 mM and $14.81\;{\mu}mol/min/mg$, respectively, and those for glutathione were 6.23 mM and $64.93\;{\mu}mol/min/mg$, respectively. The enzyme showed highest glutathione S-transferase activity at pH 8.0 and was stable between pH 6.0 and 9.0. The enzyme retained its activity up to $35^{\circ}C$ for 90 min but was unstable above $45^{\circ}C$.

• Radiation Oncology Journal
• /
• 제19권4호
• /
• pp.381-388
• /
• 2001

목적 : 사람의 유방암 세포인 MCF-7 세포주를 대상으로 gultathione S-transferase K1 (hGSTK1) 유전자의 발현 정도 및 방사선 조사에 의한 hGSTK1 유전자의 발현 변화를 관찰하고 hGSTK1 유전자를 과발현시킴으로써 hGSTK1이 방사선 감수성에 어떤 영향을 미치는 지를 관찰하였다. 재료 및 방법 : 사람의 모유두 세포 pBluescript phagemid cDNA library로부터 선별한 hGSTK1 cDNA를 pcDNA3.1/Myc-His (+) vector에 결합시킨 후, 사람의 유방암 세포인 MCF극 세포에 이입시켰다. hGSTK1 유전자를 이입시키지 않은 MCF극 세포와 hGSTK1을 이입시킨 MCF-7 세포에 $2\~12\;Gy$의 엑스선을 조사하여 생존 분획을 비교하였다. hGSTK1 유전자를 이입시키지 않은 MCF-7 세포와 hGSTK1을 이입시킨 MCF-7 세포에서 방사선량, 분할조사 여부, 방사선 조사 후 경과 시간에 따른 hGSTK1 mRNA 발현의 차이를 보기 위하여 RT-PCR 분석을 시행하였다. 결과 : hGSTK1 유전자를 이입시키기 전의 MCF-7 세포보다 hGSTK1 유전자를 이입시킨 MCF-7 세포에서 생존 분획이 유의하게 높은 것으로 나타났다. hGSTK1 유전자를 이입시키지 않은 MCF-7 세포에서 2 Gy 생존 분획은 $0.3250{\pm}0.0319$였고, hGSTK1 유전자를 이입시킨 MCF-7 세포에서 2 Gy 생존 분획은 $0.4125{\pm}0.0325$였다 (p<0.05). 그러나 RT-PCR에 의한 hGSTK1 mRNA 분석에서는 방사선량, 분할조사 여부, 방사선 조사 후 경과 시간에 따른 발현의 차이를 볼 수 없었다. 결론 : MCF-7 세포주에서 hGSTK1의 과발현은 방사선 감수성에 영향을 미쳐서 MCF-7 세포의 생존 분획을 증가 시켰다고 볼 수 있으나 이에 대한 정확한 기전을 알기 위해서는 더 많은 연구가 필요할 것이다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
• /
• 제24권8호
• /
• pp.1188-1192
• /
• 2003

In order to study the role of residue in the active site of glutathione S-transferase (GST), Tyr 108 residue in human GST P1-1 was replaced with alanine, phenylalanine and tryptophan by site-directed mutagenesis to obtain mutants Y108A, Y108F and Y108W. These three mutant enzymes were expressed in Escherichia coli and purified to electrophoretic homogeneity by affinity chromatography on immobilized GSH. The substitutions of Tyr108 significantly affected $K_m^{CDNB}$ and $K_m^{ETA}$, whereas scarcely affected $K_m^{GSH}$. The substitutions of Tyr108 also significantly affected $I_{50}$ of ETA, an electrophilic substrate-like compound. The effect of these substitutions on kinetic parameters and the response to inhibition suggests that tyrosine 108 in hGST P1-1 contributes to the binding of the electrophilic substrate and a major determinant in the binding of CDNB is the aromatic ring of Tyr108, not its hydroxyl group.

• 농약과학회지
• /
• 제2권1호
• /
• pp.97-103
• /
• 1998

제초제 alachlor와 metolachlor가 처리된 수수의 생장에 대한 약해경감제 fluxofenim의 약해 경감효과와 경감기작의 하나로 추정되는 GST 활성에 대하여 조사하였다. 제초제 metolachlor와 alachlor는 수수(품종;G522DR)의 유묘생장을 크게 억제하였는데, 지상부 및 뿌리에 대한 50% 생장억제 농도가 각각 30.8, 28.8 ${\mu}M$과 4.48, 6.23 ${\mu}M$로 두 약제 모두 수수의 지상부에 대한 억제보다 뿌리에 대한 억제가 컸다. Fluxofenim을 종자에 처리하여 파종하고 metolachlor또는 alachlor을 처리하면 수수의 유묘생장이 회복되어 fluxofenim처리에 의한 약해경감 효과가 크게 나타났다. 약해경감제 fluxofenim을 처리한 것과 처리하지 않은 수수 유묘로부터 추출한 GST의 활성을 비교한 결과, fluxofenim을 처리한 수수의 유묘로부터 추출한 GST의 활성이 CDNB를 기질로 사용하였을때 70% 증가되었고, [$^{14}C$]-metolachlor을 기질로 사용하였을 때에도 82% 증가되었다. 따라서 약해경감제 fluxofenim을 처리한 수수와 처리하지 않은 수수의 metolachlor또는 alachlor에 대한 선택성의 차이는 fluxofenim 처리로 증가된 GST에 의한 metolachlor-glutathione 또는 alachlor-glutathione conjugation되기 때문인 것으로 생각된다.

• 환경생물
• /
• 제20권2호
• /
• pp.173-179
• /
• 2002

N-nitrosoethylurea(NEU)에 의한 지질 과산화물의 함량 변화와 알데히드 대사효소 및 항산화효소의 활성변화를 쥐 간세포에서 측정하였다. 알데히드 대사효소로는 alcohol dehydrogenase와 aldehyde dehydrogenase가 사용되었고 항산화효소로는 glutathione transferase, superoxide dismutase, glutathione reductase와 catalase가 사용되었다. 쥐 간세포에 다양한 농도의 NEU를 처리한 후 지질 과산화물의 함량변화를 측정하였다. 그 결과 6.25mM NEU에 의하여 지질 과산화물의 함량이 최대 2.5배 증가하였다. Alcohol dehydrogenase의 활성은 NEU처리에 의하여 대조군보다 최대 2.3배 증가하였고 aldehyde dehydrogenase의 활성은 약 2배 증가하였다. 전암성 병변의 지표로 이용되는 glutathione transferase와 catalase의 경우 NEU처리에 의한 활성증가가 미미하였다. 그러나 superoxide dismutase의 활성은 최대 1.5배 증가하였고, glutathione reductase의 활성은 약 3배 증가하였다. 그러므로 superoxide dismutase와 g1utathione reductase의 활성증가가 NEU의 독성에 대한 세포내 항산화 방어과정에서 중요한 역할을 할 것으로 추측된다

• 한국결정학회지
• /
• 제14권1호
• /
• pp.32-34
• /
• 2003

여러 조건하에서 Clonorchis sinensis로부터 helminth glutatione S-transferase(28kDa isozyme)가 결정화되었다. 0.05 M potassium 완충 용액 (pH 7.0) 내에서 10% polyehtylene glycol MME 550(PEG MME 5 K)에서 자라난 결정이 $3.0{\AA}$ 분해능까지 회절하였다. 이 결정의 결정학적 자료는 다음과 같다 : 단사정계 공간 군 C2, $a=95.83{\AA}$, $b=63.82{\AA}$, $c=235.09{\AA}$, ${\beta}=97.2^{\circ}$.