Human cardiac fibroblasts (HCFs) have various voltage-dependent $K^+$ channels (VDKCs) that can induce apoptosis. Hydrogen peroxide ($H_2O_2$) modulates VDKCs and induces oxidative stress, which is the main contributor to cardiac injury and cardiac remodeling. We investigated whether $H_2O_2$ could modulate VDKCs in HCFs and induce cell injury through this process. In whole-cell mode patch-clamp recordings, application of $H_2O_2$ stimulated $Ca^{2+}-activated$$K^+$ ($K_{Ca}$) currents but not delayed rectifier $K^+$ or transient outward $K^+$ currents, all of which are VDKCs. $H_2O_2-stimulated$$K_{Ca}$ currents were blocked by iberiotoxin (IbTX, a large conductance $K_{Ca}$ blocker). The $H_2O_2-stimulating$ effect on large-conductance $K_{Ca}$ ($BK_{Ca}$) currents was also blocked by KT5823 (a protein kinase G inhibitor) and 1 H-[1, 2, 4] oxadiazolo-[4, 3-a] quinoxalin-1-one (ODQ, a soluble guanylate cyclase inhibitor). In addition, 8-bromo-cyclic guanosine 3', 5'-monophosphate (8-Br-cGMP) stimulated $BK_{Ca}$ currents. In contrast, KT5720 and H-89 (protein kinase A inhibitors) did not block the $H_2O_2-stimulating$ effect on $BK_{Ca}$ currents. Using RT-PCR and western blot analysis, three subtypes of $K_{Ca}$ channels were detected in HCFs: $BK_{Ca}$ channels, small-conductance $K_{Ca}$ ($SK_{Ca}$) channels, and intermediate-conductance $K_{Ca}$ ($IK_{Ca}$) channels. In the annexin V/propidium iodide assay, apoptotic changes in HCFs increased in response to $H_2O_2$, but IbTX decreased $H_2O_2$-induced apoptosis. These data suggest that among the VDKCs of HCFs, $H_2O_2$ only enhances $BK_{Ca}$ currents through the protein kinase G pathway but not the protein kinase A pathway, and is involved in cell injury through $BK_{Ca}$ channels.
Objective: Granulocyte-macrophage colony stimulating factors known to be secreted in murine and human reproductive tract. The development of human, bovine and murine embryos could be promoted by addition of GM-CSF in culture medium. However, the pregnancy and implantation rate of embryos cultured in GM-CSF have not been evaluated. The aim of this study was to assess the effect of GM-CSF in embryo development, pregnancy and implantation rate. Methods: A total of 191 IVF cycles were divided into control and GM-CSF supplement group (control=96, GM-CSF=95). The embryos were cultured for three day with or without 2 ng/ml of recombinant human GM-CSF. The quality of embryo, developmental velocity, pregnancy and implantation rates were compared. Results: There was no difference in age, number of gonadotropin ampules used, number of oocytes and fertilization. The number of ICSI cycle was higher in GM-CSF group. In GM-CSF group, G-1 grade embryos were the highest in proportion (56.4%), while G-2 grade embryos were highest (44.3%) in control group. The developmental velocity of embryos were not different between GM-CSF and control group. The pregnancy and implantation rates were significantly higher in GM-CSF group than control (47.4% vs. 33.3%, 17.0% vs. 11.1% respectively). Conclusion: By adding GM-CSF in culture medium, the quality of embryo, pregnancy and implantation rate could be improved.
This experiment was designed to study possible roles of $interleukin-1\beta$, interleukin-6 and tumor necrosis $factor-\alpha$ in bone remodeling by measuring their effects on $PGE_2,\; LTB_4$ and collagenase production when they were administered to human periodontal ligament fibroblasts. Human periodontal ligament fibroblasts were collected from first premolars extracted for orthodontic treatment. They were incubated in the environment of $37^{\circ}C,\;5\%\;Co^2,\;and\;100\%$ humidity. They were treated with $0.25\%$ trypsin-EDTA solution and centrifuged. PDL cells in the fifth to seventh passage were used for the experiment. Cells were seeded onto the culture dishes and when they were successfully attached, human recombinant $interleukin-1\beta$, interleukin-6, and tumor necrosis $factor-\alpha$ were administered, alone or in combination. They were incubated for 4, 8 and 24 hours and the levels of $PGE_2,\;LTB_4$ and collagenase released into the culture media were assessed by enzymeimmunoassay and collagenase activity assay. The conclusions are as follows: 1. $IL-1\beta\;and\;TNF-\alpha$ were very active in stimulating the production of $PGE_2$ and collagenase by human periodontal ligament fibroblasts, while IL-6 increased $LTB_4$ production. 2. $IL-1\beta$ significantly increased $PGE_2$, but $LTB_4$ Production was not increased. $IL-1\beta$ is thought to act mainly via the cyclooxygenase pathway of arachidonic acid metabolism. 3. IL-6 tended to inhibit $IL-1\beta$ in the production of $PGE_2$ and collagense whereas IL-6 and $TNF-\alpha$ showed auditive effect in the level of $PGE_2$. The above cytokines increased the release of at least one of $PGE_2,\;LTB_4$ and collagenase. It suggests that cytokines are involved in bone remodeling process by stimulating PDL fibroblasts to produce various bone-resorptive agents. The roles of cytokines in bone remodeling as a whole would need further study.
Objective : The purpose of this study is to investigate the mechanism and effect of moxibustion objectively and to be used as the quantitative data for developing the new thermal stimulating treatment by observing the combustion time and temperature of commercial moxaes. Methods : We have selected two types(large-size moxa A(LMA), large-size moxa B (LMB)) among large moxaes used widely in the clinic. We examined combustion times, temperatures in each period during a combustion of moxa. Results : 1. The combustion time in the preheating period was about 30sec in both moxaes on the non-contact heated surface. 2. The combustion time in the heating period was about 345sec in LMA and about 1391 sec in LMB, about 4 times longer in LMB on the non-contact surface. 3. The maximum temperature in the heating period was $44.5^{\circ}C$ in LMA and $45.4^{\circ}C$ in LMB respectively, higher by $0.9^{\circ}C$ in LMB. The average temperature in the heating period was $35.5{\sim}37.6^{\circ}C$ in LMA and $36.0{\sim}39.8^{\circ}C$ in LMB, a little higher in LMB. 4. The combustion time in the retaining period in LMA was 45.4sec and 13% of that in the heating period, and in LMB 594.7sec and 43% of that in the heating period on the non-contact surface. 5. On the point(PH) measured maximum temperature, the average temperature during the retaining period was $44.0^{\circ}C$, $42.9^{\circ}C$ respectively and the temperature at an end of the retaining period was $43.0^{\circ}C$, $40.2^{\circ}C$ respectively. 6. The time at a beginning of the cooling period was about 418 sec from ignition in LMA and 2021sec in LMB, and the temperature at that time was $36.9{\sim}39.1^{\circ}C$ on the non-contact surface. Conclusion : It was thought that not only the figure of moxicombustion device, but also the form and size of moxa had influence on the combustion characteristics deciding the performance of stimulus seriously.
Objectives : Regulatory T cells can reduce inflammation and allergic reactions through their inhibitory functions. Gardeniae Fructus(GF) is a Heat-clearing herb used in traditional Korean medicine, and a wide range of studies on its antiinflammatory effects are being carried out. The authors investigated the effect that Gardeniae Fructus has on regulatory T cells. Methods : The authors screened 14 herbs for their effects on regulatory T cells. 100mg of each herb were separately dissolved in 1ml of sterile saline and the supernatant was harvested after 10 minutes of centrifuge at 15,000 rpm. The supernatant was filtered through a 0.2 ${\mu}m$ syringe filter, and the resulting stock was refrigerated at $4^{\circ}C$. The stock was diluted before testing and used at a final concentration of $0.01{\mu}g/ml$. CD4+CD25+ T cells from healthy BALB/c spleens were used as natural regulatory T cells (nTreg), and CD4+CD25- T cells were used as reactive T cells. CD4+CD25+ and CD4+CD25- T cells were activated with anti-CD3e ($10{\mu}g/m{\ell}$)/anti-CD28 ($1{\mu}g/m{\ell}$) and cultured. IL-10 from supernatant of the culture medium was measured by IL-10 cytokine ELISA. The percentages, cell numbers, phenotype and function of CD4+CD25+ Treg cells were determined by flow cytometry. Results : Gardeniae Fructus was shown to be the most potent herb among the 14 herbs tested for suppressing CD4+CD25- reactive T cell proliferation by stimulating CD4+CD25+ natural regulatory T cells. Gardeniae Fructus induces IL-10 secretion increase by stimulating CD4+CD25+ natural regulatory T cells, and indirectly suppresses CD4+CD25- reactive T cell proliferation through increasing CD25 (IL-2 receptor $\alpha$) expression and thus promoting bonding with IL-2. Gardeniae Fructus did not directly affect CD4+CD25- reactive T cell proliferation. Conclusions : Gardeniae Fructus suppressed reactive T cell proliferation through inducing increases in IL-10 secretion and CD25 (IL-2 receptor $\alpha$) expression.
$\alpha$-MSH는 세포내 cAMP를 증폭시켜 멜라닌세포의 증식과 색소 증가에 관여한다. 본 연구에서는 $\alpha$-MSH로 자극한 B16F10 세포에서 세신추출물의 hypopigmenting 효과를 조사하고 그 억제기전에 대하여 조사하였다. 세신추출물은 $\alpha$-MSH에 의해 유도된 tyrosinase 활성과 멜라닌생성을 효과적으로 억제시켰으며, 이는 tyrosinase 발현을 조절하는 전사인자인 MITF의 발현억제와 연관성이 있었다. 즉 세신추출물은 MEK/ERK와 PI3K/Akt의 활성화를 통하여 MITF를 조절함으로서 $\alpha$-MSH에 의해 유도되는 tyrosinase, TRP-1, Dct 등 멜라닌생성관련 단백질을 억제함으로서 멜라닌생성을 저해하는 것으로 사료된다.
The objective of this study was to determine the acute effect of trimetazidine (TMZ) on the pre-fatigue, fatigue and post-fatigue contractile characteristics and tension-frequency relationships of isolated rat diaphragm muscle. Muscle strips were taken from the ventral-costal aspects of the diaphragm muscle of rats killed by decapitation. The muscle strips were suspended in organ baths containing Krebs solution, with a gas mixture of 95% $O_2$ and 5% $CO_2$ at $37^{\circ}C$ and pH 7.35-7.45. After determining the thermoregulation and optimum muscle length the muscles were subjected to direct supramaximal stimulation with 0.05 Hz frequency square pulses for periods of 0.5 msec to obtain control values. After adding $5{\times}10^{-6}{\;}and{\;}5{\times}10^{-5}$ M trimetazidine solution to the respective bath media, the contractile parameters of the muscles were recorded. The contractile parameters were also recorded for both the trimetazidine and tri-metazidine-free media after application of the high frequency fatigue protocols. Later, the tension-frequency relationship was determined by applying stimulating pulses of 10, 20, 50 and 100 Hz to the muscle strips. Whilst the twitch tension obtained from the $5{\times}10^{-6}{\;}and{\;}5{\times}10^{-5}$ M trimetazidine media showed numerical increases compared to that of the controls, these were not statistically significant (p>0.05). The contraction time exhibited a dose dependent increase (p<0.001), whilst the contraction and relaxation rates did not differ significantly. The isometric contraction forces obtained with the different stimulating frequencies showed a significant increase in the tetanic contraction only at 100 Hz (p<0.05). A comparison of the pre- and post-fatigue twitch tensions in the trimetazidine media showed the post- fatigue twitch tensions to be significantly higher than those of the pre-fatigue contraction forces (p<0.05). In the $5{\times}10^{-6}{\;}and{\;}5{\times}10^{-5}$ M trimetazidine media the increases in the post-fatigue contraction force were 22 and 30%, respectively. These results demonstrated that in isolated rat diaphragm muscle, TMZ significantly limited the mechanical performance decrease during fatigue. It is our opinion that trimetazidine contributed to the observed fatigue tolerance by eliminating the factors of fatigue, due to preservation of intracellular calcium homeostasis, provision of the ATP energy levels needed by ATPase dependent pumps and especially by keeping the intracellular pH within cer-tain limits.
To compare the stimulation effect of the ratio in follicle stimulating hormone and luteinizing hormone in induction of multiple follicular growth, the serum $E_2$ level, the diameter of follicle, number of aspirated follicles and cleavage rate of in vitro fertilized preovulatory oocytes as well as the pregnancy rate were evaluated. Forty one patients with irreparable tubal disease were stimulated by hMG(n=24) or FSH/hMG(n=17) for the purpose of in vitro fertilization and embryo transfer. The following results were obtained. 1. Serum estradiol($E_2$) levels on the day of hCG administration were $921.0{\pm}353.3\;pg/ml$ in hMG group and $1272.9{\pm}1060.6\;pg/ml$ in FSH/hMG group. The serum $E_2$ value of hMG group was significantly lower than that of FSH/hMG group. 2. The diameter of leading follicle by ultrasonogram on the day of hCG administration were $16.2{\pm}2.0\;mm$ in hMG group and $16.2{\pm}2.6\;mm$ in FSH/hMG group. No significant difference of follicle diameter between two groups was demonstrated. 3. The number of follicles with diameter above 10 mm by sonogram on the day of hCG injection were $3.91{\pm}2.32$ in hMG group and $6.52{\pm}3.86$ in FSH/hMG group. There was significant difference of number of follicles between two groups, (p< 0.01). 4. The number of oocytes found per patient at aspiration were $2.59{\pm}1.00$ in hMG group and 3. $76{\pm}2.31$ in FSH/hMG group. There was significant difference of number of aspirated oocytes between two groups. (p< 0.05). 5. The detection rate of preovulatory oocyte at aspiration were 68.4%(39/57) in hMG group (n=22) and 77.6%(38/49) in FSH/hMG group (n=13). 6. The cleavage rate of preovulatory oocyte at 44 hours after insemination were 74.4%(29/39) in hMG group(n=22) and 81.6%(31/38) in FSH/hMG group (n=13). When only hMG was used, one pregnancy was established in 15 patients to whom 29 zygotes were transferred. And a full term normal female baby was delivered by elective cesarean section. In the FSH/hMG group, five pregnancies out of 9 transferred patients were confirmed by serum ${\beta}-hCG$. Two pregnancies were spontaneously aborted before the 6th week of pregnancy. One patient aborted her baby at the 18th week of pregnancy because of incompetent internal os of the cervix. Two patients delivered two full term babies by elective cesarean section. From the above findings, paralell with the increase in the ratio of exogenous follicle stimulating hormone to luteinizing hormone, an increase in oocyte recovery was observed as well as an improvements in pregnancy rate. It was concluded that FSH enrichment early in the follicular phase had a beneficial effect in the controlled ovarian hyperstimulation.
본 연구에서는 감압법 및 열자극법에 의한 메탄하이드레이트 생산실험을 수행하기 위해 고압의 다중공 평판형 셀기기를 설계 제작하였다. 이 실험장비를 이용하여 고투과성 미고결 시료 공극시스템에서 감압법과 열자극법에 의한 생산실험을 수행하여 생산메카니즘을 분석하였다. 감압법에 의한 생산실험 결과, 일반 가스전과는 달리 하이드레이트 해리에 의한 공극내에서의 소스효과로 인해 일시적으로 압력이 상승하고 또한 흡열반응으로 인해 온도가 하강함을 확인 하였으며, 열자극 생산실험을 수행한 결과에서는 감압법의 경우 열자극법에 비해 해리속도가 느리게 진행되어 가스생산이 낮은 상태로 지속되는 것으로 나타났다. 한편, 열자극법 중 열을 가한 후 곧바로 생산하는 경우, 주입지점 주변에서만 해리되고 또한 그 지역에서만 투과도가 커지는 것으로 나타났으며, 생산초반 이후 해리속도는 soaking까지 시행한 경우에 비해 해리가 느리게 진행됨을 알 수 있다. 한편, 본 연구의 낮은 하이드레이트 포화도를 갖는 미고 결시료 공극시스템에서 열자극법의 적정 soaking 시간 규명실험을 통해 압력과 생산거동을 고찰하였다. 그 결과, 6분간 soaking 한 경우, 온도 하강에 의한 하이드레이트의 재형성으로 2분 및 4분간 soaking한 경우보다 낮은 회수율을 보였다. 본 연구의 실험결과는 향후 높은 하이드레이트 포화도를 갖는 고결 시료 공극시스템에서의 실험을 통해 더욱 확연히 드러날 것으로 예상된다.
Objectives : Effects of Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) on intellectual development and learning ability were investigated growth and intellectual impairment rat with insufficient nutrition diet. Methods : We divided male Sprague-Dawley rats into 4 groups(A, B, C, D). They were normal group(A), growth deficiency rat with insufficient nutrition diet group(B), growth deficiency rat with 0.1% Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) group(C) and growth deficiency rat with 0.2% Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) group(D). They were administered for 5 weeks. We measured body weight, serum growth hormone, insulin-like growth factor and thyroid stimulating hormone, RBC, concentration of Hb and PCV ratio, total WBC and its composition, the values of plasma glutamic oxaloacetic transaminase(GOT) and glutamic pyruvic transaminase(GPT) activities and morris water maze test in escape distance, escape time and escape speed. Results : 1. Body weight showed a tendency to increase in the Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) groups and 0.2% Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) group showed significantly different than control groups. 2. Serum growth hormone, insulin-like growth factor and thyroid stimulating hormone showed a tendency to increase in Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) groups, however these values showed no significantly different. 3. About the counts of RBC, 0.1% and 0.2% Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) groups showed significantly different than control groups. Concentration of Hb was higher than control group in Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) groups. And 0.2% Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) group showed significantly different than control groups in PCV ratio. 4. The counts of total WBC and its composition showed no significantly different in all treatment groups. 5. The values of plasma glutamic oxaloacetic transaminase(GOT) and glutamic pyruvic transaminase(GPT) activities showed no significantly different in all treatment groups. 6. In the morris water maze test, in escape distance and escape speed, Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) groups showed no significantly different than control group. But Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) groups showed the increasing tendency. Conclusions : So Kyungohkgo($Qi{\acute{o}}ng\;y{\grave{u}}\;g{\grave{a}}o$) have an effect of promoting growth of rats and might be effect to treat various kinds of growth delay in children.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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