This study was performed to determine the developmental potentials of nuclear transfer (NT) embryos using life-span extended cells transfected with a foreign gene as donor cells. A life-span extended bovine embryonic fibroblast cell line was transfected with an expression vector in which the human type II collagen (BOMAR) and ear fibroblasts were used as a donor cell. Cytogenetic analysis was performed to analyze the chromosomal abnormality of donor cells. The fusion rate of 1.8 kV/cm for $15{\mu}sec$ given twice was significantly higher than that of other groups (p<0.05) and the embryos lysed were significantly higher after 1.8 kV/cm for $20{\mu}sec$ given once compared to other groups (p<0.01). The blastocyst development in the ear cell group was statistically significant compared to both BOMAR groups (p<0.01). Both BOMAR groups cultured more than 40 passages (>40 passages) had a lower number of chromosomes; however, fresh granulosa cell (GC) and BOMAR groups cultured less than 20 passages had normal chromosome numbers. Both >40 passages BOMAR groups had numerous obscure debris in metaphase spreads. The transfected foreign gene was expressed in all BOMAR groups, but not in the GC group. Based on these results, the lower developmental potential of NT embryos using life-span extended donor cells transfected with a foreign gene might be a cause of chromosomal abnormality in donor cells.
The morphorogical characteristics of the Morus tiliaefolia growing wild in the Korean peninsula are as follows. The chromosome number of somatic cell is 2n=84,that is hexaploid. The shape of male inflorescence is a long cylinder shape of 3.6∼6.0 cm. The length of female inflorescence is 1.8 cm, red violet or violet and the weight of mulberry fruits is 1.39∼1.65 g. The winter bud is very big in comparison with the branch and the accessory bud does not exist. The leaf is big and lobed leaf or entire leaf, the density of lenticell is 9.42$\pm$1.29 ㎠. The length of leaf trichome is 236∼438 ㎛ and the distribution density is 16∼37/25 ㎟ and heigh density of leaf back. The trichome shape of the leaf surface is cylinder shaped, in the leaf back it is thin and long corn shaped.
A Silkie Bantam embryo fibroblast line (named SBF59 line) was successfully established by using direct explant culture and cryopreservation techniques. Cell morphology, viability, dynamic growth and contamination were tested and the karyotype and levels of isoenzymes of lactic dehydrogenase and malic dehydrogenase were analyzed. Four kinds of fluorescent protein extrogenes, including $pEGFP-N_3$, $pECFP-N_1$, $pEYFP-N_1$ and $pDsRed1-N_1$ were transfected into the cells. The results showed that the cells were healthy and possessed a fibrous structure without a change in morphology. The average viability of the cells was 96% before freezing and 90.5% after thawing. The growth curve appeared as typical "S" shape and the cell growth passed through a detention phase, a logarithmic phase and a platform phase; the estimated population doubling time (PDT) was 38.5 h; assays for the presence of bacteria, fungi, viruses and mycoplasmas were negative; the cell line showed no cross contamination when assessed by isoenzyme analysis; the chromosome number was 2n = 78 on more than 88% of occasions; four kinds of fluorescent protein extro-genes appeared to be expressed effectively with a high transfection efficiency between 18.3% and 42.3%. The cell line met the required quality control standard. It not only preserves the genetic resources of the important Silkie Bantam at the cellular level but also provides valuable materials for genomic, post-genomic, somatic cell cloning research and other applications.
Protoplasts, isolated from leaf of N. tabacum NR-/SR+ and N. glottnosa were electrofused and divided with a plating efficiency of 30∼35% in AAPI 9M medium. Green callus lines were selected in protoplast-derived colonies on MSNO3 selection medium with 1.2mg/ml streptomycin sulfate on the basis of nitrate reductase proficiency and streptomycin resistance. Four putative hybrid plant lines regenerated from the green callus lines had intermediate morphology between that of parents with respect to floral shape, corolla length and ovate leaf blade. Zymograms of leaf peroxidase and esterase from these putative hybrid plant lines showed isozyme profiles derived from both parents and also, they exhibited additional and lost bands. Cytological analysis of two putative hybrid plant lines gave chromosome counts of 2n=66 in L22 and 2n=54 in L44 which were less than the expected number of N. tabacum(2n=48) and N. glutinosa(2n=24).
Based on external morphology, each of five species can be classified into three groups: 1) B. falcatum group (B. falcatum, B. scorzonerifolium), 2) B. euphorbioides group (B. euphorbioides) and 3) B. longiradiatum group (B. longiradiatum, B. latissimum). B. falcatum group has cauline leaves linear or lanceolate in shape and attenuate at base and not surrounding the stem. In contrast, B. longiradiatum group and B. euphorbioides group have cauline leaves ovate, lanceolate or panduriform in shape and auriculate or cordate at base and completely surrounding the stem. The inflorescence is basically compound umbels terminated at the apex of stem. But B. euphorbioides group is small in size and pedicels are rather short and the number of the pedicel is ca. 20. On the other hand, B. longiradiatum and B. falcatum groups are large in size and their pedicels are long and the number of the pedicel is around 10. The pore of pollen aperture of B. longiradiatum and B. latissimum is partially projected or not while those of B. falcatum group and B. euphorbioides is usually remarkably projected. The number of somatic chromosomes was counted as 2n=20 in B. falcatum, 2n=12 in B. scorzonerifolium and B. longiradiatum, and 2n=16 in B. euphorbioides and B. latissimum. Although chromosome numbers of B. euphorbioides and B. latissimum are the same, the two species are not likely to relate because the karyotypes of the two species are different from each other. Based on these observations, it can be concluded that B. latissimum is most closely related to B. longiradiatum. However, molecular data indicated that the species is probably related to B. bicaule distributed in central Siberia. In terms of conservation of B. latissimum, overexploitation by human and grazing by goat are most threatened factors.
The palynological study of 31 taxa of Korean Artemisia L. was carried out to evaluate their taxonomic characteristics and to determine the relationships among the taxa. The size and shape of the pollen are not used as characteristics to classify the taxa of Korean Artemisia L., but the granule distribution ands pinule connection on the exine were useful for an interspecific classification and for reflecting the relationship between some taxa. It is considered that Artemisia pollen has evolved from a connected spinule and a nearly psilate surface into 1) a connected spinule and a granule surface, 2) a disconnected spinule and a granule surface, 3) a disconnected spinule and a dense granule surface. These pollen characteristics with external morphological characteristics, a geographical distribution and a somatic chromosome number are considered to be good characteristics for distinguishing the relationship of some taxa, such as the A. japonica group (A. hallaisanensis, A. angustissima, A. littoricola) and the A. sacrorum group (A. sacrorum var. sacrorum, A. sacrorum var. incana, A. sacrorum var. iwayomogi).
In an effort to improve the major tree species in Korea, the seed of Robinia pseudoacacia, Pinus rigida, Pinus densiflora, Pinus thunbergii and Larix leptolepis were treated with X-ray and thermal neutron at the Brookhaven National Laboratory, and germination rate of the seed and some characteristics of the seedlings from irradiated seed were investigated and the results were summarized as follows. 1. The germination rate of the irradiated seed of Robinia pseudoacacia, Pinus densiflora, Pinus thunbergii and Pinus rigida was decreased, when the irradiation time of thermal neutron increased from 3 hours to 9 hours. The seed of Larix leptolepis was completely died out in all range of irradiation time. 2. The seed of Pinus densiflora, Robinia pseudoacacia and Pinus rigida showed low germination rate, when the dosage of radiation increased in the range of 10,000r-30,000r X-ray. This dosage of radiation was almost lethal to the seed of Pinus thunbergii and Larix leptolepis. 3. The growth rate of radiated Robinia pseudoacacia has been decreased when the dosage of X-ray and thermal neutron increased. However, the trees treated with thermal neutron for 3 hours showed 14.9 percent-increase in seedling height and some thornless individuals appeared in this treatment. 4. Individuals with variegated leaf, rugose leaf and albino were appeared in X-ray and thermal neutron treatment. 5. Abnormal mitosis of somatic cell, cell with two nucleoli, cell with two nuclei and chromosome clump in mitosis of somatic cell were observed in Robinia pseudoacacia irradiated with thermal neutron. 6. Resistanty against pawdery mildew was decreased in Robinia pseudoacacia radiated with X-ray and thermal neutron. 7. Length of stomata did not show any difference however number of stomata per unit area decreased in Robinia pseudoacacia radiated with thermal neutron. The leaves of Robinia pseudoacacia radiated with thermal neutron were thicker than those of non-treated one, but width of palisade tissue was decreased. The most sensitive one among those species to the thermal neutron treatment was Larix leptolepis, followed by Pinus densiflora, Robinia pseudoacacia, Pinus thunbergii and Pinus rigida in the order. In X-ray treatment, the most sensitive one was Larix leptolepis, followed by Pinus densiflora, Pinus thunbergii, Pinus rigida and Robinia pseudoacacia in the order. Morphological, cytological variation of the radiated Robinia pseudoacacia seemed to indicate some possibility to be used for tree improvement.
Two individuals ($sp_1$, $sp_2$) of purple and one individual ($sd_1$) of red hearted flower were selected from 18 years old Hibiscus syriacus trees obtained from the seeds treated with colchicine, and their morphological and physiological characteristics were investigated and following results were obtained. 1. The somatic chromosome number of the selected individuals, $sp_1$, $sp_2$, and $sd_1$ were 2n=160, while that of the check tree was 2n=80, indicating that the selected individuals, $sp_1$, $sp_2$ and $sd_1$ were tetraploid. 2. Peroxidase isoenzyme bands of high activity in selected individuals, $sp_1$, $sd_1$ and check tree were mostly in cathode, fixed band was f and v bands, and frequency of each band and their activity were not different between selected individuals, $sp_1$ and $sd_1$ and check tree. 3. The flowers of $sp_1$ individual were large in size and more dark purple than check tree's. The flowers of $sp_2$ individual were not increased in size, but they were dark purple and red heart at the base of the petal was expanded to 2/3 of the petal length. The flower of $sd_1$ individual was also large and some of the red lines from the petal base were extended to 2/3 of the petal length, which was much longer than those of the check tree. 4. Thickess of leaves, length of guard cells, diameter of pollens, wood fiber lengths and woody fiber widths were all increased in $sp_1$, $sp_2$ and $sd_1$ as compared to those of the check tree. 5. Survival percentage of cuttings was 80% with $sp_1$ and 36% with $sd_1$, and their growth performance were inferior to control in their second growing season.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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