Thalictrum rugosum 세포배양에서 여러 가지 식물생장 조절물질이 세포증식 및 berberine 생산에 미치는 영향을 조사하였다. 조사된 식물생장 조절물질들 중에서 indole-3-acetic acid(IAA)가 berberine 생산에 가장 적합함을 알 수 있었고 그 최적농도는 1$\mu \textrm m$ 이었다. 비교 기준인 2,4-D의 사용결과에 비할 때 60이상의 생산량 상승효과가 있었으며, cytokinin인 6-benzylaminopurine(BA)를 동시에 사용하는 것보다 IAA만을 단독으로 사용하는 것이 더 효과적이다.
In the suspension cultures of Eschscholtzia californica, phytohormone effects showed that alkaloid production was increased by IAA treatment without kinetin in both volumetric and specific way. Kinetin, however, suppressed alkaloid accumulation. Addition of ethephon inhibited cell growth. However, it enhanced the alkaloid production significantly in both volumetric and specific way. IAA promoted alkaloid production during elicitation. The highest alkaloid accumulation was observed at 5 $\mu$ M of IAA. Ethephon also enhanced alkaloid production during elicitation. The highest alkaloid formation was observed at 460 mg/l of ethephon with elicitation. Elicitation with ethephon, however, altered cell growth and the pattern of benzophenanthridine alkaloids production.
본 연구에서는 형질전환된 N. tabacum 배양에 있어서 배양 중반 저온으로의 변환이 세포에 미치는 영향과 hGM-CSF의 생산성 변화를 관찰하였다. 배양 중반 저온으로의 변환은 DCW의 증가와 세포크기의 감소를 보였다. Ascorbic acid의 첨가는 배양초기 세포 생존율의 감소를 완화시켰으며, 배양 중반 저온으로의 변환은 약간의 세포생존율 감소를 보였다. 저온으로의 변환, 저온 배양에서의 betaine 첨가, ascorbic acid 첨가 모두 배양 후반 세포 lysis 억제에 효과가 있었다. 배양 중반 저온으로의 변환시 배지내 단백질 분해 효소의 활성을 측정한 결과, 대조구 세포에 비해 낮은 단백질 분해 효소 활성을 나타내었다. 그로인해 배양 중반 이후 단백질 분해 효소에 의한 급격한 hGM-CSF 분해를 감소시킴으로써 상대적으로 대조구 세포에 비해 높은 hGM-CSF 생산성을 유지시켰다. Ascorbic acid를 첨가한 후 배양 도중 betaine(1 mM)을 첨가하여 저온으로 온도를 변환시, hGM-CSF의 생산성 대조구 세포에 비하여 최대 2.1배 까지 높게 유지시켰다.
베트남 인삼 세포를 이용하여 독성 식물호르몬인 2,4-D를 제거하는 연구를 수행하였다. 2,4-D를 함유하는 정상 MS 배지에서 배양된 세포를 세척한 후, 2,4-D가 없는 무호르몬 배지에서 배양한 결과 세포의 성장성은 유지되었지만 2,4-D는 완전히 제거되었다. 잔류 2,4-D는 세포 내 외부에 존재하면서 배양과 함께 세포에 의하여 소비되었는데, 배양 초기에 급격하게 소비됨을 알 수 있었다. 또한 배양 중 배지의 2,4-D 보다 세포 내 2,4-D가 먼저 소비됨을 알 수 있었다.
Diterpenoid 생합성의 중요한 전구체인 geranylg geranyl pyrophosphate의 공급을 위해 외부에서 geraniol을 넣어 주었을 때 taxol을 포함한 일부 taxane의 생산이 증대 됨을 알 수 있었다. 또한 투여 시기와 투여량에 따라 결과가 크게 변화하였다. Camphor와 menthol은 taxol과 같은 terpenoid 계열의 물질이지만 외부에서 공급하였을 때에는 taxol 생산을 증대시키는 효과는 없었다. 외부에서 인위적으로 taxol과 cephalomannine, baccatin ill 를 공급했을 때 모든 경우에서 taxal 생산은 자극받지 않았으며 taxal을 공급했을 경우에는 bacca tin ill 의 생산이, cephalamannine을 공급했을 경우에는 7 -epl- 1 Q-deacetyltaxol의 생산이, 그리고 baccatin ill을 공급했을 경우에는 10-deacetyltaxol의 생산이 각각 가장 많이 중대하였다.
Taxus wallichiana Zucc. 현탁세포배양에서 항암제 paclitaxel 생합성 연구를 수행하였다. 현탁세포배양에서 exponential phase의 최고 생장 속도는 0.14 $day^{-1}$이었으며 배가시간이 4.96 day이었다. Paclitaxel은 배양초기에 생성되지 않고 exponential phase 말기부터 서서히 생성되어 stationary phase에서도 이어지며 declined phase에서 최고치를 나타내었다. Paclitaxel의 생산을 촉진하기 위하여 elicitor를 사용하였다. 여러 elicitor 중 jasmonic acid와 cellulase가 paclitaxel의 생성을 증가시켰다. Elicitor는 접종과 동시에 투여했을 때 가장 효과가 좋았으며, jasmonic acid와 cellulase의 combination으로 효과가 더욱 증진했는데 각각 투여할 때보다 1.8배 및 3.1배 paclitaxel 생성이 증가되었다.
Jo, Seung-Hyun;Kwon, Suk-Yoon;Park, Doo-Sang;Yang, Kyoung-Sil;Kim, Jae-Whune;Lee, Ki-Teak;Kwak, Sang-Soo;Lee, Haeng-Soon
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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제11권5호
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pp.442-448
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2006
Human lactoferrin (hLf) is an iron-binding glycoprotein that has been considered to play many biological roles in the human, including the stimulation of the immune system, antimicrobial and anti-inflammatory effects, and regulation of iron absorption. We generated transgenic Siberian ginseng (Acanthopanax senticosus) cell cultures producing a functional hLf protein using the signal peptide sequence from the endoplasmic reticulum and driven by an oxidative stress-inducible SWPA2 promoter which is highly expressed in plant cell cultures. The production of hLf increased proportionally to cell growth and showed a maximal level (up to 3.6% of total soluble protein) at the stationary phase in suspension cultures. Full-length hLf protein was identified by immunoblot analysis in transgenic cell cultures of Siberian ginseng. Recombinant hLf (rhLf) was purified from suspension cells of Siberian ginseng by ammonium sulfate precipitation, cation-exchange and gel filtration chromatography. N-terminal sequences of rhLf were identical to native hLf (nhLf). The overall monosaccharide composition of rhLf showed the presence of plant specific xylose while sialic acid is absent. Antibacterial activity of purified rhLf was higher than that of nhLf. Taken together, we anticipate that medicinal Siberian ginseng cultured cells, as demonstrated by this study, will be a biotechnologically useful source for commercial production of functional hLf not requiring further purification.
Oh, Myung-Jin;Na, Hye-Ryun;Choi, Hong-Keun;Liu, Jang Ryol;Kim, Suk-Weon
Plant Biotechnology Reports
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제4권2호
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pp.125-128
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2010
Culture conditions were established for high frequency plant regeneration via somatic embryogenesis from cell suspension cultures of Nymphoides coreana. Zygotic embryos formed pale-yellow globular structures and calluses at a frequency of 85.6% when cultured on half-strength Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 0.3 $mg\;l^{-1}$ of 2,4-D. However, the frequency of pale-yellow globular structures and white callus formation decreased slightly with an increasing concentration of 2,4-D up to 10 $mg\;l^{-1}$ with the frequency rate falling to 16.7%. Cell suspension cultures were established from zygotic embryo-derived calluses using half-strength MS medium supplemented with 0.3 $mg\;l^{-1}$ of 2,4-D. Upon plating onto half-strength MS basal medium, over 92.3% of cell aggregates gave rise to numerous somatic embryos and developed into plantlets. Regenerated plantlets were successfully transplanted into potting soil and achieved full growth to an adult plant in a growth chamber. The high frequency plant regeneration system for Nymphoides coreana established in this study will be useful for genetic manipulation and cryopreservation of this species.
본 연구에서는 고려인삼세포 현탁배양에 의한 회분배양 실험시 배양시간에 따른 세포성장 및 탄소원 소모 경향과 ginesenoside 생산성에 대한 다양한 elicitors의 영향을 조사하였다. 회분배양 실험결과 접종 후 12일 만에 stationary phase로 전환되어 배양 17일째에 DCW로 최대 세포량인 14.7g/L를 기록하였다. 단위 배양 부피와 시간을 기준으로 한 세포성장에서는 0.59 g/-DCW/L·d로 나타났다. 탄소원으로 사용된 sucrose는 배양 4일째에 glucose와 fructose로 완전히 분해되었고, 배양 중기까지 급격하게 소모된 후, 서서히 감소하여 배양 16일째에 완전히 고갈되었다. Elicitor 투여시기는 대수 증식기 이면서 ginsenoside의 생성이 급격히 증가하는 배양 8일째로 결정하였고, 이때에 jasmonic acid를 투여한 경우에서 ginsenoside 생산성이 대조구보다 1.5배 향상되는 결과를 얻었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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