Martin, Kottackal Poulose;Zhang, Chun-Lai;Hembrom, Manoj Emanuel;Slater, Adrian;Madassery, Joseph
Plant Biotechnology Reports
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제2권2호
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pp.163-169
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2008
Roots of Ophiorrhiza prostrata D. Don serve as a rich source of camptothecin (CPT), an anticancer drug. Because of the large-scale collection of its roots, the plant has become a threatened species. The present study accomplishes the induction of adventitious roots as a means for the production of CPT as well as for the large-scale propagation of this anticancer drug plant using leaf and internode explants. The biomass yield and CPT content of adventitious roots induced from different explants were compared to roots developed on ex vitro rooted stem cuttings. Adventitious roots were produced on half-strength Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with $10.74{\mu}M$${\alpha}-naphthaleneacetic$ acid and $2.32{\mu}M$ kinetin at mean fresh weights of 0.753, 0.739 and 0.748 g roots from leaf, internode and shoot, respectively. CPT yield from in vitro derived roots after 50, 80 and 120 days of incubation (0.028, 0.06 and 0.1% dry weight, respectively) was not significantly different from those harvested at the same age from ex vitro rooted (0.03, 0.06 and 0.13%, respectively) stem cuttings. CPT from subcultured roots derived from solid (0.08%) medium was lower than from suspension culture medium (0.12%). Subsequent cultures of the adventitious roots showed a stable production of CPT (0.16%). The yield of CPT from 360-day-old plant-derived roots was 0.19%. Elicitation using methyl jasmonate and acetyl salicylic acid exhibited no enhancement in CPT yield. In vitro propagation through direct shoot regeneration was achieved from the adventitious roots upon transfer to MS medium with $8.87{\mu}M$$N^6-benzyladenine$ (BA) and $2.46{\mu}M$ indole-3-butyric acid (IBA) with a mean of 21.2 shoots per culture in 50 days. The shoots upon subculture on medium having the same level of BA and IBA underwent rapid proliferation. The shoots transferred to field conditions after in vitro rooting exhibited 95% survival. Adventitious root induction, from leaf and internode explants, enables the feasible production of CPT as well as the large-scale rapid propagation of this species which can safeguard it from extinction.
1990년부터 1996년에 걸쳐 전국 35개 골프장에서 한지형잔디인 creeping bentgrass, Kentucky bluegrass 그리고 난지형잔디인 zoysiagyass의 잎마름 증상으로부터 Pythium spp. 125균주를 분리 하였고, 이를 동정한 결과 P. aphanidermatum, p. arrhenomanes, P. catenulatum, p. gramlnicola, p. myriotylum, P. oligandrum, P. periplocum, P. rostratum, P. torulosum, P. ultimum Trow var. ultimum 그리고 P. vanterpoolii로 모두 11개 종으로 동정되었다. 본 실험에서 사용한 semi-solid 상태의 'sucrose-asparagine bentgrass leaf culture' 방법을 이용할 경우 Pythium spp.의 동정에 필요한 포자낭, 장란기, 장정기 그리고 난포자의 형태적 특징의 관찰이 용이하였다. 동정된 Pythium spp.는 국내에서는 잔디류에 대하여 처음 보고되는 것이고, 이 중에서 P. arrhenomunes, P. cutenulatum, P. graminioota, P. oligandrum, P. periplocum, P. rostratum, P. torulosum 그리고 P. vanterpoolii는 국내에서 처음 보고되는 미기록종이다. P. myriotylum, P. rostratum, P. torulosum, P. vanterpoolii의 경우는 PCA 배지상에서 특이한 균사생장형을 나타내므로 이를 균 동정에 이용할 수 있었다.
결구배추(Brassica campestris ssp. pekinensis)의 약배양을 통한 반수체의 유기율을 높히고 반수체의 발달과정을 알아보기 위해 본 연구를 수행하였다. 결구배추의 일대잡종 및 순계 의 약을 수정된 B/sb 5/ 배지에 전처리 및 후처리를 하여 액체 및 고체배지에 배양하였다. 접종후 9일부터 13일까지 반수체가 생겼는데 저온처리 효과는 없었으나 고온인 4$0^{\circ}C$ 1시간, 45$^{\circ}C$ 1시간 처리는 반수체 유기율을 높였다. 육성계통간에 따라 유기율이 큰 차이가 있었으며 배지는 큰 차이가 없었다. 후처리 효과는, 35$^{\circ}C$ 1일 처리후 3$0^{\circ}C$ 1일 처리효과가 있었으며 4$0^{\circ}C$ 이상 고온처리는 효과가 없었다. 배양한 약을 단계별로 조직학적으로 관찰한 결과 체세포배 유기는 약내 화분으로부터 유기되는 것을 관찰할 수 있다.
본 연구는 감귤 품종인 '삼보감'과 '병귤'에서 3종류의 싸이토키닌(BA, 2iP, kinetin)과 그들의 농도(0, 0.1, 0.5, 1.0, 2.0mg/L)가 마디배양에 의한 대량 증식에 미치는 영향을 구명하고자 수행되었다. 마디의 절편체는 기내 발아된 두 품종의 유묘에서 얻어졌다. 두 품종을 비교하면 신초의 수는 '병귤'에서보다 '삼보감'에서 더 많이 형성되었다. 본 실험에서 사용된 3종류의 싸이토키닌 중에 고체 MS 기본배지에 첨가된 BA가 신초의 대량 생산에 가장 효과적인 촉진제였으며 그 적정농도는 1.0 mg/L인 것으로 나타났다. 줄기의 신장 뿌리의 형성은 싸이토키닌의 종른에 관계없이 싸이토 키닌의 농도가 증가함에 따라 억제되었다. 삼보감'에서는BA 1.0 mg/L에서 가장 탄은 신초 및 엽수를 형성한 반면 '병귤에서는 어떠한 싸이토키닌의 종류나 농도도 본 실험에서 신초 및 뿌리 등의 형성에 커다란 영향이 없었다.
고체배양을 통해 10종의 균주 중에서 선별된 고활성 균주인 T. versicolor KCTC 16781은 100 mg/L의 6가지 염료(reactive blue 19, reactive blue 49, reactive black 5, acid black 52, reactive orange 16, and acid violet 43)를 15일 이내에 효율적으로 분해하였다. T. versicolor KCTC 16781은 액체배양에서 반응 2-3일 이내에 6가지 염료의 색도를 100% 제거시켰으며, 배양 초기에 빠른 속도로 효소를 생산하여 높은 활성을 보였다. 이로 인해 색도제거 속도가 기존의 연구에 보고된 결과들보다 우수함을 입증하였다. 서로 다른 종류의 염료분해 실험에서, 효소활성이 반응 초기에 작은 차이를 보였지만, 최대 효소활성에 도달한 후의 값이 2.0$\pm$0.5 U/mL의 범위에 들어 염료의 종류에 관계없이 비슷한 범위의 활성을 보이는 것을 확인할 수 있었다. 염료의 색도제거가 완벽하게 이루어진 후에도 효소활성은 감소하지 않았으며, 배양 말기까지 2.0 U/mL 이상의 효소활성을 유지하여 고농도의 염료를 제거할 수 있는 가능성을 보였다.
Sunflower (Helianthus annuus L.) protoplasts were isolated from seven-day-old etiolated hypocotyls of 10 A line and four-week-old fully expanded young leaves of PI 441983 line in vitro seedlings using an enzymatic method. Purified protoplasts were collected by filtration and floatation in sucrose solution. Semi-solid protoplast culture was performed using the L4 regeneration protocol with various culture media and plating densities to achieve the highest efficiencies for protoplast culture of hypocotyl and mesophyll protoplasts of 10 A and PI 441983 lines, respectively. The concentrations in liquid L'4M medium and different plating densities were evaluated in two types of cytokinins, the adenine-type 6-benzyladenine (BA) and the phenylurea-type thidiazuron (TDZ). The highest colony formation was achieved in both sunflower lines when 0.5 mgL-1 BA and 0.5 mgL-1 TDZ were applied with a high plating density (3 × 105 protoplasts mL-1). These conditions led to 38.45% and 39.40% colony formation for hypocotyl protoplasts of the 10 A line and mesophyll protoplasts of the PI 441983 line, respectively. Moreover, many hypocotyl protoplast-derived colonies developed into micro-calli. In addition, superior development of both sunflower protoplasts was observed with all plating densities when BA was used in combination with TDZ. This finding will be applicable to future sunflower hybrid production via somatic hybridization.
This study was conducted to evaluate the degradation of aromatic dyes and the production of ligninolytic enzymes by 10 white rot fungi. The results of this study revealed that Pycnoporus cinnabarinus, Pleurotus pulmonarius, Ganoderma lucidum, Trametes suaveolens, Stereum ostrea and Fomes fomentarius have the ability to efficiently degrade congo red on solid media. However, malachite green inhibited the mycelial growth of these organisms. Therefore, they did not effectively decolorize malachite green on solid media. However, P. cinnabarinus and P. pulmonarius were able to effectively decolorize malachite green on solid media. T. suaveolens and F. rosea decolorized methylene blue more effectively than any of the other fungi evaluated in this study. In liquid culture, G. lucidum, P. cinnabarinus, Naematoloma fasciculare and Pycnoporus coccineus were found to have a greater ability to decolorize congo red. In addition, P. cinnabarinus, G lucidum and T. suaveolens decolorized methylene blue in liquid media more effectively than any of the other organisms evaluated in this study. Only F. fomentarius was able to decolorize malachite green in liquid media, and its ability to do so was limited. To investigate the production of ligninolytic enzymes in media containing aromatic compounds, fungi were cultured in naphthalene supple mented liquid media. P. coccineus, Coriolus versicolor and P. cinnabarinus were found to produce a large amount of laccase when grown in medium that contained napthalene.
Global efforts are focused on achieving carbon neutrality due to the increases in the levels of greenhouse gases. Moreover, the greenhouse gases generated from the disposal of municipal solid waste (MSW) are the primary sources of emissions in South Korea. In this study, we conducted the biological conversion of syngas (CO, H2, and CO2) generated from MSW gasification. The MSW-derived syngas was used as a feed source for cultivating Eubacterium limosum KIST612, and pressurization was employed to enhance gas solubility in culture broth. However, the pH of the medium decreased owing to the pressurization because of the CO2 in the syngas and the cultivation-associated organic acid production. The replacement of conventional HEPES buffer with a phosphate buffer led to an approximately 2.5-fold increase in acetic acid concentration. Furthermore, compared with the control group, the pressurized reactor exhibited a maximum 8.28-fold increase in the CO consumption rate and a 3.8-fold increase in the H2 consumption rate.
본 실험은 기내 배양된 홍경천으로부터 캘러스를 유도하고 가장 잘 자라는 생장조건을 찾기 위해 수행되었다. 실험 결과를 종합해 보면 캘러스의 증식을 위한 배양조건은 최적배지를 조사한 결과,2B$_{5}$배지에서 생장율이 가장 좋았으며, 탄소원으로는 sucrose를 3%로 첨가했을 때 생장율이 가장 높았다. 질소원으로써는 49.6mM KNO$_3$와 2.0mM (NH$_4$)$_2$SO$_4$를 첨가했을 때 생장율이 가장 좋았으며, 인산의 농도는 2.16mM에서 높은 생장율을 보였다. 암배양과 광배양을 비교했을 때 암배양의 경우가 생장율이 높았으며,pH6에서 세포의 생장율이 가장 좋은 조건임을 확인되었다. 기내에서 배양된 캘러스와 자연산 뿌리는 TLC로 분석하여 salidroside를 확인하였으며, HPLC로 salidroside를 정량한 결과, 자연상태 홍경천의 뿌리는 건중량 당 0.17%으로 나타났으며 5% sucrose처리구에서 0.41%의 생산성을 보여, 자연산 홍경천의 뿌리에 비하여 캘러스에서 salidroside의 함량이 높은 것으로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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