Hydroperoxyl radical/superoxide anion radical ($HO_2{\cdot}/O_2^-{\cdot}$, $pK_a$=4.8) as an intermediate is of considerable importance in oxidation processes. Hence, the method of detecting $HO_2{\cdot}/O_2^-{\cdot}$ with high sensitivity is necessary to be developed. To achieve this objective, this study newly employed terephthalate (TA) as a probe for the measurement of $HO_2{\cdot}/O_2^-{\cdot}$ in the kinetic method presented in our previous study. This method was based on the hydroxylation of TA to produce mainly hydroxyterephthalic acid or hydroxyterephthalate (OHTA), which was analyzed by fluorescence detection (${\lambda}_{ex}$=315nm, ${\lambda}_{ex}$=425nm). The life-time of $HO_2{\cdot}/O_2^-{\cdot}$ and its concentration formed from the photolysis technique of $H_2O_2$ were reported in this study. At range of pH 2-10, the life-time of $HO_2{\cdot}/O_2^-{\cdot}$ was 51-422 sec. In particular, an increase in the life-time with pH was observed. The sensitivities of the kinetic method by using TA were always higher with 1.7-2.5 times at pH 8.0 than those by using benzoic acid. From these results, this study can contribute to understanding the basic functions of $HO_2{\cdot}/O_2^-{\cdot}$ in oxidation processes.
An antioxidant was isolated from Korean mistletoe (Viscum album var. coloratum) by consecutive purification using silica gel, Sephadex LH-20, and RP-HPLC. The active principle was identified as homo-flavoyadorinin-B (3',7-dimethoxyluteolin-4'-O-[apiosyl $(1{\rightarrow}2)$ glucoside]) by spectral analyses. It inhibited 74.6% of hydroxyl radical and 30.6% of superoxide anion radical at 0.01 mM; however, th~compound did not show any scavenging activity against hydrogen peroxide radical. At 0.1 mM, above compound scavenged superoxide anion radical about twice as effective as positive controls, BHT and ${\alpha}-tocopherol$. Radical scavenging activities of homo-flavoyadorinin-B on DPPH, hydroxyl, and hydrogen peroxide radicals were almost same with those of positive controls.
Lee, Min Hee;Cho, Eun Ju;Kim, Ji Hong;Kim, Ji Eun;Chung, Byung Yeoup;Cho, Jae-Young;Lee, Kang-Soo;Kim, Jin-Hong
Journal of Radiation Industry
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v.5
no.3
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pp.221-225
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2011
To detect superoxide anion ($O_2{\cdot}^-$) or singlet oxygen ($^1O_2$) in biological systems during gamma irradiation, specific chemical probes, 4,5-dihydroxy-1,3-benzene disulfonic acid (Tiron) or 2,2,6,6-tetramethyl-piperidine (TEMP), were evaluated. Tiron or TEMP spin adducts was structurally stable in aqueous solution during gamma irradiation up to 500 or 1,000 Gy, respectively. The signal of Tiron semiquinone radical, a spin adduct of Tiron upon reaction with $O_2{\cdot}^-$, was slightly increased by gamma irradiation. This trend was dose-dependently manifested in $O_2$-saturated aqueous solution using nitro blue tetrazolium (NBT), a common probe for both hydrated electron ($e{^-}_{aq}$) and $O_2{\cdot}^-$. In contrast, a spin adduct of TEMP, was never inducible by gamma irradiation, while its signal was substantially enhanced by photosensitization of riboflavin. These results suggest that Tiron and NBT or TEMP could be utilized to detect $O_2{\cdot}^-$ or $^1O_2$ in biological systems during gamma irradiation, although $O_2{\cdot}^-$ or $^1O_2$ are not the main reactive oxygen species produced by water radiolysis.
In this study, we investigated the free radical [1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH), hydroxyl radical (${\cdot}OH$) and superoxide anion (${O_2}^-$)] scavenging activity of MeOH extract and 3 fractions of Citrus junos. Of the tested fractions, the BuOH fraction showed the strongest DPPH scavenging activity, showing the $IC_{50}$ values of 63.4 mg/mL. Therefore, we continuously carried out DPPH, ${\cdot}OH$ and ${O_2}^-$ scavenging activity tests of BuOH fraction of Citrus junos. The BuOH fraction of Citrus junos inhibited DPPH radical to 97.5% at a concentration of 1000 mg/mL and the scavenging activities were increased concentration-dependently. In addition, BuOH fraction from Citrus junos also scavenged ${\cdot}OH$ in a concentration dependent manner from 5 to 1000 mg/mL. Furthermore, BuOH fraction showed about 56% ${O_2}^-$-scavengimg activity at 25 mg/mL concentration but, the scavenging activities were not enhanced in a dose dependent manner. The present results suggest that BuOH fraction of Citrus junos would have the protective potential from oxidative stress induced by free radicals.
KANG Jin-Hoon;BYUN Han-Seok;LEE Yong-Woo;KIM Seon-Bong;PARK Young-Ho
Korean Journal of Fisheries and Aquatic Sciences
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v.20
no.3
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pp.213-218
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1987
The DNA damage mechanism by fish oil peroxidation was investigated through the model system of a DNA-mackerel lipid at $37^{\circ}C$. Mackerel lipid peroxidation products induced a great DNA damage with the increment of its concentration, and such DNA damage in all systems examined occurred below $100millieq{\cdot}/kg$ in POV (peroxide value) Singlet oxygen $(^1O_2)$ and superoxide anion${\cdot}O_2^-$ greatly participated in the DNA damage during peroxidation of mackerel lipid, while hydrogen peroxide$(H_2O_2)$ and hydroxyl radical $({\cdot}OH)$ did little show the DNA damage. From the results of the addition of several active oxygen scavengers to the DNA-lipid systems, singlet oxygen ana superoxide anion greatly affected to the increase of POV ana to the DNA damage by mackerel lipid peroxidation, respectively. It indicates that there was a close relationship between the effects of active oxygens in the mackerel lipid peroxidation and its DNA damage mechanism.
Bupleury radix has been used for the treatment of fever, liver disease, inflammation in traditional medicine. The present study was carried out to evaluate the antioxidant effects of Bupleury radix aqua-acupuncture solution (BRAS) in vitro. Oxygen derived free radicals produced in the course of normal aerobic life, such as superoxide anion radical($O_2^-$ ), hydroxyl radicaI( OH), hydrogen peroxide($H_2O_2$) and singlet oxygen($^1O_2$) can attack polyunsaturated fatty acid in cell membranes, enzymes, other cell compounds, and give rise to lipid peroxidation, DNA damage, lipofuscin accumulation, structure alteration of cell membrane and cell death. In this study, antioxidant effects of BRAS on lipid peroxidation were determined according to the method of TBA. BRAS inhibited markedly peroxidation of linoleic acid during the autoxidation, and also inhibited lipid peroxidation induced by hydroxyl radical derived from $H_2O_2-Fe^{2+}$ in rat liver homogenate. And BRAS showed 30% scavenging effect on DPPH radical, also exhibited a 30% inhibitory effect on superoxide generation from xanthine-xanthine oxidase system. In addition, BRAS protected the cell death induced by tert-butyl hydroperoxide(t-BHP) and significantly increased cell viability in the normal rat liver cell(Ac2F).
The free radical scavenging activities and the protective effects of Rhus javanica extracts against oxidative damage induced by reactive oxygen species (ROS) were investigated. n-Hexane, ethyl acetate and water fractions were prepared from a methanol extract. DPPH radical, superoxide anion and hydroxyl radical scavenging activities were estimated. Intracellular ROS formation was quantified using fluorescent probes, 2', 7'-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA) for hydroxyl radical and dihydroethidium (DHE) for superoxide anion. The oxidative DNA damage was investigated by the comet assay in HepG$_2$ cells exposed either to $H_2O$$_2$ or to menadione. The highest $IC_{50}$/ values for DPPH radical scavenging activity was found in the ethyl acetate fraction with a value of 5.38 $\mu\textrm{g}$/mL. Cells pretreated with $\geq$ 1 $\mu\textrm{g}$/mL of the ethyl acetate extract had significantly increased cell viability compared to control cells, which were not pretreated with the extract. Intracellular ROS formation and DNA damage in HepG$_2$ cells, which were pretreated with the various concentrations of Rhus javanica ethyl acetate extract and then incubated either with $H_2O$$_2$ or with menadione, reduced in a dose-dependent manner. These findings suggest that Rhus javanica might have biologically active components which have strong protective effects against ROS induced oxidative damages to the biomolecules, such as cell membranes and DNA.
8-Acyl-2-hydroxyphenzaine -5, 10-dioxides and 8-acyl-2-aminophenazine-5, 10-dioxides bearing n-butanoyl, n-hexanoyl and n-octanoyl groups were synthesized. It was attempted to observe the effect of phenazine dioxide derivatives on the hepatic xanthine oxidase activity in this study. As the activity of xanthine oxidase, the key enzyme in the generation of superoxide anion radical ($O_2$), was measured in the presence of phenazine dioxide derivatives, the action of 8-acyl-2-hydroxyphenazine-5,10-dioxide derivatives inhibited with increase of numbers of carbon atom bearing 8-acyl group. Moreover, when plotted on double reciprocal form, the Vmax value decrease as increase of numbers of carbon atom bearing acyl groups without affecting the Km value. However, the hepatic xanthine oxidase activity was not changed by 8-acyl-2-aminophenazine-5,10-dioxide derivatives.
Objectives : This study was to investigate the inhibitory effects of Ulmus davidiana on the generation of peroxynitrite $(ONOO^{-})$, nitric oxide (NO) and superoxide anion radicals $(O_{2}^{-})$ in the endothelial cells of rat vessels. The effects of Ulmus davidiana on the expression of inflammation-related proteins, $NF-{\kappa}B$ (p50, p65), COX-2, and iNOS, were examined by western blotting. Methods : For this study, fluorescent probes, namely dihydrorhodamine 123 (DHR 123), 4,5-diaminofluorescein (DAF-2) and 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFDA) were used. Western blotting was performed via using anti-$NF-{\kappa}B$ (p50, p65), anti-COX-2, and anti-iNOS, respectively. Results : Ulmus davidiana inhibited the generation of $ONOO^{-}$, NO and $(O_{2}^{-})$ in the lipopolysaccharide (LPS)-treated endothelial cells of rat vessels in vitro. Ulmus davidiana inhibited the expression of COX-2 and iNOS genes by means of decreasing the $NF-{\kappa}B$ activation. Conclusions : These results suggest Ulmus davidiana is effective on inhibiting the generation of $ONOO^{-}$, NO and $O_{2}^{-}$, and that therefore it might have a potential role as a treatment for the inflammatory process and inflammation-related diseases.
The aim of this study was to investigate in vitro antioxidant activities of defatted Camellia japonica L. seeds (DCJS). The DCJS were extracted using ethanol and then fractionated with butanol (BuOH), ethyl acetate (EtOAc), chloroform, and hexane. To evaluate antioxidant activity of extract and fractions from DCJS, we investigated free radical scavenging activities such as 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), 2,2'-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS+), hydroxyl radical (•OH), and superoxide anion (O2-) radicals. The five extract and fractions of DCJS dose-dependently increased DPPH, ABTS+ and O2- radical scavenging activities. The BuOH fraction of DCJS showed the highest free radical scavenging activities among other extract and fractions. The contents of total polyphenol and flavonoid in BuOH fraction of DCJS were 23.26 mg GAE/g and 32.39 mg QE/g, respectively. The polyphenol and flavonoids contents of BuOH fraction has highest than other extract and fractions. In addition, BuOH and EtOAc fraction of DCJS contained 102.37 and 165.05 ㎍/g of camelliaside B, respectively. Therefore, DCJS has higher antioxidant activity and may be useful as a natural antioxidant material.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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