• 생명과학회지
• /
• 제24권12호
• /
• pp.1301-1307
• /
• 2014

지방유래줄기세포(adipose-derived stem cell; ADSC)는 조직재생을 위한 탁월한 수단으로 인정되고 있으나 세포증식속도가 느려 ADSC의 배양용 배지에는 대게 fetal bovine serum (FBS)이 첨가된다. FBS는 세포에 다양한 영양분을 공급하지만 세포의 기능에 영향을 미칠 수 있는 미 동정 물질도 많이 함유하고 있다. FBS에 의한 예상밖의 영향과 동물유래물질의 오염을 방지하기 위해 ADSC의 무혈청 배양법에 관한 연구가 광범위하게 이루어지고 있다. 본 연구에서는 ADSC세포에 SV40의 T항원 유전자를 도입하여 증식속도를 향상시킨 ADSC-T세포주의 효율적인 무혈청 배양법을 확립하기 위해 ADSC-T의 세포증식에 미치는 아미노산복합체, 비타민 복합체 및 여러가지 영양분 혼합물(B27)의 영향을 검토하였다. 그 결과, ADSC-T세포를 DMEM/F12 무혈청 배지에 현탁하여 plate에 주입하였을 때는 증식하지 않았으며 아미노산, 비타민 및 B27 영양소복합체는 증식촉진효과를 나타내지 않았다. 그러나 ADSC-T세포를 유혈청 DMEM배지로 24시간 배양 후 DMEM/F12 무혈청 배지로 교체하여 배양했을 때는 세포가 증식하였으며 이때, 비타민 복합체와 B27 영양소복합체는 증식촉진효과를 나타내었다. 또한 Stem pro 배지를 이용하면 ADSC-T의 무혈청 부유배양이 가능한 것으로 나타났다. ADSC-T세포는 분자량 70 kDa 부근의 단백질을 다량으로 분비하였으며, 성장인자 중에서 insulin-like growth factor (IGF)와 fibroblast growth factor basic (FGF basic)는 유혈청 배양보다 무혈청 배양에서 더 많이 분비되었다.

• 한국발생생물학회:학술대회논문집
• /
• 한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
• /
• pp.60-60
• /
• 2003

Embryonic stem (ES) cells have property of self-renewal and can differentiate into the cells of all three primary germ layers. Recently, many growth factors, alteration of culture condition and gene modifications have been used to differentiate mouse and human ES cells into specific cell types. This study was performed to evaluate the differentiation protocol for human ES cells to the endodermal lineage cells. Human ES cells (Miz-hESl ) were cultured on STO feeder layer mitotically inactivated with mitemycin C, and embryoid bodies (EBs) were formed by suspension culture. Differentiation protocol of EBs consisted of three steps: stage I, culture of EBs for 6 days with ITSFn medium; stage II, culture of stage I cells for 8 days with N2 medium ; stage III, culture of stage II cells for 22 days with N2 medium. mRNA levels of the endodermal lineage differentiation genes were analyzed by semi- quantitative RT-PCR. The Oct-4 expression, a marker of the pluripotent state, was detected in undifferentiated human ES cells but progressively decreased after EBs formation. Differentiating human ES cells expressed marker genes of endodermal differentiation and pancreatic islet cells. GATA4, a-fetoprotein, Glut-2, and Ngn3 were expressed in all stages. However, albumin and insulin were expressed in only stage III cells. The human ES cells can be differentiated into endodermal lineage cells by multiple step culture system using various supplements. We are developing the more effective protocols for guided differentiation of human ES cells.

• 한국작물학회지
• /
• 제51권spc1호
• /
• pp.237-241
• /
• 2006

국내육성 유채품종 간 반수체식물 생산성을 비교하였다. 화아로부터 분리된 소포자를 13%의 sucrose, $0.05mg/{\ell}$ BA 와 $0.5mg/{\ell}$ 의 NAA가 첨가된 NLN 배지에서 배양하였다. 반수체 배의 생산에는 유전형이 중요한 요인이였으며, 탐라유채가 가장 높은 반수체 배 생산능을 보여 화아당 176개의 반수체 배가 발생하였으나, 한라유채와 영산유채는 배 생산은 물론 세포분열도 관찰되지 않았다. 발생한 반수체 배를 NLN배지에서 현탁배양하여 Multilobe abnormal embryos를 형성시켰으며, 계속하여 생장조절제가 첨가되지 않은 MS고체 배지에 치상 배양하여 반수체식물체를 유도 하였다. 재생된 반수체 식물체는 성공적으로 순화되었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제10권4호
• /
• pp.514-517
• /
• 2000

Abstracts Six shikonin metabolites were obtained from human intestinal bacteria, Bacteriodes fragilis subsp. thetaotus. following biotransformation. The transformation of shikonin (1) was performed anaerobically for 3 day at $37^{\circ}C$ in thc bacterial suspension of B. Fagilis which was cultured overnight in GAM broth. The incubation mixture \vas extracted with EtGAc Lo give a dark-brown residue. The residue was apphed to a silica gel column, which was eluted successively with hexane (Fr. A), $CHCl_3$ (Fr. B), and $CHCl_3$:MeOH (9:I) (Fr. C). Six metabolites. Fr.A (2 and 3), Fr. B (6 and 7), and Fr. C (4 and 5) were isolated by repeated silica gel column chromatography, preparatlVe TLC, followed by Sephadex LH-20. In vitro cytotoxicities were tested against human tumor cell lines; PC-3 (prostate), ACHN (renal), A549 (lung), SW620 (colon), KS62 (leukemia), and Du145 (prostate). The shikonin metabolites 2. 4, 5, and 6 showed weaker cytotoxicity than the parenL shikonin (1). whereas shikonin monomenc metabolite 3 ($ED_{50}{\;}O.44-{\;}1.22{\;}\mu\textrm{g}/ml$) and dimeric metabolite 7 ($ED_{50}{\;}O.48-{\;}2.35{\;}\mu\textrm{g}/ml$) exhibited stronger activities compared with adriamycin, which was used as the positive control.ontrol.

• 대한수의학회지
• /
• 제40권2호
• /
• pp.311-323
• /
• 2000

Immunosuppressive effects of reticuloendotheliosis virus (REV) infection in chickens were investigated. Primary antibody responses to Newcastle disease virus (strain B1) and sheep red blood cells were significantly low in chickens inoculated with the local isolate 89-74 of REV compared to those of uninfected chickens. In chickens infected with REV strain T or 89-74, blastogenesis of spleen cells and peripheral blood lymphocytes (PBL) to concanavalin A (Con A) was severely suppressed. When specific pathogen free (SPF) chickens were inoculated with the isolate, the suppressive effect was observed up to 7 weeks of age while, in the contact infected chickens, the suppression was absent. Similar suppressive effects were observed in chickens inoculated with REV strain T at 2, 3 and 4 weeks of age. When spleen cells or PBL from uninfected chickens were co-cultured with spleen cells or PBL from chickens infected with REV at 1 day-old or 2 week-old, the blastogenesis of the normal cells was suppressed. The suppressive effect of PBL from REV-infected chickens on normal lymphocytes was abrogated by the treatment with trypsin. However the suppressive activity of the REV-infected PBL was not influenced at removing machrophage from the cell suspension by incubation in plastic petri dishes. In addition to the immunosuppression, chickens infected with the REV isolate showed abnormal feather development (nakanuke), anemia, paralysis and retarded growth. Three out of 11 chickens inoculated with the isolate at day-old died between 6 and 9 weeks of age by bacterial infections.

• 한국자원식물학회지
• /
• 제24권4호
• /
• pp.461-471
• /
• 2011

본 연구에서는 조직배양을 통해 은행나무 잎으로부터 캘러스를 유도하였고, 최대 생장량과 항산화능이 우수한 배양조건을 확립하였다. 즉, 은행잎을 이용하여 조직배양한 결과 암과 광조건에서 모두 NAA 첨가 조건이 2,4-D 첨가 조건에 비교하여 양호한 캘러스 생장을 나타냈다. 가장 우수한 캘러스 생장을 나타낸 배양조건은 광조건의 10 ${\mu}M$ NAA와 5 ${\mu}M$ kinetin의 조합 처리시였다. 따라서 현탁배양에서 캘러스의 지속적인 유지를 위한 효과적인 생장조절제는 10 ${\mu}M$ NAA/0.5 ${\mu}M$ BA, 10 ${\mu}M$ NAA/0.5 ${\mu}M$ kinetin으로 나타났다. 또한 은행잎 유래 캘러스 추출물의 항산화능은 광조건에서 10 ${\mu}M$ NAA가 처리된 기본 MS배지에 캘러스를 현탁 배양하였을 때 가장 높게 나타났다. HPLC를 통한 flavonol glycosides를 분석한 결과 10 ${\mu}M$ NAA가 처리된 조건에서 현탁 배양된 녹색 캘러스에서 quercetin dehydrate와 keamperol이 각각 0.556, 0.157 ${\mu}g$/20 ${\mu}l$ 검출되었다. 잎 추출물에 비해 표적물질을 제외한 불순물이 적어 표적물질의 순수생산이 가능할 것으로 기대되며, 특히 keamperol의 경우 기존의 연구보고에 비해 약 7배 높은 함량이 검출되었다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제38권5호
• /
• pp.435-439
• /
• 1995

바이러스 살충제의 개발을 위한 기초 자료로서 Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus(HcNPV)의 일부 특성과 병원성을 조사하였다. HcNPV는 Spodoptera frugiperda (Sf)세포의 핵에서 복제 되었으며, 바이러스를 감염 시켰을 경우 감염 24시간 후에 prepolyhedra 형성이 관찰 되었고, 감염 48시간 후에는 성숙된 많은 polyhedra가 전체세포에서 관찰 되었으며, 감염 72시간 후에는 polyhedra가 세포밖으로 방출 되었다. 또한 세포는 부유 배양에서 잘 성장 하였으며, 바이러스에 감염되기 전의 세포 배양액은 pH가 6.35이었으나 이주 점차 증가하여 감염 120시간 후에는 pH가 6.77이었다. Polyhedra inclusion body(PIB)를 설탕 밀도구배 원심 분리한 결과 $50{\sim}55%$ 부근에서 벤드가 형성 되었고, polyhedra는 도립 현미경과 전자 현미경하에서 관찰한 결과 대부분 4변형의 6면체(tetragonal hexahedron) 이었고, PIB의 크기는 평균 $2.5{\mu}m$이었다. 또한 감염 48시간 후에 polyhedra 속에는 다발을 형성한 비리온이 봉입 되어 있었다. 흰불나방 유충에대한 병원성 시험에서는 4령에서 보다는 2령과 3령의 유충에서 치사율이 높았고, $1.5{\times}10^{9}{\sim}l.5{\times}10^{7}PIB/ml$로 섭식시킨 구룹에서는 2령과 3령 유충에서 90% 이상의 치사율을 나타 내었다.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제27권3호
• /
• pp.177-186
• /
• 1989

병원성이 강한 Naegleria fowleri ITMAP 359, 병원성이 약한 Naegleria jadini 0400, 비병원성인 Naegleria gruberi EGB를 ICR마우스에 각각 감염시켰을 때 세포매개 성 면역반응의 차이를 관찰하고 이들 아메바를 감염시킨 후 경과된 감염 시간에 따른 세포매개 성 면역반응과 혈청내 항체가의 변동을 관찰하였다. N. fowleri를 감염시킨 마우스의 사망률은 75.7%, N. jadini를 감염시킨 실험군에서는 6.2%, N. gruberi 감염에 의한 마우스의 사망은 전혀 관찰되지 않았다. 지연형 과민반응은 N. fowleri, 감염시에 감염 초부터 대조군에 비해 반응이 증가하였으나 7일 후에는 감소하였다. N. jadini 감염 시에도 감염 후 1일째부터 과민반응이 증가하였으며 감염기간이 지나갈수록 점차 감소하였다. 또 N. gruberi 감염시에는 대조군과 비교할 때 변화를 나타내지 않았다. 7림프구의 아세포화 정도는 N. fowleri 감염시 감염 10일 후 증가하였으나 대조군에 비해 유의한 차이는 없었다. N. jadini에 감염된 경우는 대조군과 차이가 없음을 알 수 있었고, N. gruberi 감염시에는 감염 후 감소하는 경향이 있었다. B림프구의 아세포화 정도는 N. fowleri 감염군, N. gadini 감염군 및 N. gruberi 감염군에서 대조군과 차이가 없었다. N. fowleri에 감염된 마우스의 혈청내 항체가는 감염 7일 후부터 증가하였고, N. jadini 감염시에는 14일 후 증가하였으며, N, gruberi게 감염된 마우스의 항체가는 대조군과 차이가 없었다.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제32권1호
• /
• pp.63-71
• /
• 2005

강낭콩 현탁 배양세포로부터 얻어진 효소원을 이용한 효소 변환 실험을 통하여 동 세포내에 cholesterol$\to$cholestanol과 6-deoxo-28-norteasterone$\leftrightarrow$ 6-deoxo-28-nor-3-dehydroteasterone $\leftrightarrow$ 6-deoxo-28-nortyphasterol$\to$6-deoxo-28-norcastasterone$\to$28-norcastasterone의 생합성과정이 존재함을 확인하였다. 이 결과는 비록 cholestanol에서 6-deoxo-28-norcathasterone을 경유하여 6-deoxo-28-norteasterone로의 변환은 확인하지 못하였지만 동 세포에는 cholesterol에서부터 6-deoxo-28-nor형 brassinosteroids를 경유하여 28-norcastasterone을 생합성하는 모든 효소들이 포함되어 있음을 시사하는 것으로서, 동 세포에는 상기의 생합성과정, 즉 $C_{27}$ brassinosteroids의 the late C-6 oxidation 과정이 작용하고 있음을 나타내는 결과라 하겠다. 또한 얻어진 효소원은 5-adenosyl-methionine과 NADPH의 존재 하에 28-norcastasterone을 castasterone으로 변환시켜, 강낭콩세포내의 $C_{28}$ 활성형 brassinosteroid인 castasterone의 생합성에 $C_{27}$ brassinosteroids 생합성과정이 중요한 경로중 하나임을 알 수 있었다. 이러한 결과들은 이미 본 연구실에서 밝힌 토마토에 있어 $C_{27}$ brassinosteroids 생합성과정이 토마토의 활성형 brassinosteroid인 castasterone의 함량조절에 관여한다는 결과와 함께 토마토 이외의 식물들에 있어서도 $C_{27}$ brassinosteroids 생합성에 의한 활성형 $C_{28}$ brassino-steroid(s)의 함량조절에 일어나고 있음을 처음으로 밝힌 중요한 결과라 하겠다.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
• /
• 한국동물번식학회 2001년도 춘계학술발표대회
• /
• pp.22-22
• /
• 2001

To produce reconstituted rabbit embryos with fetal fibroblasts, the present study was evaluated the efficiencies of the different fusion and activation conditions as assessments of subsequent development and chromosome in the embryos. New Zealand White rabbits were used throughout the study. Fetal fibroblasts collected from 22-d of fetuses were cultured in DMEM ＋ 10% FBS in 5% $CO_2$ in air. The culture was maintained for 10 passages. In every passage half of cell suspension were kept In frozen. From rabbits treated with FSH in 30% PVP solution and hCG, oocytes were surgically collected from oviducts at 14 h post-hCG injection and stripped off their cumulus cells by re-pipetting in a 300 IU hyaluronidase solution. Oocytes with an extruded first polar body and dense cytoplasm were enucleated by micromanipulation in Ham's F-10 medium＋7.5 g/$m\ell$ cytochalasin B. Euncleation was confirmed under a fluorescence microscope after staining with 5 g/$m\ell$ bisbenzimide for 2 min. Each enucleated oocyte was injected with a fetal fibroblast into a perivitelline space. Reconstructed eggs were compared fusion rates either at 2.0 ㎸/cm or 1.6 ㎸/cm(60 sec, double pulses). After fusion, all eggs were activated with the combination of 5 M ionomycin (5 min) and 10 g/$m\ell$ cycloheximide (CHX, 3h), and cultured in CRlaa medium and transferred into TCM199＋10% FBS on day 3. Although there was not significantly differ in fusion rate between treatments (60%, 2.0 ㎸/cm vs. 79.4%, 1.6 ㎸/cm), none of them in the eggs fused with 2.0 ㎸/cm developed to blastocyst. In comparison of development and chromosome status between different activation treatments (Group 1; 5 M ionomycin/10 g/$m\ell$ CHX, Group 2; 5 M ionomycin/5 g/$m\ell$ CHX ＋ 2 mM DMAP after fusion with 1.6 ㎸/cm), there were not differ in cleavage and development rates (67.3% and 28.9% in Group 1; 67% and 33% in Group 2). All out of 8 embryos evaluated in Group 1 appeared a normal diploid chromosome sets and mean number of cells (Mean SEM) on day 4.5 of culture was 141.5 23.15 (n=8). It can be concluded that the use of cycloheximide has not happened in chromosome abnormalities, and fetal fibroblasts can be used for cloning in rabbit.