Cleach, Jerome;Watier, Denis;Le Fur, Bruno;Brauge, Thomas;Duflos, Guillaume;Grard, Thierry;Lencel, Philippe
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제28권11호
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pp.1782-1790
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2018
Assessment of microorganism viability is useful in many industrial fields. A large number of methods associated with the use of fluorescent probes have been developed, including fluorimetry, fluorescence microscopy, and cytometry. In this study, a microvolume spectrofluorometer was used to measure the membrane potential variations of Escherichia coli. In order to estimate the sensitivity of the device, the membrane potential of E. coli was artificially disrupted using an ionophore agent: carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone. The membrane potential was evaluated using two ratiometric methods: a Rhodamine 123/4',6-diamidino-2-phenylindole combination and a JC-10 ratiometric probe. These methods were used to study the impact of freezing on E. coli, and were compared with the conventional enumeration method. The results showed that it was beneficial to use this compact, easy-to-use, and inexpensive spectrofluorometer to assess the viability of bacterial cells via their membrane potential.
Fluorescent whitening agent (FWA) is a widely used chemical in paper industry, but a systematic and scientific method on FWA analysis has not been established. We performed the basic researches on the fluorescence analysis of FWA. The fluorescence of FWA was investigated using a spectrofluorometer and a spectrophotometer. When FWA solution was analyzed using the spectrofluorometer, we found that the peak wavelength of the fluorescence emission was about 440 nm and that of the fluorescence excitation was about 370 nm irrespective of FWA types. Papers dyed with an internal FWA were prepared in a laboratory and the reflectance and the fluorescence index were measured using the spectrophotometer. It was confirmed that the optimum peak wavelength of the reflectance was 440 nm and the fluorescence index calculated from the CIE whiteness with and without UV light under a light source D65 was the best indicator to measure the fluorescence of FWAs exiting in papers.
본 연구는 재조합 대장균과 S.cerevisiae의 발효공정에서 형광스펙트럼 데이터를 수집하였으며, SOM을 이용하여 형광스펙트럼 데이터를 특정 그룹으로 분류하고 발효공정을 분석하고자 하였다. 배출가스 내 이산화탄소농도와 세포농도 같은 공정변수들은 SOM 알고리즘으로부터 얻은 분산 및 정규화된 가중치들과 좋은 연관성을 나타내었다. 전체 스펙트럼 데이터의 분류는 생물공정 모델링을 위한 매우 중요한 단계인데 그 이유는 몇몇 여기파장과 방출파장의 유의한 조합들이 전체영역의 스펙트럼 데이터로부터 추출되기 때문이다. 예를 들면, 본 연구에서 SOM을 이용하여 추출한 98개의 스펙트럼 데이터의 예제들은 부분최소자승법이나 감독신경망 (supervised neural network)을 이용한 공정의 모델링에 사용될 수 있다.
Sprague-Dawley계 흰쥐의 악하선에서 선세포를 분리하여 fura-2/AM(fura-2)으로 염색한 후 spectrofluorometer로 세포내 $Ca^{2+}$농도를 측정하였다. 악하선 세포를 관류장치(perfusion chamber)에 넣고 표준용액을 관류시키면서 isoproterenol($1{\mu}M$)과 octanol(1mM)을 투여한 후 $Ca^{2+}$농도 변화를 측정하였는데 단독 투여시 $Ca^{2+}$농도는 거의 변화하지 않았으나 함께 투여한 경우 세포 내 $Ca^{2+}$농도가 증가함을 확인할 수 있었다. Adenylate-cyclase를 활성화 시키는 forskolin($10{\mu}M$)과 octanol을 함께 투여하였을 때도 isoproterenol의 경우와 유사한 증가 현상을 보이는 것으로 볼 때 octanol과 isoproterenol 또는 forskolin이 함께 작용할 때 세포 내 $Ca^{2+}$가 증가하는 것을 확인할 수 있었다. $Ca^{2+}$의 증가기전을 확인하고자 표준용액의 $Ca^{2+}$를 제거함은 물론 EGTA를 처리하여 세포외부의 $Ca^{2+}$를 제거한 후 상기한 바와 동일한 실험을 반복한 결과 $Ca^{2+}$농도의 증가를 보이지 않았다. 따라서 세포 내 $Ca^{2+}$의 증가는 세포 외부로부터의 $Ca^{2+}$유입 때문인 것으로 확인할 수 있었다. 이러한 $Ca^{2+}$의 유입 capacitative entry pathway를 이용하는지 확인코자 gadolinium($10{\mu}M$)을 처리하였을 때 $Ca^{2+}$농도의 증가가 완전히 억제되지는 않았지만 $Ca^{2+}$의 증가속도와 증가량이 감소되어 있음을 확인할 수 있었다. 이상의 실험결과들을 정리하면 세포 내 $Ca^{2+}$농도의 증가와 관련 ${\beta}$-아드레날린계 관련 약물과 옥탄올(octanol)을 함께 처리할 경우 세포 내 $Ca^{2+}$는 세포 외부에서 유입되어 증가되고 그 경로는 일부 capacitative entry pathway를 통함을 확인할 수 있었다.
SPEX SkinSkan is a newly developed spectrofluorometer that can calculate transmission of UVA on the surface of human skin as a non-invasive method. We have investigated UVA protection factors of Japanese over-the-counter sunscreens using SPEX SkinSkan. This non-invasive method is useful to know UVA protection of sunscreens in vivo.
Objective : The aim of this present study is to evaluate the inhibitory effect of allergen removed Rhus verniciflua (ARV) on Matrix Metalloproteinase-9 (MMP-9), Matrix Metalloproteinase-2 (MMP-2) which is considered to have a clinically important role in tumor metastasis. Methods : The inhibitory effects of standardized extract of ARV on the MMP-2, MMP-9 were investigated by spectrofluorometer while the inhibitory effects on the active MMP-2, pro MMP-2, pro MMP-9 were investigated by zymography. Antimetastatic effect of standardized extract of ARV was investigated in vitro on human fibrosarcoma cell (HT1080)'s invasion through Matrigel. Results : The standardized extract of ARV showed inhibitory effects on the active MMP-2 (IC50, $1.01{\mu}g$/ml), active MMP-9 (IC50, $2.5{\mu}g$/ml) depending on concentrations which was determined by spectrofluorometer. The standardized extract of ARV showed inhibitory effects on the active MMP-2, pro MMP-2, pro MMP-9 depending on concentrations which was determined by zymography. However its inhibitory effect on pro MMP-9 was relatively weaker rather than active MMP-2, pro MMP-2. The standardized extract of ARV showed inhibitory effects in vitro on human fibrosarcoma cell (HT1080)'s invasion through Matrigel according to concentration. Conclusions : These results indicate that standardized extract of ARV has antimetastatic effect through inhibit again MMP-2, MMP-9. Also its inhibitory effect is more powerful on active MMP-2, pro MMP-2 than on active MMP-9, pro MMP-9. It is necessary to conduct further studies on other MMP families, TIMP, and each component of standardized extract of ARV.
본 연구에서는 배위자로 공액계 벤젠고리로 연결된 중심금속이 이리듐인 착물화합물과 합성하여 인광재료로서의 가능성을 실험하였다. 새로운 이리듐착물화합물의 화학적 구조를 알아보기 위해 $^1H$-NMR, $^{13}C$-NMR, UV-vis, spectrophotometer를 사용하였으며, 광 물리학적, 전기화학적 특성에 대한 측정은 spectrofluorometer, cyclic voltammetry를 통하여 측정하였다. 이리듐 단핵 및 이핵착체는 589~598nm의 영역에서 발광파장이 확인되었으며, DMSO[$5{\times}10^{-5}$]용액에서 양자효율이 단핵 착물화합물의 경우 0.1, 이핵착물화합물의 경우 0.13으로 나타났다. 이핵 이리듐착물화합물의 전기화학적 특성은 energy gap은 2.45eV, optical band gap은 2.58eV로 계산되었다.
이 실험은 여러 파장$(240{\sim}520\;nm)$의 자외선 또는 가시광선(이후 '광선'이라 표기함)을 흰쥐흉부대동맥에 조사하여 이때의 혈관장력의 변화 및 조직내 cyclic GMP농도의 변화를 관찰하기위하여 시행하였다. 돼지관상동맥 또는 흰쥐 흉부대동맥의 환상표본에 spectrofluorometer의 xenon lamp를 이용하여 여러 파장의 광선을 조사하고 이때의 장력변동을 polygraph상에 기록하였다. Cyclic GMP농도변화는 표본에 광선을 조사한 직후 조직을 얼리고 homogenization 및 원침시킨 후 상청액을 ether로 추출하여 RIA kit로 측정하였다. Phenylephrine으로 수축된 내피존재 흰쥐 흉부 대동맥에서는 광선조사로 수축반응을 보였고 320 nm에서 최대수축반응을 일으켰다. 그 이상의 파장에서는 점차 수축반응이 감소되어 420 nm에서는 최대 이완반응을 일으킨 후 점차 기본장력으로 회복되었다. 그러나 내피제거 표본에서는 전파장에서 이완반응만을 일으켰고 이때 최대 이완반응은 370 nm에서 관찰되었다. 내피존재 표본에서 320, 380 및 420 nm의 광선을 30초간 조사한 결과 380과 420nm에서 현저한 cyclic GMP의 증가가 관찰되었으나 320 nm에서는 유의한 변동이 없었다. 한편, 내피제거 표본에서는370 nm의 광선조사로 cyclic GMP함량이 약 4배 증가하였다. 이상의 성적으로부터 흰쥐 흉부대동맥은 광선조사에 의하여 내피존재 표본에서는 수축-이완의 이상성반응을, 제거표본에서는 이완반응만을 일으키고 양 표본의 이완반응은 nitric oxide-cyclic GMP계의 활성화에 기인하나 수축반응은 cyclic GMP계와 직접 관련성이 없는 것으로 추론하였다.
고상반응법과 착체중합법 두 합성법에 의해 합성된 $SrAl_2O_4:Eu^{2+}$, $Dy^{3+}$ 축광성 형광체 분말의 특성을 비교 분석하였다. 열적 안정성을 평가하기 위해 산업 도자 제조공정에서 사용되는 열처리 조건($1250^{\circ}C$, 1시간 유지, LPG 환원분위기)을 적용하여 고상반응법과 착체중합법으로 합성된 $SrAl_2O_4:Eu^{2+}$, $Dy^{3+}$ 축광성 형광체 분말의 열처리 전후의 축광 특성변화를 관찰하였다. 두 합성법으로 합성된 분말과 고온 열처리 전후의 분말은 XRD 분석을 통해 결정구조 및 결정자 크기변화를 확인하였고, SEM과 PSA 분석을 이용하여 미세구조 및 입자 크기 변화를 관찰하였다. Spectrofluorometer 분석을 통해 $SrAl_2O_4:Eu^{2+}$, $Dy^{3+}$ 축광성 형광체의 여기 및 발광 특성, 장잔광 특성 변화를 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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