Pyrimidine salvage과정 및 de novo 합성과정에 작용하는 억제제들이 Toxeplasma gondii의 특이한 uracil 도입 과정에 미치는 영향을 방사능을 표지한 uracil과 thymidine을 사용하여 검토하였다. Dihydrofolate reductase (DHFR)에 작용하는 억제제인 methotreBate, pyrimethamine 그리고 thymidylate synthase(75)의 경쟁적 억제제인 fluoro-uridine, fluoro-dUMP, fluoro-uracil을 각각 처리한 경우, 그 농도에 비례적으로 uracil 표지가 감소 하였다. OMP decarboxylase에 작용하는 억제제인 azauridine에 대해서는 100$\mu$M 농도 이상에서도 uracil 표지량에 변화가 거의 없었다. 본 결과로부터 Toxoplasma가 uracil을 DNA로 도입할 때 dihydrofolate reductase와 thymidylate synthase가 관여하는 TMP biosynthesis 과정이 중요함을 알 수 있었고, uracil salvage 과정이 있는 다른 기생성 원충의 경우와 비교했을 때 Toxoplasmn에 있어서도 효율적인 다기능의 DHFR-75 system의 존재를 예상할 수 있었다. Thymidine 도입의 양상은 모든 경우에 있어 HL-60세포만의 경우와 Toxoplasma가 함께 배양된 HL-60세포에서 차이가 없었다. 이로부터 thymidine은 Toxoplasmn 성장을 반영하지 않음을 알 수 있었다. Toxoplasma의 특이한 uracil 표지와 Toxoplasma에 배타적인 thymidine 표지는 기생원충과 숙주세포의 성장, DNA합성 정도 및 이들 과정에 미치는 제제들의 영향을 쉽고 간단하게 연구할 수 있는 방법이 된다.
We investigated the cytogenetic characteristics of male black-striped field mouse (Apodemus agrarium) in Korea. Chromosome slides were obtained from blood cell cultures which were synchronized with thymidine blocking or not. In the chromosome slide which synchronization with thymidine blocking was employed on, the GTG(G bands by trypsin using Giemsa)-bands of high resolution were observed. The male black-striped field mouse has 48 chromosomes composed 46 autosomes and XY sex chromosomes. The centromeric regions of autosomes were positive to GTG-banding. According to this investigation, thymidine blocking in cell culture process was useful to get lengthened chromosomes. It may be necessary to employ RBG-banding technique to investigate complementary band patterns between R- and G-banding in black-striped field mouse.
An expression vector in a mammalian cell was constructed using the origin of replication (OR) and the promoters of SV40. The plasmid pSVOE was constructed by inserting SV40 DNA fragment (1, 118bp) containing SV40 OR and promoters into pBR322-1, and then a multiple cloning sequence was inserted at the immediate downstream of the late promoter of SV40 in the pSVOE vector. The plasmid was named pSVML. As a selection marker, thymidine kinase gene of herpes simplex virus with its promoter was inserted into EcoRI site of pSVML and the recombinant was named pSVML-TKp. To test the expression capacity of foreigen gene inserted at the multiple cloning site of pSVML, the thymidine kinase gene without its own promoter was inserted at the BamHI site of pSVML. The recombinant was named pSVML-TK. These plasmids, pSVML-TKp and pSVML-TK, were transfected into COS cells with calcium phosphate precipitation method. The thymidine kinase activity was significantly increased in both transfected cells.
By considering the biological properties of a tumor, it should be possible to realize better results in cancer therapy. PET imaging offers the opportunity to measure tumor growth non-invasively and repeatedly as an early assessment of response to cancer therapy. Measuring cellular growth instead of energy metabolism showed offer significant advantages in evaluating therapy. Thymidine and its derivative nucleoside compounds can be changed to mono, di- and tri- phosphate compounds by thymidine kinase and then be incorporated into DNA. Their bindings are increased in highly proliferating cells due to the high DNA synthesis rate. To evaluate cell proliferation, many kinds of thymidine and uridine derivatives have been labeled with positron emitter and radioactive iodine. Compared to radiopharmaceuticals which have radioisotope labeled base ring such as pyirmidine, the radiopharmacuticals which have radioisotope labeled sugar ring are more stable in vivo and have metabolic resistance. The biological properties such as DNA incorporation ratios are highly dependent on their chemical structures and metabolic processes. This overview describes synthesis of radiopharmaceuticals and their biological properties for imaging of tumor cell proliferation.
The 8-methoxypsoralen$<^{4',5'}_{5',6}>$ thymidine monoadducts are isolated from the irradiation mixture of 8-methoxypsoralen and thymidine in a dry film state by a flash column followed by lobar column chromatography. Some physical properties of the adducts were determined. The fluorescence maximum and quantum yield of the monoadduct are dependent on the solvent polarity and the phosphorescence to fluorescence quantum yield ratio was 2.10 which was significantly increased by external heavy atoms. The phosphorescence lifetime was 1.2s which is relatively large compared to other coumarin derivatives. Accurate spectral data of the monoadducts are presented.
The spectroscopic studies of the 5,7-dimethoxycoumarin(5,7-DMC) and 4,5',8-trimethylpsoralen(TMP) and the conformational stability of 5,7-DMC-thymidine, 4,5',8-TMP-thymine were carried out by the CNDO/S and molecular mechanics calculation. Theoretical transition energies and direction of polarizations calculated by the CNDO/S method have been used for the interpretation of the observed results. The calculated absorption spectra of 5,7-DMC are qualitatively similar to experimental ones with their characteristic visible bands. MM2 force field calculation on the possible $C_4-cyclophotoadducts$ formed between 5,7-DMC and thymidine through a cycloaddition. of $C_3$, $C_4$ bond of 5,6-DMC to $C_5$, $C_6$ bond of thymidine showed the most stable photocycloadduct to have the anti-head to tail configuration. The major photoadduct of 4,5',8-TMP-thymine has the cis-anti configuration.
인삼주정추출액이 ACTH를 받은 마우스의 간 조직 DNA 합성능에 미치는 영향을 알기 위하여 30마리의 마우스 $(18{\sim}20\;gm)$ 수컷을 인삼-ACTH 군과 식염수-ACTH 군으로 나누어 다음과 같은 실험을 하였다. 인삼주정추출액 혹은 식염수 투여가 시작된지 5일째 되는 날에 해당 약물을 주사한 후 1시간만에 ACTH를 투여하고 다시 1시간만에 $[^3H]$ thymidine을 단 1회에 복강속에 주사하고 이어서 이를 마우스를 1, 10, 및 24시간 후에 각각 도살하여 간 조직을 적출하고 자기방사법을 이용하여 방사능 지수를 계수한 바 다음과 같은 결과를 얻었다 1. $[^3H]$ thymidine 주사 후 1, 10 및 24시간만에 관찰된 식염수-ACTH군의 간 조직 방사능 지수는 각각 $1.50{\pm}0.32,\;2.16{\pm}0.33$및$2.79{\pm}0.31$이었다. 2. 인삼-ACTH군의 간 조직 방사능 지수는 1, 10 및 24시간만의 값이 각각 $2.71{\pm}0.22,\;3.85{\pm}0.29$및$5.06{\pm}0.31$로 나타났다. 그러므로 인삼-ACTH군 간조직 방사능 지수는 식염수-ACTH군의 해당 값보다 현저하게 증가하였다. 이상의 결과로 미루어 보아 인삼-ACTH주사로 인하여 야기되는 마우스의 간 조직 DNA 합성능의 저하를 어느 정도 막는 것으로 추측된다.
인삼주정추출액 투여에 의하여 마우스 악하선 조직의 DNA 합성능이 어떤 영향을 받는지를 알기 위하여 30마리의 마우스 (몸 무게 $18{\sim}20$ gm) 수컷을 15마리씩 두 무리로 나누어 한 무리에는 생리적 식염수를 다른 무리에는 인삼주정추출액(인삼주정추출물 4mg 을 생리적 식염수 1ml 속에 용해시켜 만든 용액)을 마우스의 몸 무게 10gm에 대하여 0.05ml씩 5일 동안 주사한 후 $[^3H]-thymidine$을 복강 속에 주사하고 1, 10 및 24시간 만에 도살하여 자기방사법을 이용하여 악하선의 합성능을 비교 관찰한 바 인삼주정추출액을 투여받은 마우스의 악하선 조직의 표지 세포수는 식염수만을 투여받은 마우스의 그것에 비하여 적었다. 그러므로 인삼주정추출액은 마우스의 악하선 조직 DNA 합성능을 어느 정도 억압한다고 믿어진다.
본 연구에서는 전자현미경과 Radioautography에 의하여 가잠의 휴면 기구를 연구하였다. 1. 가잠의 휴면성은 최청중의 온도와 명장에 의하여 변하기 쉬운 것으로서 특히 배자의 후기와 관계가 깊다는 사실은 잘 알려저 있다. 그러므로 저온과 고온최청의 경우 가잠의 배자 발생 단계중에 있어서 핵산과 단백질의 전구물질을 사용하여 합성의 Pattern을 조사하였다. 고온최청 때에는 반전후 3일째에 $^3$H-glycine이 배자의 뇌와 식도하신경구에 다량으로 들어가 있는 동시에 타부위에도 약간이나마 들어가 있었다. 그러나 저온최청 때에는 뇌와 식도하신 경구 그리고 타부위 사이에 차이가 없었다. 고온과 저온과의 사이에는 배자의 DNA 합성의 차리를 인정할 수 없었다. 산난후 20일째의 휴면난에 있어서는 소수의 중배엽세포의 핵에 들어가 있었으나 월연한 잠난에 있어서는 중배엽의 전핵에 들어가 있었다. 고온과 저온최청때에 반전후의 배자의 전부 즉 뇌와 식도하신경구의 주위에만 $^3$H-thymidine이 들어가 있는 것을 볼 수 있었으나 후부에서는 전혀 볼 수 없었다. 한편 전 최청기간중 또는 산난후 20일째의 난황세포에 있어서는 단백질합성과 나NA 합성을 인정하지 못하였으나 월년난 배자의 부속지 발생전까지는 RNA합성이 관찰되었다.
250g내외의 횐쥐에게 Thiry-Vella fistula를 만든 후 수술과 비경구 영양 효과로 인하여 위축되는 소장의 누공에 각각 nucleosides/nucleotide혼합용액 (Nuc군)이나 glutamine(Gln군), glycine(Gly군)등을 투여하여 소장 점막의 위축 방지나 재생효과가 있는지를 알아보고 자 실험하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Thiry-Vella fistula 시술 후 9일 동안 2일에 한 번씩 총 4회 소장 누공으로 주입한 이미노산들과 nucleosides/nucleotide 혼합물의 효과는 누공의 소장 점막에 미치는 직접적인 효과와 비누공 부분에 대한 간접적인 효과로 나누어 볼 수 있다. Nucleosides/nucleotide 혼합물은 소장 누공으로 주입되어 직접 접촉되는 부분의 소장 DNA함량을 유의적으로 증가 시켰으며 단백질 함량도 높은 수치를 보여 주었고 조직 검사 결과 소장 융모의 길이와 표면적을 증가시킨 것으로 나타났다. 그러나 [$^3$H] thymidine incorporation의 결과는 대조군과 유의적인 차이를 보이지 않았다. Glycine은 소장 단백질과 DNA에 있어서 대조군보다는 높고 Nuc군보다는 낮은 경향을 보여 주었으나 [$^3$H]-thymidine incorporation은 누공과 비누공부분에서 모두 가장 높게 나타났으며 특히 비누공부분에서는 유의적으로 증가되어 있었다. Glutamine의 효과는 glycine 투여 효과와 비슷하거나 오히려 떨어지는 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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