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고온내성 연료용 알코올 효모균주 Saccharomyces cerevisiae KNU5377에서 HSF1 유전자의 변이주 구축 (Construction of hsf1 Knockout-mutant of a Thermotolerant Yeast Strain Saccharomyces cerevisiae KNU5377)

  • 김일섭;윤혜선;최혜진;손호용;유춘발;김종국;진익렬
    • 생명과학회지
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    • 제16권3호
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    • pp.454-458
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    • 2006
  • 출아효모인 Sacharomyces cerevisiae S288C균주를 이용한 효모의 게놈이 완성된 후 S. cerevisiae는 다양한 연구 모델로 이용되어져 왔다. 현재까지 효모를 이용한 기능 유전체학 측면에서의 연구는 laboratory strainin인 S288C 균주 또는 그 유래의 균주들이다. 그러나 자연에서 분리된 효모 또는 산업적으로 이용되어지고 있는 S. cerevisiae의 유전학 측면에서의 연구는 낮은 포자형성률 및 형질전환률, 그리고 S288C 균주와의 게놈상의 상이성 때문에 거의 이루어지지 않고 있다. 여기서 우리 연구진은 자연에서 분리된 Saccharomyces cerevisiae KNU5377 균주를 이용하여 random spore analysis를 통해 MATa 및 $MAT{\alpha}$ 타입의 각각의 haploid cell을 분리 후 이미 보고된 KanMX module를 가지고 round PCR기법에 의한 short flanking homology 기법을 이용하여 전사조절인자인 HSF1 유전자가 치환된 변이주를 구축할 수 있었다. 덧붙여, 모든 유전자에 이 기법을 적용할 수는 없다는 것을 확인하였다. 앞으로 이 변이주를 통해 기능 유전체학적인 측면에서 이 유전자의 스트레스와의 관련성을 연구하고자 한다.

Molecular Differentiation of Opisthorchis viverrini and Clonorchis sinensis Eggs by Multiplex Real-Time PCR with High Resolution Melting Analysis

  • Kaewkong, Worasak;Intapan, Pewpan M.;Sanpool, Oranuch;Janwan, Penchom;Thanchomnang, Tongjit;Laummaunwai, Porntip;Lulitanond, Viraphong;Doanh, Pham Ngoc;Maleewong, Wanchai
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제51권6호
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    • pp.689-694
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    • 2013
  • Opisthorchis viverrini and Clonorchis sinensis are parasites known to be carcinogenic and causative agents of cholangiocarcinoma in Asia. The standard method for diagnosis for those parasite infections is stool examination to detect parasite eggs. However, the method has low sensitivity, and eggs of O. viverrini and C. sinensis are difficult to distinguish from each other and from those of some other trematodes. Here, we report a multiplex real-time PCR coupled with high resolution melting (HRM) analysis for the differentiation of O. viverrini and C. sinensis eggs in fecal samples. Using 2 pairs of species-specific primers, DNA sequences from a portion of the mitochondrial NADH dehydrogenase subunit 2 (nad 2) gene, were amplified to generate 209 and 165 bp products for O. viverrini and C. sinensis, respectively. The distinct characteristics of HRM patterns were analyzed, and the melting temperatures peaked at $82.4{\pm}0.09^{\circ}C$ and $85.9{\pm}0.08^{\circ}C$ for O. viverrini and C. sinensis, respectively. This technique was able to detect as few as 1 egg of O. viverrini and 2 eggs of C. sinensis in a 150 mg fecal sample, which is equivalent to 7 and 14 eggs per gram of feces, respectively. The method is species-specific, rapid, simple, and does not require fluorescent probes or post-PCR processing for discrimination of eggs of the 2 species. It offers a new tool for differentiation and detection of Asian liver fluke infections in stool specimens.

RDA method(Subtraction PCR) 기법을 이용한 닭의 Salmonella pullorum과 S gallinarum의 specific DNA fragment 분리 연구 (Specific DNA fragment analysis of Salmonella pullorum and S gallinarum by subtraction PCR)

  • 박재명;이종진;최해연;조우영;이경현;송재찬
    • 한국동물위생학회지
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    • 제28권1호
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    • pp.1-21
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    • 2005
  • Pullorum disease and Fowl typhoid are kind of poultry specific disease for poultry. The peculiar character of these poultry specific diseases is that it can be infected by transmitting vertically and horizontally, also it is hard to be discovered by clinical sign, and pathology or immunology. So, to develop the PCR method which distinguishes these two genetically similar diseases of separated the specific DNA fragment from each strain and use it for differential diagnosis by subtraction PCR method. Standard strain of S gallinarum and S pullorum, and field isolation strain were verified by biochemistry, It confirmed existence of plasmid by using the PFGE. Then, Isolated DNA from it and used it as materials for the experiment. After cutting genomic DNA of two strains by using Sau 3Al, It ligated primer to tester DNA for PCR amplification and separated specific DNA fragment bacteria with method of subtraction PCR. And, It confirmed that it is a piece of unique DNA in every bacteria using base sequence of separated DNA fragment. 1. The six specific DNA fragment were separated from the DNA of S gallinarum and S pullorum by the subtraction PCR method. 2. In the result of comparison after setting base sequence of each fragment, each separated base sequence of DNA fragment they did not correspond to each other 3. As the result of each DNA fragment is derived from the each strain of DNA, and there was no homology of genomic DNA level in mutual. 4. The fragment originated in plasmid and includes S pullorum did not separate. 5. In the result of searching base sequence in Genebank, it partially shows homology in Salmonella enterica, S typhimurium, S dublin, Escherichia coli, Shigella flexneri, Yersinia pestis, Klebsiella pneumoniae. 6. Primer design by S gallinarum DNA 2, 3 fragment used PCR, They are positive reaction in only S gallinarum at 276, 367 bp position.

PCR에 의한 수입식품의 유전자재조합 원료 분석 및 모니터링 (Monitoring and Analysis of Genetically Modified Ingredients of Imported Foods by PCR)

  • 김희연;박용춘;노혜림;조준일;김은정;남혜선;이진경;이진하;강윤숙;이종옥
    • 한국식품과학회지
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    • 제38권5호
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    • pp.605-608
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    • 2006
  • 2004년 9월부터 12월까지 경인지역으로 수입되는 원료농산물 및 가공식품에 대하여 유전자재조합성분 함유여부 및 유전자재조합식품 표시제 이행실태를 확인하기 위하여 모니터링을 실시하였다. 분석방법은 유전자재조합식품 검사지침에 따랐으며, 콩류가공품(원료콩 포함) 64건, 옥수수 가공품(원료 옥수수 포함) 52건, 콩 및 옥수수 함유식품 4건 등 총 120 건을 분석대상으로 하였다. 분석결과 콩을 원료로 하는 콩류가공품 1건, 콩 및 옥수수 혼합 가공식품 1건 등 총 2건에서 유전자재조합 콩인 round-ready soybean 성분을 확인 할 수 있었다. 그러나 유전자재조합 옥수수 (Bt11, GA21, T25, E176, Mon810)를 포함하는 가공식품은 확인되지 않았다. 그리고 콩 가공품 3건, 옥수수가공품 8건, 콩 및 옥수수가공품 1건 등 총 12건에서는 내재성유전자를 확인할 수 없어 검사불능으로 판정되었다. 유전자재조합성분이 확인된 시료 2건은 구분유통증명서를 구비하고 있었으며, 검사불능 시료의 경우 대부분 옥수수전분을 포함하는 제품으로 확인되었고, 추출된 유전자를 양상을 분석한 결과 크기가 300 bp 이하로 절단되어 PCR법을 이용한 분석 시 주형유전자로 사용하기에는 충분 하지 않은 것으로 판단된다.

산후조리원의 표준화 관리 지침을 위한 연구 - 산모와 신생아 관리현황을 중심으로 - (A Study for the Development of Standardized Management Manuel in Sanhujoriwon - Centered on the Management of Women & Newborn -)

  • 정은실;유은광
    • 여성건강간호학회지
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    • 제8권2호
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    • pp.301-313
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    • 2002
  • The purpose of this study was to develop the frame for standardized manual for Sanhujoriwon by finding out the status of the management of women & newborn in Sanhujoriwon, like postpartum care center. The subjects were 95 staffs of 22 Sanhujoriwon agreed on oral consent, in Seoul and Bundang, Korea. Data were collected from Sep. 15 to Oct. 24, 2001. The instrument used for this study was a structured questionnaire consisted of 16 items of general characteristics & educational characteristics about postpartum care, 31 items of degree of management of women's postpartum care (Cronbach's $\alpha$.93 ), 24 items of degree of management of newborn's care(Cronbach's $\alpha$.94 ), 10 items of methods of management of women's postpartum care, 8 items of methods management of newborn's care. The data were analyzed by the SPSS/PC+ program using frequency, percentage, mean, standard deviation, t-test, ANOVA and Pearson correlation coefficient. The results of the study were as follows ; 1. The mean of the degree of management for postpartum women was 4.1. The mean score for the degree of management of general postpartum care for women was 4.00 & traditional postpartum care(Sanhujori) was 4.20. The degree of management of traditional postpartum care was higher than general postpartum care for women. 2. The degree of management for newborn : The mean score for the degree of management of newborn was 4.37. 3.There was a strong positive correlation between general postpartum care and traditional postpartum care($r=.744^{**}$), and postpartum mother care and newborn care($r=.798^{**}$). 4.The basic frame for the management of the women and newborn in Sanhujoriwon. 1) For women: Integrated postpartal care Physical management : Vital sign & BP check, contraction of uterus, form and amount of lochia, management of personal hygiene, management of breast & breast-feeding, management of postpartum exercise, prevention of infection, symptom & sign of high risk and prevention & management of high risk condition; Emotional-psychological management: assessment and management of mother-baby attachment, emotional state; Educational management : education of vaccination schedule, urinary incontinence, rearing infant, breast-feeding ; and Environmental management : temperature, humidity, disinfection, cleaning, light, infection control integrated with 6 principles of Sanhujori. 2) For newborn Physical management : check of vital sign, management of umbilical cord, jaundice, prevention of infection, management of diaper rash; Emotional-psychological management : assessment of sleep, crying, activity, response of mother-baby attachment; and Environmental management : temperature, humidity, disinfection, cleaning, light, infection control integrated with 6 principles of Sanhujori. In conclusion Sanhujoriwon must be health care center for the postpartum women and newborn. Therefore, the establishment of various laws and regulations in such a way to meet the realistic needs of Sanhujoriwon as a health care center for women and infants future health should be done. The standardized management manual based on the results is absolutely required above all.

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건강한 삶을 위한 여성 고령자들의 근력운동이 건강관련 요인에 미치는 영향 (Effect of Strength Exercise Program on Health-Related Factors of the Aged for Healthy Life)

  • 권수정;박정배
    • 한국엔터테인먼트산업학회논문지
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    • 제13권8호
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    • pp.435-446
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    • 2019
  • 본 논문은 노인요양시설에서 생활하는 고령자를 대상으로 12주간 실시한 근력운동 프로그램(주 3회, 회당 60분)이 노인들의 건강관련 체력 및 대사증후군 요인에 미치는 영향을 살펴보기 위하여 실시되었다. 총 27명의 대상자(운동군 15명, 대조군 12명)가 참여하였으며 연구의 결과는 다음과 같다. 12주간의 근력운동 프로그램은 노인의 건강관련 체력요인을 유의하게 증가시켰으며, 특히 근력 및 평형성, 그리고 유연성의 증가가 보행능력을 크게 향상시켜 낙상을 예방하는데 도움이 될 수 있을 것으로 생각된다. 그리고 노인요양시설에서 근력운동이 노인들의 혈압과 혈당을 유의하게 감소시켜 대사증후군의 위험인자를 긍정적으로 개선시킴으로써 건강수준을 증가시키는 것으로 나타났다.

$^{123)I$-FP-CIT SPECT를 이용한 다중계위축증 및 조기 파킨슨병에서의 평가 (Evaluation of Multiple System Atrophy and Early Parkinson's Disease Using $^{123)I$-FP-CIT SPECT)

  • 오소원;김유경;이병철;김범산;김지선;김종민;김상은
    • Nuclear Medicine and Molecular Imaging
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    • 제43권1호
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    • pp.10-18
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    • 2009
  • 목적: 본 연구는 다중계위축증(MSA)과 원발성 파킨슨병(IPD)의 감별 진단을 위하여 $^{123}I$-FP-CIT SPECT를 사용하여 선조체내 도파민신경시스템 및 선조체외의 모노아민시스템을 평가하였다. 대상 및 방법: 총 13명의 IPD 환자(남:여=9:4, $65.5{\pm}5.3$세), 8명의 MSA 환자(남:여=6:2, $64.0{\pm}4.5$세), 정상인 12명(남:여=8:4, $63.3{\pm}5.7$세)에게 $^{123}I$-FP-CIT SPECT를 시행하였다. 도파민 운반체 분석을 위해 선조체내 미상핵과 전, 후피각에 관심영역을 설정하고 세로토닌 운반체 분석을 위해 시상하부와 뇌교에 관심영역을 각각 정한 뒤 각 부위에서 $^{123}I$-FP-CIT의 결합잠재능(binding potential, BP=V3")을 계산하였다. V3"는 비특이적 결합에 대한 특이 결합의 비율을 이용하여 구하였고 비특이적 결합 부위는 후두엽 영역에서 계수를 측정하였다. 결과: 선조체 전체 및 미상핵과 전후피각 각각에서의 도파민 운반체의 농도는 MSA와 IPD환자 모두에서 정상인에 비해 현저한 감소를 나타내었다(p<0.05). 특히 IPD환자 군에서는 후측 피각에서의 도파민 운반체 농도에 심한 감소를 보여 전후피각비가 정상군에 비하여 유의하게 증가되었으며($1.55{\pm}0.34$ vs. $1.29{\pm}0.06$, p=0.026), 미상핵/피각비은 증가된 양상을 보였으나 유의수준에 도달하지는 못하였다($1.24{\pm}0.20$ vs. $1.11{\pm}0.06$, p=0.23). MSA의 경우 전후피각비($1.32{\pm}0.19$)와 미상핵/피각비($1.07{\pm}0.25$)에서 정상군과 차이가 없었다. 세로토닌 운반체에 의한 뇌교에서의 섭취는 MSA환자군에서 정상군 및 IPD환자군에 비하여 감소되어 있는 경향을 나타내었으며(정상:$0.33{\pm}0.19$, IPD: $0.29{\pm}0.19$, MSA: $0.22{\pm}0.1$) 시상하부에서는 각 군에서 뚜렷한 차이가 없었다. 결론: 본 연구에서 $^{123}I$-FP-CIT SPECT 영상을 이용하여 IPD와 MSA환자의 선조체 도파민 운반체의 감소정도와 양상을 평가하고, 뇌교 및 시상하부에서의 세로토닌 운반체 섭취의 감소를 평가하였다. $^{123}I$-FP-CIT SPECT에 의한 선조체내 도파민 운반체 변화 및 뇌교에서의 세로토닌 운반체의 변화의 가시화 및 정량화는 MSA와 IPD의 조기 감별에 도움이 유용할 것이다.

GC-MS 를 이용한 하천수 중 Bisphenol계 화합물의 동시분석 및 모니터링 (Simultaneous Determination and Monitoring of Bisphenols in River Water using Gas Chromatography-Mass Spectrometry)

  • 김지현;최정희;강태우;강태구;황순홍;심재한
    • 한국환경농학회지
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    • 제36권3호
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    • pp.154-160
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    • 2017
  • 본 연구는 하천수 중 bisphenol계 화합물 종 6 (BPA, BPB, BPC, BPE, BPF, BPS)을 동시분석하기 위하여 GC-MS를 이용하였다. 또한 최적의 전처리 방법을 확립하고자 SPE 및 LLE법을 이용하여 표준시료로부터 검량선의 직선성, MDL, LOQ, 정확도 및 정밀도를 비교하였다. SPE 및 LLE 전처리 방법에 의한 MDL은 각각 $0.0005{\sim}0.0234{\mu}g/L$$0.0037{\sim}0.2034{\mu}g/L$, LOQ는 각각 $0.0015{\sim}0.0744{\mu}g/L$$0.0117{\sim}0.6477{\mu}g/L$, 검량선의 결정계수($r^2$)는 모두 0.9969이상 정확도는 각각 93.2~108%와 97.4~120%, 정밀도는 각각 1.7~4.6%와 0.7~6.5%범위로 만족한 정도관리 결과를 얻었다. 하지만 SPE법에 의한 MDL 및 LOQ 값은 LLE법보다 약 4~45배 정도 높은 감도를 보였고, 특히 BPA의 경우는 다른 화합물들보다 45배 정도 높았다. 따라서, 본 연구에서는 SPE법을 적용하여 하천수 시료를 분석하였고, 조사지점은 본류 7개, 지류 6개, 하수종말처리장 2개 지점을 선정하였다. Bisphenol계 화합물 중에서 BPB, BPC, BPE, BPF 및 BPS는 모두 불검출 되었으나, BPA 농도는 $0.0095{\sim}0.2583{\mu}g/L$ 범위로 본류 $0.0166{\sim}0.0810{\mu}g/L$, 지류 $0.0095{\sim}0.2583{\mu}g/L$, 하수종말처리장$0.0352{\sim}0.1217{\mu}g/L$으로 미량 수준이었다.

정상, 낭종 및 법랑아세포종 세포에서의 유전자 발현 차이 분석 (ANALYSIS OF DIFFERENTIAL GENE EXPRESSION IN NORMAL, CYST AND AMELOBLASTOMA CELLS)

  • 양철희;백병주;양연미;김재곤
    • 대한소아치과학회지
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    • 제32권1호
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    • pp.75-88
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    • 2005
  • 법랑아세포종은 1868년에 처음 보고된 이래 명칭, 발생기전, 분류 그리고 치료 방법 등에 관하여 수 많은 논란이 있어 왔는데 이는 법랑세포종이 양성종양임에도 불구하고 종양자체의 진행이 파괴적이고, 외과적 처치를 한 후에도 재발이 잘되며, 흔하지는 않지만 악성종양과 유사하게 전이를 보이는 등 독특한 특성을 지니고 있기 때문이다. 정상세포와 암 세포 간에 차이를 보이는 유전자 혹은 정상세포에서 변형이 일어날 때 특이적으로 발현하는 유전의 분리 및 분석하는 것은 암세포의 생성과정을 이해하는데 있어서 중요한 열쇠를 제공할 수 있다. 이에 본 연구는 RNA differential display 방법 중 재연성과 반복성이 개선된 Ordered differential display(ODD)RT-PCR과 보다 개선된 $GeneFishing^{TM}$기술을 이용하여 악성과 양성종양 사이의 유전자 발현의 차이를 조사하고, 특이 유전자의 profile을 확보하고자 하였다. $GeneFishing^{TM}$기술과 RT-PCR을 수행한 결과 nasopharyngeal carcinoma gene을 제외한 9개의 유전자는 악성에서 특이적으로 발현되는 것을 확인하였다. 따라서 $GeneFishing^{TM}$을 이용하면 각 시료간의 mRNA 상에서 발현차이를 보이는 DEG를 비교 분석하면 암관련 유전자, 항생제 태성 유전자, 그리고 분화 관련 유전자들에 대한 연구가 용이하게 수행할 수 있을 것으로 생각된다.

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Bacillus velezensis K10 유전체 분석을 통한 균주 선발 마커 개발 (Development of Genetic Selection Marker via Examination of Genome in Bacillus velezensis K10)

  • 김삼웅;김영진;이태욱;지원재;방우영;김태완;방규호;갈상완
    • 생명과학회지
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    • 제33권11호
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    • pp.897-904
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    • 2023
  • 본 연구는 Bacillus velezensis K10의 유전체 분석결과에 따른 유전자의 고유한 특성을 이용하여 유전자마커를 탐색하고 확립하여 산업현장에서 활용하기 위해서 수행하였다. B. velezensis K10은 총 4,159,835 bps를 유지하였으며, 5,136개의 단백질을 발현하는 것으로 조사되었다. B. velezensis K10은 표준균주에 비교하여 전반적으로 외부요인에 기인되는 유전자의 이동이 훨씬 많은 것으로 나타났다. 이와 같은 양상에 기인하여 B. velezensis K10은 특유의 유전적 서열을 유지할 수 있는 것으로 추정되었다. 선발마커 발굴을 위해 recombinase, integrase, transposase, phage-related genes, 등 유전자 변이 유발이 쉬운 게놈상의 영역에 대해 탐색을 실시하였다. 그 결과, 선발마커로써 가능성이 높은 9개 부위를 확보하였다. 후보마커는 일부 다른 영역에서 특이성을 보이는 영역들이 존재했지만, phage 연관 유전자들에서 매우 특이성이 높았기 때문에, 모두 phage 관련 부위에서 모두 탐색되었다. 종간 후보 선발마커로써 B. licheniformis K12, B. velezensis K10, B. subtilis, B. cereus 등에 대해 PCR 분석을 실시하였다. 그 결과 BV3, BV5~9까지 총 6 프라이머 세트에서 B. velezensis K10 특이적인 PCR 산물이 형성되는 것을 확인하였다. 다른 한편으로, subspecies 수준에서 분석 결과, BV3, 5, 8, 9 등 4 프라이머 세트에서 B. velezensis K10 특이적인 PCR 산물이 형성되는 것을 관찰했다. 분석된 마커 중에서 BV5와 8가 가장 특이성이 높았기 때문에 종(species) 및 아종(sub-species) 수준에서 B. velezensis K10 유전자 선발마커로써 BV5와 8을 활용 가능할 것으로 제의된다.