국내에서 분리된 키위 궤양병 원인균인 Pseudomonas syringae pv. actinidiae 균주들에서 스트렙토마이신 저항성 균주가 확인되었다. 2008년부터 2017년 사이에 키위 궤양병이 발병한 111개 과수원에서 분리된 734개 균주의 스트렙토마이신 저항성을 조사하였다. 각 균주의 생존 여부는 100 ㎍/ml의 스트렙토마이신 배지에서 검정하였다. 734개 균주들 중에서 9개 과수원에서 분리된 총 38개 P. syringae pv. actinidiae 균주가 저항성을 나타내었다. Biovar 2에 속하는 저항성 균주들의 경우 몇 개의 특정년도에 발견된 반면, biovar 3에 속하는 저항성 균주들은 2016년 이후에만 발견되었다. 따라서, 키위 궤양병 방제용으로 스트렙토마이신 사용 시 주의해야 하며, 만일 사용하려면 사용 전에 항생제 감수성 테스트가 필요하다.
In May 2012, a safety hazard issue arose because some kiwifruit growers in New Zealand had sprayed streptomycin to prevent kiwifruit canker. Therefore, for food safety management, analytical methods to determine streptomycin residues in kiwifruits are required. We developed an analytical method to determine streptomycin residues in kiwifruit samples using liquid chromatograph tandem mass spectrometer (LC-ESI-MS/MS). Streptomycin residues in samples were extracted using 1% formic acid in methanol, centrifugation for 10 min, and subsequent supernatant filtration. Purified samples were subjected to LC-ESI-MS/MS to confirm presence of and quantify streptomycin residues. Average streptomycin recoveries (6 replicates each sample) were in the range of 94.8%-110.6% with relative standard deviations of <10%. The linearity of the concentration range of 0.01-5.0 mg/kg using a matrix-matched calibration gave R2 = 0.9995. The limit of quantification (LOQ) was 0.01 mg/kg. Results showed that our analytical method is rapid, simple, and sensitive, with easy sample preparation.
Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa)는 키위에 세균성 궤양병을 일으키는 병원균이다. Psa 균주는 유전적 및 생화학적 특징에 따라 5개의 biovar로 나누어진다. 그중 biovar 2와 3이 국내에서 발견되어 광범위한 피해를 주고 있다. Psa를 방제하는 효율적인 방법 중 한가지는 streptomycin과 같은 항생제를 사용하는 것이다. 그러나, 이 항생제에 저항성을 갖는 균주가 국내에서 분리되었고, 선행 연구에서 biovar 2 균주의 저항성이 strA-strB 유전자에 의한 것으로 밝혀졌다. 본 연구에서는 Psa biovar 3 균주에서 streptomycin 저항성의 분자적 기작을 밝히고자 하였다. 실험실에서 선발된 streptomycin 저항성 균주의 리보솜 단백질 S12를 암호화하는 유전자인 rpsL의 염기서열을 결정한 결과, 43번째 또는 88번째 코돈에서 자연발생적 점 돌연변이가 일어난 것을 확인하였다. 한편, 두 곳의 키위 과수원에서 분리된 4개의 streptomycin 저항성 biovar 3 균주에서는 민감성 균주에서 AAA인 rpsL의 코돈 43이 AGA로 단일 염기 치환이 일어났고, 이는 아미노산을 lysine에서 arginine으로 변화시키게 된다. 국내에서 발견된 biovar 3 균주 모두의 저항성 기작은 rpsL 유전자의 돌연변이에 기인하였다.
스트렙토마이신은 아미노글리코사이드계 항생제중의 하나로써 가축, 가금류의 질병 치료와 예방에 널리 사용되고 있다. 국내에서는 양봉용으로는 허가되어 있지 않지만 일부 국가에서는 유럽형 부저병과 같은 세균성 벌꿀 질병의 치료에 사용되는 것으로 알려져 있다. LC-MS/MS를 이용하여 벌꿀 중에 잔류하는 스트렙토마이신(streptomycin)을 분석하는 방법을 확립하였다. 확립된 분석법은 재현성과 정밀성을 높이고 미량까지 검출할 수 있도록 회수율을 높이기 위하여 정제 및 추출과정을 최적화 하였으며, 효과적인 분석을 위해서 액체 크로마토그래피(HPLC) 와 텐뎀 질량분석법(tandem mass spectrometry)의 조건들을 최적화하였다. 확립된 방법은 5.0~50.0 ug/kg 농도에서 5.5~14%인 정밀성(RSD)을 나타내었으며, bias로써 -10.0~8.0%의 정확도를 나타내었다. 한편, 스트렙토마이신을 벌꿀 공 시료에 10.0 ug/kg의 농도로 소량첨가한 후 얻은 회수율은 74%이었고, 정량한계(LOQ)는 0.75 ug/kg이었다. 확립된 벌꿀 중 스트렙토마이신 분석법을 이용하여 실제 벌꿀시료에 적용한 결과 몇몇 시료에서 소량의 스트렙토마이신이 검출되었다.
Streptomycin 은 아직까지 가장 동물체에 안전한 항생물질로 알려져 왔으나, BROWNLEE와 BUSHBY (1948)에 의하면 백혈구가 Streptomycin 처리에 의해 죽는다고 하였다. 본인등은 Streptomycin을 처리한 흰쥐의 백혈구수의 변화와 백혈구 지체의 운동능에 미치는 영향을 조사하였다. 치사를 이르키게하는 최저를 이내인 10mg, 5mg, 2mg. 1mg. 0,5mg을 각각 흰쥐에 주사한 후 일정한 시간내의 백혈구수의 변화를 보면 처리후 1시간에서부터 6시간 사이에 백혈구수가 급격히 감소하며 정상지인 12,000에서 최하 3,000수까지 내려간다. 감소하는 정도는 처리량의 다소에 관계없이 대개동일하게 일어나는 것이다. 감소하는 원인을 추구하고저 쥐의 미부로부터 탐혈하여 이에 Streptomycin을 직접 접촉시켜 백혈구의 운동능을 조사하였다. Streptomycin의 량에 tt례하여 백혈구의 운동속도는 저하한다. 일정량을 초과할 때는 백혈구는 단시간내에 죽는다. 처리량의 다소를 불문하고 일정한 정도로 수의 감소가 일어나는 것과는 달리 백혈구의 운동능은 량에 따라 많은 변화를 가져온다. 이것으로 보아 백혈구수의 감소와 운동능의 저하와는 특별한 관계가 없는 것으로 보며 백혈구수 감소의 원인에 대해서는 추후 실험에서 밝혀야 할 것이다.
We have collected eight high-level streptomycin-resistant strains of Pseudomonas marginalis and P. syringae pv. actinidiae which were isolated from kiwifruit orchards in Korea and Japan, The molecular mechanisms of resistance were investigated by the PCR, susceptibility tests, and nucleotide sequence analysis. Of the eight high-level streptomycin-resistant strains, four harbored strA-strB genes, which encode streptomycin-inactivating enzymes. While the three Korean strains of R marginalis did not have plasmid and carried the resistant genes in the chromosomes, the Japanese strain of P. syringae pv. actinidiae had a plasmid containing strA-strB genes. The myomycin susceptibility test demonstrated that the high-level resistance to streptomycin of the remaining four strains is associated with mutations in the rpsL gene. Nucleotide sequence analyses revealed that they contain a single base-pair mutation in codon 43 of their rpsL gene.
감자 생산에 치명적인 흑각병을 유발하는 흑각병원균 (Erwinia carotovora subsp. atroseptica) 을 방제할 수 있는 화학적 방제제를 선발하기 위하여 7 종의 항생제와 oxolinic acid, 그리고 4 종의 구리제를 대상으로 병원균에 대한 억제효과와 저항성을 in vitro에서 조사하였다. Streptomycin, streptomycin sulfate, oxolinic acid는 0.02 mM 처리 24 시간 후, 그리고 구리제인 copper hydroxide, copper oxide, copper sulfate 는 3 mM 처리 24 시간 후 완전히 억제되었다. 약제들에 대한 병원균의 저항성을 조사하고자 최소 억제농도의 1.3 배를 처리하고 72 시간 후에 생존율을 조사한 결과, 항생제 및 oxolinic acid 처리구에서는 저항성균이 관찰되었으나, 구리제 처리구에서는 관찰되지 않았다. 저농도 처리로 병원균을 방제할 수 있는 2 종의 항생제 및 oxolinic acid 와 저항성균 유발 가능성이 낮은 구리제 3 종을 혼합처리였을 경우, streptomycin + copper oxide(0.016 + 1.2 mM, 9.3 + 171.6 ppm), streptomycin + copper hydroxide(0.016 + 1.5 mM, 9.3 + 146.3 ppm), streptomycin sulfate+copper oxide(0.005 + 1.2 mM, 7.0 + 171.6 ppm), streptomycin sulfate+copper hydroxide(0.005 + 1.5 mM, 7.0+146.3 ppm) 처리 24 시간 후 병원균의 생장은 완전 억제되었고, 72 시간 후 저항성균이 전혀 관찰되지 않았다. 그러나 oxolinic acid+구리제 혼합처리의 경우와 2 종의 항생제 및 oxolinic acid + copper sulfate 혼합처리의 경우 공히 균생장 억제효과가 나타나지 않았다. 본 실험의 결과는 효과적인 감자흑각병의 방제를 위하여 약제의 단일 사용보다는 혼합 사용하는 경우 더 높은 방제효과와 낮은 저항성균 유발효과가 있다는 것 을 보여주고 있다.
당근 세균잎마름병을 일으키는 Xanthomonas hortorum pv. carotae는 당근 생산량에 큰 피해를 주는 병 중 하나로 국내에서 아직 방제에 대한 연구가 미흡한 실정이다. 본 연구에서는 당근 세균잎마름병균에 효과적인 농약을 선발하기 위하여 3종의 항생제 streptomycin, oxolinic acid, kasugamycin, 2종의 구리제 copper hydroxide, copper sulfate basic 그리고 길항근권세균 Burkholderia gladioli MRL408-3, Pseudomonas fluorescens TRH415-2, Bacillus cereus KRY505-3을 선정하여 인공배지를 이용하여 이들의 직접적인 항균효과를 조사하였다. 이 중 항생제 streptomycin, oxolinic acid와 길항미생물 MRL408-3을 처리한 배지에서 억제환이 형성되었다. 당근 잎에 농약과 항균효과를 보였던 길항미생물 MRL408-3을 전처리한 후 당근 세균잎마름병균을 접종하였더니 streptomycin과 oxolinic acid을 전처리한 당근 잎에 높은 방제효과를 보였다. 이들 당근 잎 표면의 장방출주사현미경 이미지에서 streptomycin과 oxolinic acid를 전처리한 잎에서는 세균 수가 무처리한 잎과 비교하여 급격히 감소하였다. 이들 결과를 통해 streptomycin과 oxolinic acid와 같은 항생제가 다른 약제에 비해 방제 효과가 뛰어나다는 것을 알 수 있었다. 본 연구는 당근 세균잎마름병에 대한 이상적인 방제 시스템을 구축하는 데 도움이 되는 자료로서 가치가 있을 것으로 생각된다.
항생제는 일반적으로 포유동물 난자의 체외 성숙배지나 배양배지에 첨가된다. 그러나 이들 항생제들이 포유동물의 체외 난자성숙에 미치는 영향들은 아직 완전히 검토되지 않고 있다. 본 연구에서는 염소 난포란에서 체외성숙 능력과 그 후의 단위생식 활성화에 penicillin, streptomycin 또는 gentamycin이 영향을 미치는지에 대하여 조사하였다. 도축장으로부터 수집된 난소로부터 난자-난구세포 복합체들을 회수하여 5개의 처리구 [1) Control: TCM-199 medium with no antibiotics, 2) TCM-199 with 100 IU/ml penicillin, 3) TCM-199 with 50 ug/ml streptomycin, 4) TCM-199 with 50 ug/ml gentamycin, 5) TCM-199 with both 100 IU/ml penicillin and 50 ug/ml streptomycin]에서 24시간 동안 성숙시켰다. 그리고 성숙된 난자들은 ionomycin 처리에 의한 단위생식 활성화를 시킨 후 6-diethlaminopurine(6-DMAP)에서 노출시킨 다음 5개의 항생제 처리구에서 48시간 동안 배양하였다. 24시간 동안 체외성숙이 유기된 난자에서 제 1 극체가 뚜렷이 방출된 것을 관찰하여 성숙율은 얻었고, 단위생식 활성화는 48시간 후 4-cell 단계의 난분할 관찰에 의해 평가하였다. 24시간 동안 체외성숙이 유기된 미성숙 염소 난자의 성숙비율은 69.1~73.8%로 나타났으나 Streptomycin 처리구에서는 42.5~45.7%로 나타나 유의적인 차이가 인정되었다. (p<0.01) 그러나 48시간 후의 성숙난자의 난할비율에서 5개의 처리구들 사이에는 유의적인 차이가 없었다. penicillin과 gentamicin 처리 집단들은 성숙비율과 48 시간 후 4-cell 단계로의 난분할 비율에 크게 영향을 미치지는 않았다. 그러므로 streptomycin은 미성숙 염소 난자의 체외성숙을 억제하지만 성숙된 난자에서 다음 단계로의 배발달에는 영향을 주지 않는 것이 나타났다.
Amygdalin has been used for a long time as an anticancer agent. But because of its toxicity, it is difficult to administer continuously for treatment of cancer. This paper was attempted to reduce the side effect and toxicity of amygdalin. That is, effects of cysteine and streptomycin on the toxicity of amygdalin were investigated in rats orally administered amygdalin. 1. The group administered only amygdalin 400 mg/kg was effected on the lung and body weight, hematocrit, hemoglobin, clotting time, SGOT and albumin value. That is, lung and body weight, hematocrit hemoglobin and albumin value were significantly decreased. SGOT and clotting time were significantly increased compared with those of normal group. 2. Weight of lung was significantly increased in the C group (administred amygdalin 400 mg/kg and cysteine 300 mg/kg), D group (amygdalin 400 mg/kg and streptomycin 10 mg/kg), E group (amygdalin 400 mg/kg, streptomycin 10 mg/kg and cysteine 200 mg/kg)and F group (amygdalin 400 mg/kg, streptomycin 10 mg/kg and cysteine 300 mg/kg). 3. Values of hematocrit and hemoglobin were significantly increased, and clotting time was significantly decreased, in the I group and F group compared with those of A group. 4. SGOT was significantly decreased in the C group, E group and F group compared with that of A group. 5. The blood cyanide concentration was significantly decreased in the E group and F group compared with that fo A group. 6. In short, coadministration of cysteine and streptomycin are considered to reduce the toxicity of amygdalin in rats orally administered.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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