• Food Science and Biotechnology
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• 제18권2호
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• pp.500-505
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• 2009

The fibrinolytic enzyme, subtilisin D5, was purified from the culture supernatant of the isolated Bacillus amyloliquefaciens DJ-5. The molecular weight of subtilisin D5 was estimated to be 30 kDa. Subtilisin D5 was optimally active at pH 10.0 and $45^{\circ}C$. Subtilisin D5 had high degrading activity for the A$\alpha$-chain of human fibrinogen and hydrolyzed the $B{\beta}$-chain slowly, but did not affect the $\gamma$-chain, indicating that it is an $\alpha$-fibrinogenase. Subtilisin D5 was completely inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride, indicating that it belongs to the serine protease. The specific activity (F/C, fibrinolytic/caseinolytic activity) of subtilisin D5 was 2.37 and 3.52 times higher than those of subtilisin BPN' and Carlsberg, respectively. Subtilisin D5 exhibited high specificity for Meo-Suc-Arg-Pro-Tyr-pNA (S-2586), a synthetic chromogenic substrate for chymotrypsin. The first 15 amino acid residues of the N-terminal sequence of subtilisin D5 are AQSVPYGISQIKAPA; this sequence is identical to that of subtilisin NAT and subtilisin E.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제31권4호
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• pp.319-323
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• 2004

Euphorbia lathyris의 유관세포로부터 분비되는 수용성 latex단백질을 10% SDS-polyacrylamide 전기영동으로 분리하여 특징적으로 잘 나타나고 있는 ELp65, ELp55, ELp43, ELp32 그리고 ELp23 등의 주요단백질을 확인하였다. 이들 latex 주요단백질들 중에서 ELp65는 ammonium sulfate 침전, gel permeation chromatography 그리고 ion exchange chromatography 등의 방법으로 순수 분리하였는데 ELp65의 N-terminal amino acid 서열분석에 의하면 이는 토마토의 p69a subtilisin-like pretense의 mature peptide의 앞부분과 강한 유사성을 지니고 있었으며 식물방어와 관련된 기능이 제시되었다. PCR증폭에 의하여 클로닝된 토마토의 p69a DNA를 probe로 이용하여 Southern blot hybridization을 수행한 결과 E. lathyris genome은 토마토의 subtilisin-like proteases와 유사한 정보를 지닐 수도 있는 3-5 유전자들로 구성된 gene family가 분석되었다.

• 펄프종이기술
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• 제36권5호
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• pp.53-61
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• 2004

[ $Poly(_{D}-ldactide)\;(_{D}-PLA)$ ] was synthesized to have low molecular weight for miscible blends with a high molecular $poly(_{L}-lactide)\;(_{L} -PLA)$. The blends were prepared by dissolving the two components of $_{L}-PLA\;and\;_{D}-PLA\;(w/w)$ in chloroform (l00/0, 90/10, 70/30, 50/50, 30/70, 0/100). The miscibility of these miscible blends was characterized by gel-permeation chromatography (GPC), differential scanning calorimetry (DSC), and the selective degradability by enzymes (proteinase K, subtilisin and $\alpha$-chymotrypsin). The coating efficiency of PLA blends onto paper was determined and the degrading activity cellulases by on these blends. The miscibility, coating efficiency and enzymatic degradability of these blends were decreased according to increasing of $_{D}-PLA$ blending part. Such results were attributed to the extent of coating application of PLA, with better miscibility (compatibility), coating efficiency and degradability due to a higher $_{L}-PLA$ content.

• 공업화학
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• 제16권5호
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• pp.705-711
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• 2005

프로테아제인 subtilisin A를 이용하여 유기 용매 안에서 당에스테르인 라우르산부틸에스테르를 합성하였다. 높은 수율을 얻을 수 있기 때문에 유기 용매로는 피리딘이 주로 사용되었으나 냄새가 심하여 식품과 의약품에 사용되는 당에스테르를 합성하는 데에는 적합하지 않다. 그러므로 이를 대체할 유기 용매를 선정하기 위하여 여러 유기 용매 안에서 당에스테르를 효소 합성하였으나 피리딘에 미치지 못하였다. 이에 피리딘을 근거로 하는 W/O 마이크로에멀젼을 만들어 당에스테르를 합성하였는데, Tween 60, Brij 56, 1-O-octyl-${\beta}$-D-glucopyranose과 같은 비이온 계면활성제를 사용하였을 때 수율이 우수하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제38권2호
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• pp.151-157
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• 2010

보리 맥아로부터 발견된 서로 다른 알파아밀라제 동질효소(AMY1, AMY2)는 80%에 달하는 높은 아미노산 서열의 상동성을 보이지만, 효소적 특성은 서로 매우 다르다. 따라서 본 연구에서는 staggered extension process(StEP) 기술을 이용하여 AMY1과 AMY2 유전자가 조합된 5종의 chimera 효소를 제조하고, 각각의 특성을 비교하여 총 8개 부위(I~VIII)의 영향을 확인하였다. 결과적으로, AMY-D2, D8, E12 chimera 효소의 경우, AMY1과 AMY2의 중간적 칼슘의존성을 보였으며, BASI(barley $\alpha$-amylase/subtilisin inhibitor) 단백질에 의한 저해효과는 AMY-E10 효소에서만 관찰되었다. 한편 AMY-C6의 경우, AMY1과 유사한 효소특성을 보였으며, AMY-E10은 AMY2 형태의 칼슘의존성을 나타내었다. 따라서 보리 아밀라제의 제 II, III, IV부위가 BASI와의 상호작용에 중요한 역할을 담당하며, 제 III, V, VI, VII부위는 칼슘의존성에 부분적인 영향을 미치는 것으로 판단하였다.

• BMB Reports
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• 제35권5호
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• pp.498-507
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• 2002

A gene that encodes a thermostable protease, coined thermicin, has been isolated from Thermoanaerobacter yonseiensis that is expressed and characterized in E. coli.. In order to elucidate the molecular characteristics on thermostability of the enzyme, molecular modeling and mutagenesis technology were applied. In the modeling structure, the structural core, including the active site, was well conserved; whereas, the two loop regions were unique when compared to thermitase. The mutant enzyme with the small loop deleted (D190-I196), based on modeling structural information, showed identical enzyme activity. However, when the large loop was deleted (P233-P244), a little lower $K_m$ and even a lower kcat was found. This indicates that the large loop could influence catalytic activity. However, the unfolding temperature ($T_m$), which was determined by a differential-scanning calorimetry for the mutant enzyme deleted the small loop, was $96^{\circ}C$. This is $14^{\circ}C$ lower than that for the parent thermicin. These results suggest that the small loop may play a role in maintaining the proper folding of the enzyme at high temperatures, whereas the large loop might be related to catalysis.

• 한국식품과학회지
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• 제51권3호
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• pp.272-277
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• 2019

본 연구진은 선행연구에서 MCE-DAG를 섭취한 마우스에서 혈중 총 콜레스테롤과 LDL 콜레스테롤의 감소를 보고한 바 있어, 본 연구에서 in vitro를 통해 MCE-DAG와 간의 콜레스테롤 항상성 기전의 관련성을 구명하고자 하였다. LDLR과 같은 콜레스테롤 흡수 관련 인자의 발현이 MCE-DAG에 의해 증가한 반면, LDLR을 억제하는 PCSK9의 발현은 감소하였다. 또한, 콜레스테롤 합성 관련 인자인 HMGCR의 발현이 MCE-DAG에 의해 증가하였고, 전사조절인자인 SREBP2의 발현이 증가하였다. 이러한 결과들은 콜레스테롤의 합성과 흡수가 동시에 증가하였음을 뒷받침한다. 즉, 간 내 콜레스테롤 필요량이 증가함에 따라, 간의 콜레스테롤 합성 및 흡수를 활성화시켜 콜레스테롤 항상성을 유지하는 기전이 촉진되었음을 의미한다. 하지만 간 세포 내 총 콜레스테롤 양은 MCE-DAG에서 영향을 받지 않았다. 콜레스테롤 흡수 및 합성 기전이 촉진되었음에도 세포 내 콜레스테롤 농도가 증가하지 않은 현상은 담즙산 등 콜레스테롤 분비 촉진에 의한 것일 수 있다. 이러한 추론은 추후 콜레스테롤 분비 기전을 검증할 수 있는 실험을 설계하여 검증해볼 필요성이 있다. 결론적으로 MCE-DAG는 세포 내 콜레스테롤 흡수 작용을 촉진하는 효과가 있어 추후 기능성 유지로 활용 가능할 것으로 판단된다.