Park, Minju;Baek, Eseul;Yoon, Ju-Yeon;Palukaitis, Peter
The Plant Pathology Journal
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제33권4호
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pp.429-433
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2017
Chrysanthemums (Chrysanthemum morifolium) are susceptible to tobacco mosaic virus (TMV). TMV-based expression vectors have been used in high-throughput experiments for production of foreign protein in plants and also expressing green fluorescent protein (GFP) to allow visualization of TMV movement. Here, we used TMV expressing the GFP to examine the infection of chrysanthemum by a TMV-based expression vector. Viral replication, movement and GFP expression by TMV-GFP were verified in upper leaves of chrysanthemums up to 73 days post inoculation (dpi) by RT-PCR. Neither wild-type TMV nor TMV-GFP induced symptoms. GFP fluorescence was seen in the larger veins of the inoculated leaf, in the stem above the inoculation site and in petioles of upper leaves, although there was no consistent detection of GFP fluorescence in the lamina of upper leaves under UV. Thus, a TMV-based expression vector can infect chrysanthemum and can be used for the in vivo study of gene functions.
$AOS(\alpha-olefin),$ LAS(linear alkyl benzene), OSS(dioctyl sulfosuccinate) 및 SAS (dodecyl benzene sulfonic acid)등 4종 계면활성제의 TMV 감염저지 효과를 잎담배 품종 Xan-thi-nc 및 NC 82를 이용하여 조사하였다. 각 계면활성제를 2,500ppm 농도로 담배잎에 처리한 경우 바이러스(TMV) 또는 TMV RNA를 접종했을 때 모두 98% 이상의 감염저지 효과를 나타냈다. 그러나 이들을 담배 근권토양에 처리 3일후 잎에 Virus를 접종하여 병징 및 엽중 Virus 농도를 조사한 결과 무처리구와 차이가 없어 침투이행에 의한 TMV 감염저지 효과는 인정되지 않았다. 순화된 바이러스를 각 계면활성제 2,500ppm 용액과 혼합한 후 초고속원심분리에 의해 다시 Virus를 회수하여 활성을 조사한 결과 LAS는 96% 이상 Virus를 불활성화시켰으며, 이 외는 바이러스 활성에 영향을 미치지 못했다. 또 각 계면활성제가 처리된 Virus 입자의 형태는 무처리입자와 차이가 없었다. 이같은 결과들로 미루어 4종의 계면활성제가 나타낸 TMV 감염저지 효과는 바이러스 입자의 파괴 또는 감염초기 바이러스 입자의 외피 단백질 탈피억제에 의한 것이 아닌 것으로 판단된다.
Introduction of vegetatively propagated Petunia hybrids since 1992 led to increasing virus infections of propagation material. Petunia hybrid 'Surfinia' cultivated for pot-plant showed yellowing symptom along with stunt. Flowers were smaller in size and showed color-break symptom. Tobacco mosaic virus(TMV-pet) was isolated from the diseased petunia. Healthy petunia plants inoculated with TMV-pet induced mottle on leaves and color-break on flowers, and plants were stunted. Nucleotide sequences of coat protein gene amplified from RNA prepared from Nicotiana tabacum cv. Samsun infected with TMV-pet were determined(GenBank accession no. DQ981481). It showed 99.0% nucleotide sequence homology with TMV-potato3-2(GenBank accession no. AF318215) isolated from potato showing yellow mosaic and stunt symptom, and with a TMV Korean strain(GenBank accession no. X68110). This is the first reported observation of TMV from vegetatively propagated petunia in Korea.
Kim, Young-Ho;Choi, Do-Il;Yeo, Woon-Hyung;Kim, Young-Sook;Chae, Soon-Yong;Park, Eun-Kyung;Kim, Sang-Seock
The Plant Pathology Journal
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제16권5호
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pp.264-268
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2000
A fluorescent material was accumulated in inoculated leaves showing necrotic local lesions of tobacco plants with N gene, Nicotiana tabacum cvs. Xanthi-nc NN, Samsun NN, Burley 21 and KF 114, and N. glutinosa, and Datura stramonium at the early growth stages by the inoculation of Tobacco mosaic virus (TMV). It was identified as a coumarin phytoalexin, scopoletin. Although the material was most prominently produced in TMV-inoculated tobacco leaves with local necrotic lesions, its accumulation was also noted in uninoculated leaves of TMV-inoculated plants. Its accumulation was somewhat greater in high resistance-induced leaves than low resistance-induced and intact leaves. Scopoletin treatment induced the expression of a pathogenesis-related protein, PR-1, prominently at the concentration of 500 or 1000 ${\mu}$g/ml. This suggests that scopoletin is a phytoalexin abundantly accumulating in N gene-containing resistant plants in response to TMV infection, and may be related to hypersensitive responses (HR) and systemic acquired resistance (SAR) in the resistant tobacco plants.
The cDNAs derived from the coat protein (CP) genes of six plant RNA viruses, tobacco mosaic virus-pepper strains (TMV-P) and -ordinary strain (TMV-OM), potato virus Y (PVY), turnip mosaic virus (TuMV), cucumber mosaic virus (CMV) and potato leafroll virus (PLRV), were subcloned into the transcription vector, pSPT18, containing SP6 and T7 promoters. The digoxigenin (DIG)-labeled RNA polymerase after linearlization of the cloned pSPTs with XbaI or SacI, and were tested for their sensitivities for the detection of the six viruses. In slot-blot hybridization, dilution end points for the detection of TMV-P and TMV-OM were 10-4, while those of PVY, TuMV and CMV were 10-3. PLRV was detected at the dilution of 10-2. When each RNA probe was applied for the detection of the viruses in the preparations from the leaf disks (8 mm in diameter, and 12 to 15 mg in weight) of infected natural host plants, TMV-P, TMV-OM and TuMV could be detected from one disk, while PVY from 1 or 2 disks. CMV was detected in the preparation from two disks, and PLRV from three disks. With DIG-labeled RNA probe, PVY was detected at 5 days after inoculation, but with ELISA the virus was detected at 8 days after inoculation to tobacco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc) plants on which symptoms appeared at 9 days after inoculation. No difference was observed in cross reaction between the RNA probes for the detection of TMV-P and TMV-OM.
Out of various fungi and bacteria tested for inhibition of Tobacco mosaic virus(TMV) infection using Nicotiana tabacum cv. Xanthi-nc, a bacterial isolate JB-l, identified as Pseudomonas putida had a strong direct inhibitory activity against the TMV infection. Its systemic or indirect activity was also noted at more than a half level of the direct control efficacy. Disease severity was reduced significantly in the susceptible tobacco N. tabacum cv. NC 82 by the treatment of the bacterial culture filtrate, somewhat more by the pretreatment than by simultaneous treatment, probably by inhibiting the TMV transmission and translocation in the plants, showing negative serological, which responses in the viral detection by DAS-ELISA. TMV-inhibitory substances from P. putida JB-1 were water-soluble, stable to high temperature(even boiling), and to a wide range of pH. As proteinase K nullified their antiviral activity, the TMV inhibition activity of P. putida may be derived from proteinaceous materials. In electron microscopy, TMV particles treated with the JB-1 culture were shown to be shrunken with granule-like particles attached on them. All of these aspects suggest that P. putida JB-1 may be developed as a potential agent for the control of TMV.
Tobacco plants(Nicotiana tabacum cv. NC82) transformed with TMV CP cDNA were self-fertilized until 8th generation (R$_{8}$), and the transgenic plants from 6th to 8th generation were analized for their resistance to tobacco mosaic virus(TMV) and stability of the gene expression. The 6th generation of the plants(R$_{6}$) showed high resistance(81-91 %) to TMV at eight weeks after artificial inoculation with the virus. The transgenic cell line 601 was the most prominant in the expression of resistance. 98 % of the plants showed no symptom without any agronomic phynotepe variation when they were inoculated with the virus in a experimental field. However, 2% of the plants were revealed as delay type of symptom with mild mosaic on a few leaves. The viral resistance in greenhouse tests of the 7th generation (R$_{7}$) was 54-64%, and the number of delay type plants were increased than that of 6th generation plants. In the 8th generation, 81 % of the plants was complete resistant to the virus. The TMV CP cDNA of the transgenic plants of each generation was also confirmed by genomic PCR, and there was no systemic viral multiplication in the resistant plants. It suggests that the viral resistance and gene expression of the transgenic plants might be stable through the generations.ons.s.
Complementary DNA of the movement protein (MP) gene of tobacco mosaic virus Korean pepper strain (TMV-KP) was synthesized from purified TMV-KP RNA by using the reverse transcription and polymerase chain reaction (PCR) system. The synthesized double stranded cDNA was cloned into the plasmid pUC9 and transformed into Escherichia coli JM110. The movement protein gene of TMV-KP of the selected clones was subjected to sequence analysis by Sanger's dideoxy chain termination method. The complete sequence of viral MP gene from TMV-KP strain was 807 nucleotides long. The nucleotide of MP gene from TMV-KP has thirteen and two nucleotide differences from TMV vulgarae (TMV-OM) and Korean (TMV-K) strains, respectively. Thus, the nucleotide sequence of TMV-KP MP gene showed higher homology of 99% with that of TMV-K MP gene.
Tobacco mosaic virus (TMV), TMV-common strain, causes severe damage on flue-cured tobacco in Korea. As the results, breeding programs were conducted to transfer the TMV resistance from NC567 to other cultivars. Advantage of F1, hybrid may not lie only in their heterotic value but also in directly combining of valuable dominant traits, e.g. for disease resistance, either in pairs or as groups already assembled in the two parents. A new TMV resistant flue-cured tobacco variety KF114 was developed from a cross as maternal parent MSNC567 and NC82 at the Suwon Experiment Station. KF114 was more vigorous growth characteristics in early stage than that of NC82, standard variety in Korea, and other characters were similar to those of NC82. It os high resistance to TMV, but bacterial wilt(Pseudomonas solanacerum) and black shank (Phytophthora parasitica var. nicotianae) is comparable to NC82. It should adapt well to the flue-cured production area and can reduce premature flowering under unfavorable weather conditions. Yield of KF114 is 1% to 5% higher, and nearly equal in value per KG compared with NC82. This variety, F1 hybrid, met acceptable standards for chemical and physical characteristics of cured leaf and high ranked good smoking taste by panel members in Korea Ginseng and Tobacco Research Institute.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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