This study was carried out to determine the effects of plant growth regulators on cell culture and organogenesis from Sicyos angulatus L. using explants of leaves, stems and cotyledons. Optimal callus induction for S. angulatus was obtained on MS medium with 0.1mg/$\ell$ BA and 2.0mg/$\ell$ 2,4 -D from cotyledons, 0.1mg/$\ell$ BA and 5.0mg/$\ell$ NAA from leaves explants, Optimal media for subculture and growth of S. angulatus callus were 1/2 MS medium with 0.1mg/$\ell$ BA and 1.0mg/$\ell$ 2,4 -D for solid culture, and 0.1mg/$\ell$ 2,4-D for suspension culture. Many adventitious roots with some shoots were formed were formed from leaf and cotyledon explants of S. angulatus during callus induction with optimal combinations of plants growth regulators.
Conditions for somatic embryogenesis and plant regeneration from stem tissues of Euphorbia pulcherrima were esta-blished. Explants from leaf, petiole, stem were examined for their embryogenesis on MS solid medium supplemented with plant growth hormones in combination at various concentrations. From leaf or petiole explants, callus was indu-ced well but never proceeded to the embryonic stage in our expermental conditions. From stem explants, however, multiple shoots following callus induction emerged in about 6 to 8 weeks on MS agar medium supplemented with 1.5 mg/L of benzyladenine. Upon transfer, roots were developed on hormone-free MS solid medium.
The main purpose of these studies were to clarify differences in Cheju - scoria and other solid media on quantity and quality of cherry tomatoes and on shift of component of the nutrient solution, and to use Practically Cheju-scoria as an excellent solid culture medium. The results obtained were summarized as follows ; 1. Among scoria plots, the rates of dry weights, fruits and their sugar-acid ratio were higher in the plot that was drained well with deep flow for one hour once a day. 2. Fresh fruit weights were lighter in rockwool and deep flow technique, but larger in scoria, Hyugashi (artificial gravel, $\Phi$10-12mm) and perlite in moving to higher flower cluster. 3. The results of analysis on microelement among solution components showed decrease of concentrations of P and K in the period of growth and development. 4. Yields and brix of cherry tomato showed a tendency to increase in rockwool and Hyugashi than anothers. 5. The concentration of fertilizer base was increased in general solution culture. Transpiration and absorption were similar in scoria plot and other media. 6. More studies of the Cheju-scoria development is required in order to use it as a solid medium for solution culture.
Protoplasts were isolated from hypocotyls, cotyledons, and young leaves of Chinese cabbage grown under in vitro environmental condition. An enzyme mixture of 1% Cellulysin and 0.5% Macerozyme in combination with 0.4 M mannitol was most effective condition for protoplast isolation. The highest yield of protoplasts, 7.6$\times$10$^{5}$ protoplast/g of fresh weight, was obtained from the treatment of leaves for 12~16 hours at 27~28$^{\circ}C$ with shaking at 30 rpm. The most suitable medium for an initial cell division was K8p basal medium supplemented with 5 mg/L 2,4-D and 2 mg/L kinetin. Within 7~10 days, protoplasts derived from hypocotyl and cotyledon tissues formed cell colonies. When the cells were grown at the size of 8~10 cells, they were embedded into semi-solid medium containing 0.2% agarose. Calli derived from protoplast culture were transferred to the 100 different types of plant regeneration media, but no completely regenerated plants from inbred lines of Chinese cabbage used for this study wore obtained, though frequent rooting took place in several media tested.
A solid-state culture based on grain materials was attempted to produce a fibrinolytic enzyme for blood circulation improvement using Bacillus subtilis BK-17. The spore, rather than vegetative cell inoculation, of B. subtilis BK-17 on the solid-state culture was effective in the production of a fibrinolytic enzyme. Maximum spore production was obtained with a SFM medium (0.8% nutrient broth, 0.05% yeast extract, $10^{-1}$ M $MgCl_2$, $10^{-3}$ M $FeCl_3$, $10^{-4}$$MnCl_2$, $10^{-5}$ M dipicolic acid, pH 6.5). Optimal pH and temperature were pH 6 and $30^{\circ}C$, respectively. The spore production reached a maximum at 60 hours of incubation. Bacillus subtilis BK-17 on the mung bean solid-state culture produced greater fibrinolytic activity, and less activity was seen in other grains such as kidney bean, soybean and corn. Protein and lipid contents of fermented soybeans were about 10 - 30% more than those of unfermented soybeans. Amino acid content was also 5 - 20% more than that of unfermented soybeans. These results indicated that fermented solid-state culture medium, fermented soybean in this case, can be utilized as a food supplement.
Cotyledonary somatic embryos after being cultured in a liquid MS medium for 1 week were subcultured on a solid MS medium and then the embryos germinated at a rate of 92%, but the rate was lowered by extending the culture period of the embryos on a liquid medium: 26% germination on a liquid medium culture for 4 weeks. Somatic embryos subcultured on the liquid medium showed the normal elongation of hypocotyl and radicle but in part showed secondary embryogenesis on hypocotyl and callus formation on and around the root-hypocotyl juncture. Through observation of scanning electron microscope, apical meristem in plumule showed the loose arrangement of cells, and abnormal leaf primordium formation and growth arrest of the primordium or no leaf primordium formation. Therefore, it is suggested that the germination arrest of carrot somatic embryos on liquid medium culture is due to the structural abnormality of the apical meristem in plumule.
This study was carried out to investigate the optimum composition and concentration of medium for the acclimation of the shoots derived from bioreactor culture of Scrophularia buergeriana. Rooting and growth of the shoots cultured in bioreactor for 4 weeks were better on liquid full strength MS medium while one-tenth of MS medium was good for rooting and growth of the shoots cultured in bioreactor for 6 weeks. Leaf expansion was more effective in the shoots cultured for 6 weeks on solid MS medium than in those cultured for 4 weeks. No leaf expanded in liquid medium. Vitrification rate was higher in full strength solid MS medium than in half strength MS medium. It is concluded that acclimation of the shoots is more effective on the half strength solid MS medium containing 1.2% agar.
Claudiu Magioli;Ana Paula Machado da Rocha;Pinheiro, Marcia-Margis;Martins, Gilberto-Sachetto;Elisabeth Mansur
Journal of Plant Biotechnology
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v.2
no.1
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pp.43-49
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2000
An efficient and reliable Agrobacterium transformation procedure based on TDZ (thidiazuron)-induced organogenesis was established and applied to six Brazilian eggp1ant varieties. Optimum transgenic plants recovery was achieved upon the study of the following parameters affecting transformation efficiency, using F-100 variety as a model: i) explant source; ii) pre-culture period; iii) physical state of the pre-culture medium and iv) coculture conditions. The highest frequency of kanamycin-resistant calli derived from leaf explants (5%) was obtained without a pre-culture period and co-cultivation for 24 h in liquid medium followed by five days on solid RM (regeneration medium). For cotyledon explants, best results were achieved upon a pre-culture of 24 h in liquid RM and a co-cultivation period of 24 h in liquid RM followed by three days in solid RM, resulting in a transformation Sequency of 22.7%. Kanamycin-resistant organogenic calli were also obtained from cultivars Emb, Preta Comprida, Round nose Shaded, Campineira and Florida Market. The expression pattern of an epidermis-specific promoter was studied using transformants expressing a chimaeric construct comprised by the promoter Atgrp-5 transcriptionally fused to the coding region of the gus gene. The expression pattern was similar to that previously observed in tobacco and Arabidopsis thaliana, with preferential expression at the epidermis and the stem phloem. These results support the idea that the Atgrp-5 promoter can be used to drive defense genes in these tissues, which are sites of pathogen interaction and spread, in programs for the genetic improvement of eggplant.
To establish an efficient proliferation and regeneration of PLBs (protocorm-like bodies) of Phalaenopsis plants, a variety of propagation medium types, various concentraions of sucrose as well as liquid and solid type were tested in this study. Further, activated charcoal, citric acid and ascorbic acid were compared whether these agents are suppose to reduce the browning in culture process using PLBs of Phalanopsis plants. With regard to the proper propagation medium, VW medium showed 1.3 ~ 2 times highr than those of other medium in an index of increasing for fresh weight and 50% higher than those of other medium in the frequency of shoot regeneration. However, regarding liquid and solid types of culture, there were no significant differences in the proliferation of PLBs and regeneration of shoots from PLBs. In the experiment for a variety of sucrose concentrations (0 ~ 50 g/l), 10 g of sucrose showed 30 ~ 50% higher than other concentrations in increasing index and 10 ~ 50% higher in the regeneration of shoots from PLBs. Regarding the reduction of browning in tissue culture via PLBs of Phalaenopsis plants, 1 g of activated charcoal showed only 1.5% browning of PLBs cultured. Whereas, other treatments including citric acid and ascorbic acid showed 6 ~ 16% of browning of PLBs. Therefore, activated charcoal was selected as an efficient anti-browning agents for the culture of PLBs in Phalaenopsis plants. Using above-described results can be contibuted to the establishment of mass propagation system using PLBs of Phalaenopsis plants in the future.
Spores of Aspergillus sp. SU14 were treated repeatedly and sequentially with $Co^{60}$${\gamma}$-rays, ultraviolet irradiation, and N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine. One selected mutant strain, Aspergillus sp. SU14-M15, produced cellulase in a yield 2.2-fold exceeding that of the wild type. Optimal conditions for the production of cellulase by the mutant fungal strain using solid-state fermentation were examined. The medium consisted of wheat-bran supplemented with 1% (w/w) urea or $NH_4Cl$, 1% (w/w) rice starch, 2.5 mM $MgCl_2$, and 0.05% (v/w) Tween 80. Optimal moisture content and initial pH was 50% (v/w) and 3.5, respectively, and optimal aeration area was 3/100 (inoculated wheat bran/container). The medium was inoculated with 25% 48 hr seeding culture and fermented at $35^{\circ}C$ for 3 days. The resulting cellulase yield was 8.5-fold more than that of the wild type strain grown on the basal wheat bran medium.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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