호르몬이 결여되고 polyamine이 농도별로 처리된 M MS배지에서 10일 동안 발아생장(light, 16hrs: d dark, 8hrs) 시켜서 얻은 벼 잎 절편에서 엽록소 함 량은 polyamine 처리구가 대조구에 비해 높았으며, s spermine(O.OlmM, O.lmM, ImM) 이 가장 효과적이였다. 한편 chloroplast peroxidase의 활성은 polyamine 처리구가 대조구에 비해 전반적으로 높았으며, 특히 1mM spermidine 처리구는 약 100% 정도 활성을 증가시켰다. SDS-PAGE에 의해 chloroplast thylakoid membrane protein의 band를 조사한 결과 polyamine 처리구와 대조구에서 56, 2 25Kd의 major band를 얻었으며 이 band들의 total a area는 polyamine 처리구가 대조구 보다 더 높았다. 이러한 결과들은 벼 유식물에서 엽록체 발달에 p polyamine이 중요한 인자로 작용한 것으로 사료된다.
Photosynthesis of plant, algae, and certain types of bacteria can convert solar energy to electrons at high efficiency. There have been many research investigations to utilize this mechanism to develop photosynthetic bio-solar energy systems. In this article, the fundamentals of photosynthetic energy conversion mechanism are explained and various approaches are introduced and discussed.
Delayed luminescence of plant leaves was imaged by a 2-D cooled charge-coupled device. We report the delayed luminescence imaging of normal/injured leaves picked ami the leaves intact. The luminescent intensity was lower in leaf veins, scars and edge cut. The intensity of delayed luminescence from intact leaves was higher than that of picked leaves. These results indirectly support the argument that the delayed luminescence of a photosynthetic system is closely related to the electron transfer process of PSII in the thylakoid membrane.
Correlative changes between photosynthetic O2 exchange rates and room temperature Chl fluorescence were investigated in wheat (Triticum aestivum L.) chloroplasts treated with high temperature for 5 min. With increasing treatment temperature, photosynthetic O2 evolution rate mediated by PSII was decreased, showing 50% inhibition at 38$^{\circ}C$ (I50). But PSI activity measured by O2 uptake rates was stimulated as a function of increasing temperature. Dark level fluorescence (Fo)-temperature (T) analysis showed that fluorescence rising temperature (Tr), critical temperature (Tc), and peak temperature (Tp) was 38, 43, and 52$^{\circ}C$, respectively. Quenching analysis of Chl fluorescence showed that both the oxidized fraction of plastoquinone (qQ) and degree of thylakoid membrane energization (qNP) increased up to 4$0^{\circ}C$ and then declined dramatically. These results suggest that Tr is correlated with temperature showing a 50% of inhibition of photosynthesis and under mild high temperature stress, qNP is worth regarding as indicator for heat-induced damage of photosynthesis.
iso-Butanol이 엽록체의 광합성 전자전달 활성에 미치는 영향을 연구하기 위하여 암조건하에서 시금치의 엽록체에 iso-butanol을 처리한 후 대조구와 비교하여 광계 II 활성과 광계 I 활성을 조사하였으며, 또한 iso-butanol이 틸라코이드 막단백질에 미치는 영향을 알아보기 위해 전기영동으로 틸라코이드 막단백질의 변화를 조사하였다. 광계 I 활성은 iso-butanol이 저농도(1-4%)일 때는 증가하였으나 고농도(5-9%) 에서는 감소되었다. 광계 II 활성은 iso-butanol의 농도가 0.6, 0.8, 1%에서는 각각 75%, 55% 및 25%로 활성이 감소하였다. Butanol 중에서 탄소수는 같으나 OH 기의 위치가 다른 1-butanol, sec-butanol, tert-butanol, iso-butanol이 광계 II의 전자전달계에 미치는 영향을 비교해 본 결과 OH 기를 중심으로 탄소의 배열이 직선상 일 때 저해효과가 크다는 것을 알 수 있었다. iso-butanol이 1차적으로 광계 II에 미치는 억제 부위는 0.8% iso-butanol 처리구에 DPC 첨가했을 때 DCIP 환원율이 93%로 증가하는 것으로 보아 광계 II의 산화 부위임을 알 수 있다. 0.8% iso-butanol 처리구에 외부에서 망간과 칼슘을 첨가하였을 때 광계 II 활성이 각각 83%와 79%로 보호된 것으로 보아 광계 II 활성 억제는 망간의 소실과 관계 있는 것으로 생각된다. 또한 1% iso-butanol 처리한 엽록체를 20배 희석하였을 때 활성이 78%로 회복되었다. iso-Butanol은 1% 이하의 저농도에서 광계 II 활성을 감소시킨데 비해 1% iso-butanol 처리구의 틸라코이드 막단백질의 SDS-PAGE에 의한 band pattern은 대조구와 유사하며 2% 처리구에서는 52 Kd 부근에서 미세한 band pattern의 차이가 있으며 5%의 iso-butanol 처리구의 틸라코이드 막단백질의 band는 전체적으로 많이 소실되었다. 이것으로 보아 iso-butanol은 가역적으로 광계 II의 산화부위에 관여하는 단백질에 영향을 주어 $Ca^{2+}와\;Mn^{2+}$ 이온의 친화력을 저하시켜 광계 II 활성을 억제시키고 또한 알코올의 R-group의 틸라코이드 막에 침투하여 막구조를 변형시키므로 광계 I 활성이 증가하며 고농도(5-9%)에서는 비가역적으로 막구조를 변경하여 광계 I 활성이 감소한 것으로 사료된다.
한국식물학회 1999년도 Proceedings of the 17th Symposium on Plant Biology Environmental Stress and Photosynthesis
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pp.83-90
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1999
Electron crystallography of two-dimensional crystalsand electron cryo-microscopy is becoming an established method for determining the structure and function of a variety of membrane proteins that are providing difficult to crystallize in three dimension. In this study this technique has been used to investigate the structure of a ~160 kDa reaction centre sub-core complex of photosystem II. Photosystem II is a photosynthetic membrane protein consisting of more than 25 subunits. It uses solar energy to split water releasing molecular oxygen into the atmosphere and creates electrochemical potential across the thylakoid membrane, which is eventually utilized to generate ATP and NADPH. Images were taken using Philips CM200 field emission gun electron microscope with an acceleration voltage of 200kW at liquid nitrogen temperature. In total, 79 images recorded dat tilt angles ranging from 0 to 67 degree yielded amplitudes and phases for a three-dimensional map with an in-plant resolution of 6$\AA$ and 11.4$\AA$ in the third dimension shows at least 23 transmembrane helices resolved in a monomeric complex, of which 18 were able to be assigned to the D1, D2, CP47 , and cytochrome b559 alfa beta-subunits with their associated pigments that ae active in electron transport (Rhee, 1998, Ph.D.thesis). The D1/D2 heterodimer is located in the central position within the complex and its helical scalffold is remarkably similar to that of the reaction centres not only in purple bacteria but also in plant photosystem I (PSI) , indicating a common evoluationary origin of all types of reaction centre in photosynthetic organism known today 9RHee et al. 1998). The structural homology is now extended to the inner antenna subunit, ascribed to CP47 in our map, where the 6 transmembrane helices show a striking structural similarity to the corresponding helices of the PSI reaction centre proteins. The overall arrangement of the chlorophylls in the D1 /D2 heterodimer, and in particular the distance between the central pair, is ocnsistent with the weak exciton coupling of P680 that distinguishes this reaction centre from bacterial counterpart. The map in most progress towards high resolution structure will be presented and discussed.
The ozone depletion has caused plants to be exposed to an increased penetration of solar ultraviolet-B (UV-B) radiation. Enhanced UV-B radiation may have influence on biological functions of plant in many aspects including inhibition of photosynthesis. It is evident that UV-B can potentially impair the performance of all three main component processes of photosynthesis, the photophosphorylation reactions of the thylakoid membrane, the $CO_2$-fixation reactions of the Calvin cycle and stomatal control of $CO_2$ supply. Owing to these depressed reactions, the production and allocation of carbohydrates might be markedly affected, and therefore, the growth and development of plant are distinctly reduced. In this review paper, we provide basic theory and further researches in terms of photosynthesis and carbohydrate synthesis in response to elevated UV-B radiation.
Effects of HgCl$_2$-treatment on electron transport, chlorophyll a fluorescence and its quenching were studied using isolated barley (Hordeum vulgare L. cv. Albori) chloroplasts. Depending on the concentration of HgCI$_2$, photosynthetic oxygen-evolving activities of photosystem II (PS II) were greatly inhibited, whereas those of photosystem I (PS I) were slightly decreased. The inhibitory effects of HgCl$_2$ on the oxygen-evolving activity was partially restored by the addition of hydroxyamine, suggesting the primary inhibition site by HgCl$_2$2-treatment is close to the oxidizing site of PS tl associated with water-splitting complex. Addition of 50 $\mu$M HgCI$_2$ decreased both photochemical and nonphotochemical quenching of chlorophyll fluorescence. Especially, energy dependent quenching (qE) was completely disappeared by HgCl$_2$-treatment as observed by NH$_4$CI treatment. In the presence of HgCI$_2$, F'o level during illumination was also increased. These results suggest that pH gradient across thylakoid membrane can not be formed in the presence of 0 $\mu$M HgCl$_2$. In addition, antenna pigment composition might be altered by HgCl$_2$-treatment.
Lincomycin, an inhibitor of plastid protein synthesis, was found to block the synthesis of apoprotein P700 with a molecular mass of 72 kDa and the assembly of the Chl a-protein of PS I. Synthesis of the polypeptides of 48, 43.5, and 32 kDa of the PS II complex is also suppressed. This process is accompanied by the disappearance of the PS Two reaction center Chl a at 683 nm, and of the PS One reaction center Chl a at 690, 696, and 705 nm on the fourth derivative of the absorption spectra at 77K. Lincomycin does not affect the synthesis of LHC subunits. It increases the content of the two main Chl forms of LHC at 648 nm (Chl b) and 676 nm (Chl a). The low-temperature fluorescence ratio F736/F685 is also increased. However, the effect of cycloheximide (an inhibitor of cytoplasmic protein synthesis) leads to the reduction of polypeptides of the light-harvesting Chl a/b-protein complex in the range of 29.5-22 kDa. Under these conditions, the relative amount of Chl b and the F736/ F685 fluorescence ratio decrease significantly. This is obviously the result of blocking the LHC I and LHC II synthesis. At the same time rifampicin and actinomycin D (inhibitors which block transcription in chloroplast and nuclear genome, respectively) inessentially affect the characteristics of these complexes.
In vitro analyses of type I signal peptidase activities require protein precursors as substrates. Usually, these pre-proteins are expressed in vitro and cleavage of the signal sequence is followed by SDS polyacrylamide gel electrophoresis coupled with autoradiography. Radioactive amino acids have to be incorporated in the expressed protein, since the amount of the in vitro expressed protein is usually very low and processing of the signal peptide cannot be followed by SDS polyacrylamide gel electrophoresis alone. Here we describe a rapid and simple method to express large amounts of a protein precursor in E. coli. We have analyzed the effect of ionophors as well as of azide on the accumulation of expressed protein precursors. Azide blocks the function of SecA and the ionophors dissipate the electrochemical gradient across the cytoplasmic membrane of E. coli. Addition of azide ions resulted in the formation of inclusion bodies, highly enriched with pre-apo-plastocyanine. Plastocyanine is a soluble copper protein, which can be found in the periplasmic space of cyanobacteria as well as in the thylakoid lumen of cyanobacteria and chloroplasts, and the pre-protein contains a cleavable signal sequence at its N-terminus. After purification of cyanobacterial pre-apo-plastocyanine, its signal sequence can be cleaved off by the E. coli signal peptidase, and protein processing was followed on Coomassie stained SDS polyacrylamide gels. We are optimistic that the presented method can be further developed and applied.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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