• 분석과학
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• 제27권1호
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• pp.34-40
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• 2014

SPLITT 분획법(Split-flow thin cell fractionation, SF)은 입자성 물질이나 거대분자를 크기에 따라 연속적으로 분획할 수 있는 유용한 기술이다. SF에서는 얇은 리본 모양 채널의 입구와 출구에 존재하는 흐름분할기(flow stream splitter)에 의하여 시료의 분리가 이뤄진다. 대용량 중력장 FFD-SF 시스템(New large scale splitter-less FFD-SF system)은 흐름분할기를 사용하지 않고, 전액공급 모드(FFD mode) 로 작동하도록 디자인되었다. 전액공급 모드는 용매의 공급 없이 시료만을 채널 내로 주입함으로써 시료의 희석을 방지할 수 있는 장점을 가진다. 본 연구에서는 산업용 polyurethane (PU)입자를 시료로 이용하여, FFD-SF 장치의 성능에 미치는 시료의 주입유속과 채널두께의 영향을 확인하였다. Carrier 용액으로는 시료간 응집과 박테리아 생성을 방지하기 위하여 0.1% FL-70와 0.02% sodium azide ($NaN_3$)를 함유하는 수용액을 사용하였다. 시료농도는 0.02% (wt/vol)로 고정, 주입 양은 4.2~7.2 L/hr, 채널두께는 $900{\sim}1300{\mu}m$의 범위에서 실험하였다. 분획효율(Fractionation efficiency, FE)은 optical microscopy (OM)을 사용하여 입자의 수를 확인하여 계산하였으며, 시료회수율(sample recovery)은 membrane filter를 이용하여 분획된 시료의 무게로부터 계산하였다. 채널두께가 두꺼울수록 fraction-a의 분획효율이 증가하였고, 유속이 증가할수록 fraction-b의 분획효율 증가하였다. 시료회수율은 평균 95%를 보였다. 본 연구 결과는 새로운 splitter-less FFD-SF system은 다양한 마이크론 크기의 입자의 분획에 유용한 방법임을 보여준다.

• BMB Reports
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• 제28권6호
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• pp.527-532
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• 1995

Human taurine transporter has 12 transmembrane domains and its molecular weight is 69.6 kDa. The long cytoplasmic carboxy and amino termini might function as regulatory attachment sites for other proteins. Six potential protein kinase C phosphorylation sites have been reported in human taurine transporter. In this report, we studied the effects of phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) and glucocorticoid hormone on taurine transportation in the RAW 264.7, mouse macrophage cell line. When the cells were incubated with $[^{3}H]taurine$ in the presence or absence of $Na^+$ ion for 40 min at $37^{\circ}C$, the [$[^{3}H]taurine$ uptake rate was 780-times higher in the $Na^{+}-containing$ buffer than in the $Na^{+}-deficient$ buffer, indicating that this cell line expresses taurine transporter protein on the cell surface. THP1, a human promonocyte cell line, also showed a similar property. The $[^{3}H]taurine$ uptake rate was not influenced by the inflammatory inducing cytokines such as interleukin-1, gamma-interferon or interleukin-1+gamma-interferon, but was decreased by the PMA in the RAW 264.7 cell line. This suggests that activation of protein kinase C inhibits taurine transporter activity directly or indirectly. The inhibition of $[^{3}H]taurine$ uptake by PMA was time-dependent. Maximal inhibition occurred in one hr stimulation with PMA Increasing the treatment time beyond one h reduced the $[^{3}H]taurine$ uptake inhibition due to the depletion or inactivation of protein kinase C. The cell line also showed concentration-dependent $[^{3}H]taurine$ uptake under PMA stimulation. The phorbol-ester caused 23% inhibition at the concentration of 1 ${\mu}m$ PMA. The inhibition was significant even at a concentration as low as 10 nM PMA The reduced $[^{3}H]taurine$ uptake could be recovered by treatment with glucocorticosteroid hormone. Dexamethasone led to recover of the reduced taurine uptake induced by phorbol-ester, recovering maximally after one hr. This may suggest that macrophage cells require higher taurine concentration in a stressed state, for the secretion of glucocorticoid hormone is increased by hypothalamo-pituitary-adrenocortical (HPA) axis activation in the blood stream.