In order to isolate substances that inhibit the hemolytic activity of human serum against eryth-rocytes, we have evaluated whole plants of the Orostachys japonicus species with regard to its anti-complement activity, and have identified its active principles following activity-guided isolation. A methanol extract of the O. japonicus, as well as its n-hexane soluble fraction, exhibited significant anti-complement activity on the complement system, which was expressed as total hemolytic activity. A bioassay-guided chromatographic separation of the constituents resulted in the isolation of three known compounds 1-3 from the active n-hexane fraction. The structure of these compounds were analyzed, and they were identified as hydroxyhopanone (1), $\beta-sitosteryl-3-O-\beta-D-glucopyranosyl-6'-O-palmitate$ (2), and $\beta-sitosteryl-3-O-\beta-D-glucopyranoside$ (3), respectively. Of these compounds, compound 2 exhibited potent anti-complement activity $(IC_{50}=1.0\pm0.1{\mu}M)$ on the classical pathway of the complement, as compared to tiliroside $(IC_{50}=76.5\pm1.1{\mu}M)$, which was used as a positive control. However, compounds 1 and 3 exhibited no activity in this system.
경기도 광릉에서 채집한 자실체로부터 분리한 Lentinus edodes IY105균을 배양하여 얻은 균사체를 알칼리로 추출하여 얻은 물질이 면역계와 sarcoma 180이 이식된 mouse에 미치는 영향을 검토하였다. Lentinus edodes IY105 배양균사체의 알칼리 추출물은 항보체활성과 alternative complement hemolytic 활성을 가지고 있었고, carbon clearance 활성을 가지고 있었고, carbon clearance 활성을 나타내는 것으로 보아 mouse의 망내계에 존재하는 macrophage를 활성화시켜 이 물질에 대한 탐식기능을 증가시킴을 알수 있었다. 또한, 이물질은 mouse의 용혈반 형성 세포수를 증가시키는 것으로 보아 항체생산 자극효과가 있는 것으로 추측되었으며, 종양세포인 sarcoma 180이 이식된 mouse의 암을 50 정도 억제하는 효과를 나타내었다. 알칼리 추출물의 성분을 분석한 결과, 당 17, 단백질 42로 구성된 단백질다당체가 주성분으로 단백다당체는 16종의 아미노산과 52종류의 당으로 구성되어 있었다.
본 연구는 담배가 면역계에 미치는 영향을 탐색하는 일환으로 한국산 각종 담배가 가토보체의 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 담배를 veronal buffered saline으로 추출한 후 이를 가토보체와 0.1 : 1의 비율로 혼합한 후 $37^{\circ}C$에서 60분간 반응시켜 반응전후의 보체역가를 보체 용혈검사로 측정하였다. 담배 A 의 경우 60분간 반응후에는 보체역가가 55.92% 감소되었으며 담배 B 는 48.62%, 담배 C 는 42.62%, 담배 D 는 49.12%, 담배 E 는 42.26%, 담배 F 는 53.26%, 담배 G 는 71.96%, 담배 H 는 60.90%, 담배 I 는 61.14% 감소되었다. 한국산 담배 9종 모두가 보체역가를 적게는 42.26% 크게는 71.96% 감소시킨 것으로 보아 담배 모두가 정도의 차이는 있지만 보체를 활성화시켰다.
한약재를 대상으로 용철 보체 분석법$(TCH_{50})$을 이용, 항보체 활성물질에 대한 전반적인 검색을 실시하였다. 총 55종의 시료의 열수 추출물을 대상으로 동 활성을 측정한 결과, 대조구에 비해 70%이상의 $TCH_{50}(total\;complement\;hemolysis\;of\;50%)$의 감소를 일으키는 비교적 강력한 항보체 활성을 소유한 울금, 대복피, 조각자, 화살나무, 가시오갈피, 인동, 부자, 계피 등 9종의 시료를 선택할 수 있었다. 이들은 pronase 소화 후 활성을 유지한 반면, $NaIO_4$ 산화에 의해 급격한 활성의 감소를 나타냄으로써, 그 활성의 본체가 다당에 기인함을 알 수 있었다. 또한 가장 높은 활성을 보였던 대복피(Areca catchu) 다당의 경우 $Ca^{++}$ 이온 부재시 부분적으로 활성의 감소를 보였으며, 정상인의 혈청과 반응시 C3의 분해산물을 면역 전기 영동법에 의해 확인할 수 있었는 바, 동 사실로부터 대복피의 보체 활성화 기구는 classical pathway뿐만 아니라 alternative pathway도 경유함을 알 수 있었다.
A 2${\times}$3 factorial arrangement of treatments was used to determine the effects of olaquindox and cyadox on immune response of Landrace${\times}$Large-White geld piglets that had been orally given 10$^{10}$ CFU of Escherichia coli (E. coli, O$_{139}$:K$_{88}$). Factors included (1) E. coli inoculation or control, and (2) no antimicrobials, 100 mg/kg olaquindox and 100 mg/kg cyadox in the basal diet respectively. E. coli inoculums were orally administered 7 days after the diets were supplemented with olaquindox and cyadox. The effects of the two antimicrobials were assessed in terms of: (1) average daily gain (ADG), (2) systemic immune response (the number of white blood cells and lymphocytes, leukocyte bactericidal capacity, lymphocyte proliferation response to PHA, immunoglobulin concentrations, and total serous hemolytic complement activity), and (3) intestinal mucosal immunity including the number of intraepithelial lymphocytes (IELs) and immunoglobulin A secreting cells (ASCs) in the intestinal lamina propria. E. coli inoculation reduced ADG (p<0.05) during the period of d 0 to d 14 after the challenge while the antimicrobial supplementations improved ADG (p<0.01) during the experiment. ADG in cyadox-supplemented pigs was higher (p<0.05) than that in olaquindox-supplemented pigs. The antimicrobials decreased IEL and ASC counts in the jejunum and ileum (p<0.01) while E. coli inoculation caused them to increase (p<0.01). Jejunal ASCs in the cyadox-supplemented pigs were lower (p<0.05) than those in the olaquindox-supplemented. E. coli elicited increase (p<0.05) in white blood cell counts, leukocyte bactericidal capacity, lymphocyte proliferation rate, serous IgA concentrations, and serous hemolytic complement activity. The antimicrobials decreased the measured systemic immune parameters, but not significantly (p>0.05). The data suggest that olaquindox and cyadox suppress E. coli-induced immune activation, especially intestinal mucosal immune activation, which may be involved in the observed growth promotion.
연구는 어류에 각종 생약재를 투여하였을 때 나타나는 방어 능력의 변화와 질병에 대한 예방 효과를 밝히고자 수행되었다. 실험의 내용은 인삼(Panax ginseng), 구기자(Lycium chinense), 하수오(Polygonum multiflorum), 오미자(Schizandra chinensis)의 첨가 사료를 나일틸라피아에 일정 기간 투여한 후 실험어의 성장, 비특이적 방어 능력 및 생리학적 기능에 미치는 영향을 조사한 것이다. 실험에 사용한 각종 생약재 중에서 체중의 증가는 구기자 3% 투여구가 가장 높게 나타났다. 보체의 살균 능력은 모든 실험구에서 살균력이 12주째에 증강되었고 보체의 용혈 능력도 모든 생약재 투여구에서 대조구 보다 높고 특히 인삼 2% 투여구에서 가장 높게 나타났다. 그러나 라이소자임의 용균능력과 신장의 부착 식세포 활성 산소 생성 능력은 구기자 3% 투여구가 가장 높았다. 그리고 나일틸라피아에 병원성을 지닌 Edwardsiella tarda 균주로 공격 실험한 결과 구기자 3% 투여구가 생존율이 85%로 가상 높았다. Hematocrit, hemoglobin, total protein, glucose, GOT, GPT와 같은 혈액의 생리학적 지표 성분을 분석한 결과 생약재를 첨가한 사료를 먹인 실험어는 대조구와 차이가 없으며 생리적 기능 면에서 나쁜 영향을 주지 않는 것으로 조사되었다. 따라서 인삼, 구기자, 하수오, 오미자 등과 같은 생약재는 그 종류에 따라 나일틸라피아의 성장률, 각종 비특이적 면역력을 증강시키는 능력과 병원성 세균에 대한 저항력의 증강 효과에 차이가 있지만 장기간 투여하여도 생리 기능에 문제를 야기하지 않는 것을 알 수 있었다. 모든 실험 결과를 종합해 보면, 실험에 사용한 각종 생약재 중에서 구기자는 가장 경제적이며, 각종 면역 기능 증강 효과가 뛰어나므로 새로운 사료내 첨가물로서의 충분한 가치가 있으며, 양식 어가에 많은 도움을 줄 것으로 생각된다.
이종간 장기이식은 즉각적이고 비가역적 초급성 거부 반응을 초래하는데 자연항체인 IgM이 주원인으로 알려져 있다. 따라서 항체를 제거하는 것이 초급성 거부반응을 감소시키는 하나의 방법이 될 수 있다. 이에 연구자들은 돼지\$\longrightarrow$ 개 이소 심장이식 모델에서 자연항체를 제거하기 위해 원심분리 후 혈장분반술(postcentrifugal plasmapheresis-PCPP)을 사용하고 수혜견의 항체 변화와 이종 심장이식 시 생존시간을 관찰하였다. 대상 및 방법: 10∼20 kg의 이계 교배시킨 돼지를 공여돈으로, 25∼30 kg의 잡종개를 수혜견으로 사용하였다. 실험군에 해당하는 수혜견은 COBE TPE plasmapheresis device(COBE Laboratories, Lakewood. CO)로 PCPP를 시행하였다. 심장이식 2일 전과 이식 당일 PCPP를 진행하였다. 대조군은 PCPP를 수행하지 않았다. 그룹 1에서는 PCPP를 1 plasma-volume(PV)을 시행하고, 2일 후 2 PV를 실시하였다. 그룹 2는 2 PV를 시행하고 2일 후 2 PV로 PCPP를 실시하였다. 돼지의 심장은 이소심장 이식법으로 수혜견의 복강내 신하(infrarenal) 대동맥과 하대정맥에 이식하였다. 수혜견 혈장내의 총 IgM과 IgG의 분석은 ELISA방법을 이용하였다. 실험에서 얻은 시료로 혈청 albumin, 전해질, 보체 활성도와 응고 인자의 변화를 관찰하였다. 또한 이식된 심장의 초급성 거부 반응을 확인하기 위해 이식 거부반응을 경험한 심장 절편을 조직 병리학적으로 관찰하였다. 결과: PCPP 방법으로 처리한 그룹 2에서의 혈장내의 총 IsM과 IgG의 제거율은 각각 95.7$\pm$1.2%, 80.5$\pm$2.4%를 나타냈다. 또한 각 그룹에서 혈청 albumin 농도가 감소하는 것을 관찰하였는데 그룹 1에서는 2.8에서 1.4g/㎗, 그룹 2에서는 3.0에서 1.5 g/㎗의 감소를 보였다. 보체 활성도는 PCPP를 시행하면 감소하였다가 PCPP시행 후 약 24시간 후면 정상으로 회복되었다. 2 PV로 2회 시행한 PCPP에서의 보체 활성도는 시행 전의 10% 수준까지 감소되었다. PCPP가 혈액응고인자에 미치는 영향을 보면 2 PV의 PCPP 시행으로 fibrinogen의 농도가 시행 전의 20% 수준 이하로 떨어졌으나 이 효과는 24시간 이내에 회복되었고 antithrombin III도 비슷한 양상을 보였으나 fibrinogen보다 소폭의 감소를 보였다. PT, aPTT는 PCPP도중에 간혹 연장되는 경우가 있었으나 늘 일정한 결과는 아니었으며 이식 후에 측정 가능 범위 이상으로 연장되었다. D-dimer의 경우 PCPP 시행 동안에는 검출되지 않았으나 이식 후 10분부터 검출되어 지속되었다. PCPP를 수행하지 않은 그룹 0 수혜견에 이식한 심장의 생존시간은 5분이었으나 PCPP에 의해 자연항체를 제거 후 이식된 심장의 생존시간은 90분으로 현저한 증가를 보였다. 또한 조직 병리학적으로도 이식 거부에 대한 특징이 그룹 0에 비해 그룹 2에서 지연됨을 확인하였다. 결론: PCPP는 수혜견의 자연항체를 효과적으로 제거하여 초급성 거부반응을 감소시킴으로써 결국 돼지의 이종 이식 전 심장의 생존시간을 증가시켰다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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