바실러스 서브틸리스 유전체에서 여러 환경의 적응에 이용할 것으로 보이는 새로운 small RNA를 찾는 시도로 다음과 같은 방식으로 유전체를 검색하였다. 첫째로 유전자들 사이에 존재하는 DNA 서열을 대상으로 전사인자들인 PerR, OhrR, Fur, Zur의 인식서열을 조사하였고, 둘째로 인자 비의존성 전사종결 부위를 조사하였다. 이들 조사에서 전사인자의 위치와 전사종결부위가 300 bp 내외에서 가까이 존재하는 후보 DNA 서열을 대상으로 전사인자 부위에서 전사촉진자의 서열이 발견되는지를 조사하였다. 이 결과 PerR 5개, Fur 2개, OhrR, Zur에서 각각 1개의 새로운 small RNA로 추정되는 부위가 발견되었다.
재조합 효모를 이용한 hirudin 발효생산조건의 최적화 연구를 수행하였다. Hirudin 유전자는 GAL10 promoter와 MFal 분비신호, GAL7 terminator와 결합되어 있다. 재조합 효모의 성장속도와 hirudin 최종 농도를 증가시키기 위하여 최적의 배지조성과 배양조건을 결정하였다. 최적의 배지조성과 배양조건은 yeast extract 40g/$\ell$, casamino acid 5g/$\ell$, 포도당 20g/$\ell$, galactose 30g/$\ell$, DO 50%, 온도 $30^{\circ}C$였다. 이 조건으로 2.5$\ell$ 발효조에서 회분식배양을 수행한 결과 비성장속도는 $0.13hr^{-1}$, 최종 건조균체농도는 30g cell/$\ell$, 최종 hirudin 농도는 64mg/$\ell$로 나타났다.
Kim, Jae-Hwan;Jee, Sang-Mi;Park, Cheon-Seok;Kim, Hae-Yeong
Food Science and Biotechnology
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제15권4호
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pp.625-630
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2006
Polymerase chain reaction (PCR) method was developed for the specific detection of insect-resistant rice containing cry1Ac gene derived from Bacillus thuringiensis (Bt). Primers were designed from the 35S promoter, NOS terminator, cry1Ac gene, and sucrose phosphate synthase (SPS) for general screening of Bt rice. By sequencing the PCR products from the two putative kinds of Bt rice, we designed a specific primer from the junction region between the cry1Ac gene and the NOS terminator that had been inserted into Bt rice. The construct-specific primer was employed to amplify a 147 bp product in the two lines of Bt rice. No amplified products were observed from the other Bt crops with various Bt genes introduced. In qualitative PCR analysis, the limit of detection was 0.005 ng from genomic DNA of Bt rice. In addition, PCR analysis was performed on 64 kinds of rice presently available in the Korean market, and no Bt rice was detected. This method presented in this paper can be used as a highly sensitive and specific detection method of Bt rice.
현재 유전자 변형 작물의 검정에는 CaMV 35S프로모터 혹은 NOS 터미네이터 등과 같이 형질전환에 널리 이용하는 유전인자를 검출하기 위한 PCR 기술이 널리 이용되고 있다. 본 연구에서는 유전자변형 감자를 검정하기 위한 새로운 기술로서 감자특이 internal control과 CaMV 35S 프로모터 혹은 NOS 터미네이터에 특이적인 프라이머를 이용한 경쟁적 이중PCR 방법을 개발하였다. 감자 유전자의 RAPD 결과 이용한 모든 품종에서 약 530 bp인 homozygous DNA 밴드를 증폭하는 특이 primer (rAGU4A)를 찾아 감자특이 internal control 증폭용으로 이용하였다. 이 프라이머에 의해 증폭되는 DNA는 TC 염기의 반복 빈도가 높은 repetitive 혹은 microsatellite DNA (AF541972)로 판단되었다. 이와 같은 단일 프라이머 internal control 증폭용으로 이용한 경쟁적 이중 PCR은 비특이적 PCR 산물을 줄일 수 있고, 기존 방법들에 비해 경제적이다. 현재 상품화되어 있는 유전자 변형 감자품종인 'New Leaf'의 경우도 형질전환에 이용한 유전인자로 CaMV 35S 프로모터와 NOS 터미네이터가 모두 이용되었으므로 이 기술을 이용할 경우 현재까지 상품화된 유전자 변형감자들의 효율적인 검정 기술로 이용될 수 있을 것으로 기대된다.
본 연구에서는 상처, 병원균의 침입 등에 의하여 발현양이 크게 증폭되는 토마토 PAL유전자의 promoter에 giant silk moth(Hyalophora cecropia)로부터 분리한 lytic gene의 genetic code를 일부 변경한 Shiva 유전자를 부착하여 담배, 감자 등의 작물에 형질전환을 시도하였다. 형질전환된 담배로부터 얻은 종자에 대한 kanamycin저항성 유전자의 유전분석, PCR 증폭 혹은 genomic Southern blot hybridization에 의하여 tPAL5 promoter-Shiva fusion gene의 염색체내로의 integration을 확인하였다. Kanamycin 저항성 유전자의 유전분석에서 선발된 7개체를 PCR 분석 실시한 결과 모든 개체가 positive임이 확인되었으나, genomic Southern blot Hybridization으로는 4개체가 negative로 나타났다. 특히 한 개체의 경우는 chromosome rearrangement 현상이 일어난 것으로 추정되었다. 감자의 경우는 남작(Irish Cobbler) 품종이 Zeatin 2.0 mg/L NAA 0.01 mg/L, GA$_3$ 0.1mg/L을 포함한 배지에서 callus형성율 및 shooting율이 가장 높아서 재분화된 형질전환체를 얻을 수 있었다. 한편 GUS 유전자는 Shiva 유전자의 3' 말단에 존재하는 NOS terminator 때문에 translation까지의 발현이 어려울 것으로 예상되었으나 형질 전환하지 않은 담배에서보다 10배 이상의 GUS활성을 나타내었다. 또한 감자 조직에 X-gluc을 사용하여 GUS($\beta$-glucuronidase)의 기질로 작용하게 하여 효소활성 자리를 염색한 결과 줄기, 잎, 뿌리 등의 도관 조직에 다량 발혈됨을 확인할 수 있었다.
N-ISDN의 대중화 및 활성화를 위해서 연구 개발한 회선 및 패킷 통신 기능을 지원하는 N-ISDN 접속용 PC 카드로서, NT(Network Terminator)및 TA(Terminal Adapter) 기능을 하며, PC에서 다중 통신이 가능하도록 한다. 음성 통화중 다양한 ISDN 서비스를 이용 가능하도록 하며, 64kbps로 인터넷 접속을 할 수 있다. 또한 전용선 없이 ISDN을 통해 64kbps로 패킷망에 접속하여 데이터 통신이 가능하도록 하는 등 협대역 ISDN 통신 기능을 지원한다.
We have developed a plasmid vector, pKCH1, for the purpose of higher plant transformation. It contains the promoter region of cauliflower mosaic virus 35S transcript (P35s) and the terminator region of nopaline synthase gene (Tnos) with unique cloning sites, Bam HI and Xba I, between them. After inserting a foreing gene at the cloning sites, P35s-foreign gene-Tnos cassette can be recovered by using a restriction enzyme Hind III.
A solution which combines ray and aperture integration(AI) techniques is presented for the problem of electromagnetic plane wave scattering by an open-ended, perfectly-conducting, semi-infinite parallel plate waveguide with a thin, uniform layer of lossy or absorbing material on its inner walls, and with a simple planar termination inside. Numerical results are given for the fields outside the waveguide.
Cai Chun Mei;Van Kyujung;Kim Moon Young;Lee Suk-Ha
한국작물학회지
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제50권5호
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pp.361-367
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2005
Single nucleotide polymorphisms (SNPs) are valuable DNA markers due to their abundance and potential for use in automated high-throughput genotyping. Numerous SNP genotyping assays have been developed. In this report, one of effective and high throughput SNP genotyping assays, which was named the template-directed dye-terminator incorporation with fluorescence polarization detection (FP-TDI) was described. Although the most of this assay succeed, the objective of this work was to determine the reasons for the failures, find ways to improve the assay and reduce the running cost. Ninety $F_2$-derived soybean, Glycine max (L.) Merr., RILs from a cross between 'Pureunkong' and 'Jinpumkong 2' were genotyped at four SNPs. FP measurement was done on $Victot^3$ microplate reader (perkinelmer Inc., Boston, MA, USA). Increasing the number of thermal cycles in the single-base extension step increased the separation of the FP values between the products corresponding to different genotypes. But in some assays, excess of heterozygous genotypes was observed with increase of PCR cycles. We discovered that the excess heterozygous was due to misincorporation of one of the dyeterminators during the primer extension reaction. After pyrophosphatase incubation and thermal cycle control, misincoporation can be effectively prevented. Using long amplicons instead of short amplicons for SNP genotyping and decreasing the amount of dye terminator and Acyclopol Taq polymerase to 1/2 or 1/3 decreased the cost of the assay. With these minor adjustments, the FP-TDI assay can be used more accurately and cost-effectively.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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