MTBE로 오염된 토양에서 생태독성학적 접근 방법으로 3가지 토양 효소의 활성도를 측정해 보았다. MTBE의 잠재적 위험성으로 인한 논란은 계속되고 있으나 토양 오염에 대한 지표로써 토양 효소 활성도의 사용타당성 여부에 대한 실험은 이전에 행해지지 않았다. 따라서 중금속 오염 토양에 대해 좋은 지표로 사용되고 있는 토양 미생물 효소의 활성도를 MTBE에 적용하여 실험해 보았다. 사용한 토양 효소는 Acid Phosphotase, $\beta$-Glucosidase 그리고 Arysulfatase였다. 그러나 실험 결과 MTBE로 오염된 토양의 경우 중금속으로 오염된 토양에 비해 토양 미생물 활성도의 감소가 매우 적었다. 따라서 MTBE의 오염 토양의 경우 본 연구에서 측정된 효소의 활성도는 좋은 지표로 적합하지 않다는 것을 확인했다.
A protease isolated and purified 51 fold from the culture filtrate of a soil bacterium, Bacillus sp. KUN-17, which was appeared to be a monomeric protein with molecular weight of 38, 000 daltons, was suggested to be involved in the serine (-alkaline) protease (E.C 3.4.21.14) since its activity was selectively inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) and required 40$\circ$C and pH 10.5 for optimal condition. The half-life of the enzyme activity was 1 hr at 55$\circ$C, and the activity was maintained even under high concentrations of SDS or urea. The enzyme was indicated to perform random proteolysis from the fact that most of the chromogenic substrates employed were hydrolyzed by the enzyme. The affinity of the enzyme for natural proteins was approximately 10-times higher than ester compounds, and both substrates showed mutual inhibitory effect competitively for the enzyme activity.
Chinese milk vetch (CMV) is a winter legume that is commonly used as cover crop in Korea. Kill date of cover crop for addition into soil affects N content in cover crop and N availability in soil. This study was conducted to evaluate the effect of CMV as green manure cover crop according to kill dates before growing corn without artificial fertilizer. Top of CMV cut three times on 13 April, 27 April, and 11 May were added into soil at a rate of 600 kg per 10a. Sugar content in CMV litter was persistently decreased from mid-April to late-May. The decrease of sugar content might be due to the transformation into starch and/or other storage or structural constituents. The decreased amount of sugars was greater than 12% and the increased amount of starch was less than 0.2%. Concentration of $NH_4^+$ in soil treated by CMV litter cut on May 11 was slightly higher than that in the treatment with early-cut (April 13) CMV, the concentration at 28 and 49 DAT (days after treatment) was higher in the treatment with late-cut CMV litter. Regardless of cut (kill) date of CMV, the phosphatase activity in the treatment of CMV litter was higher compared to the untreated control. Soil dehydrogenase activity was increased steadily by addition of CMV litter implying total microbial activities in the soil were increased. Our results demonstrate that the status of cover crop species at kill date is an important factor influencing soil enzyme activities derived from microorganisms. Therefore, the optimal kill date of cover crop should be examined to improve the efficiency of cover crop as green manure crop regarding the practical sequence in cropping system.
한반도 낙엽활엽수림에서 멧돼지(Sus scrofa coreanus Heude)는 그 수효가 날로 증가하고 있으며 그들의 임상 교란은 광범위하게 일어나고 있다. 본 연구는 멧돼지의 임상을 파헤치는 교란이 토양생태계의 기능에 어떠한 영향을 미치는지 알아보고자 환경부 장기생태연구지소인 점봉산 지역에서 미생물량 C와 토양 효소의 활성 측정을 실시하였다. 멧돼지에 의해 생성된 교란지형은 표층토양과 하층토양이 섞인 흙더미와 파인 구덩이의 노출된 바닥 2종류로 구분하였고, 인근의 교란을 받지 않은 지역을 대조구로 설정하였다. 토양 유기물 함량은 유기물 함량이 높은 표층의 토양과 하층의 토양이 섞이면서 대조구에서 20.22%로 가장 높은 값이 나타났고, 흙더미와 구덩이의 바닥은 각각 16.91%, 15.52%를 나타내었다. 용적밀도는 구덩이 바닥 토양에서 가장 높은 값을 보였다. 미생물량 C와 토양 $CO_2$의 발생은 교란을 받지 않은 대조구에서 가장 높이 나타났으며 이는 토양의 유기물 함량과 양의 상관관계를 나타내었다. 토양의 cellulase와 invertase의 활성은 미생물량 C와 높은 상관관계를 나타내어 유기물의 함량이 토양 효소 활성에 영향을 미침을 나타내었다. 질산환원효소는 구덩이 바닥 토양에서 가장 높은 값을 나타내었고, 용적밀도와 높은 상관관계를 나타내어 토양 공극이 적은 다소 혐기적 조건에서 그 활성이 높게 나타났다. 본 연구의 결과 멧돼지의 파헤치는 교란은 토양의 물리적 특성을 변화시키고, 토양 효소의 활성에 영향을 미쳤다고 판단된다.
The soil of Kwangneung area(Kyeunggi-Do) was inoculated directly into wheat-bran-media and after $3{\sim}4$ days of incubation, a Penicillium species whose cellulase activity was 1011u/g was isolated. With the treatment of mutagenic agents an improved strain(cellulase activity: 1303u/g) was obtained. This strain was screened again by mono-spore isolation method. Finally a strain C8-14 (cellulase activity: 2351u/g) which had lesser spores than the wild strain was obtained.
A greenhouse experiment was conducted for evaluation of ecological effects of transgenic melon plants in the rhizospheric soil in terms of soil properties, enzyme activities and microbial communities. Organic matter content of soil under transgenic melon plants was significantly higher than that of soil with non-transgenic melon plants. Significant variations were observed in organic matter, total P and K in soil cultivation with transgenic melon plants. There were also significant variations in the total numbers of colony forming units of fungi, actinomycetes and bacteria between soils treated with transgenic and non-transgenic melon plants. Transgenic and non-transgenic melon significantly enhanced several enzymes activities including urease, acid phosphatase, alkalin phosphatase, arysulphtase, ${\beta}$ glucosidase, dehydrogenase, protease and catalase. Soil polyphenoloxidase activity of $T_1$ transgenic melon was lower than that of $T_0$ transgenic melon and a non-melon plant during the same period. The first generation transgenic melon plants ($T_0$) showed significantly greater (p<0.05) effect on the activitiy of arylsulfatase, which increased from $2.540{\times}10^6CFU\;g^{-1}$ (control) to $19.860{\times}10^6CFU\;g^{-1}$ ($T_0$). These results clearly indicated that transgenic melon might change microbial communities, enzyme activities and soil chemical properties.
A thermophilic bacterium producing the extracellular cellulase-free xylanase was isolated from soil and has been identified as Bacillus sp. The optimal growth temperature was 50$\circ$C and the optimal pH, 7.0. Under the optimal growth condition, maximal xylanase production was 2.2 units/ml in the flask culture. The enzyme production was induced by xylan and xylose, but was repressed by sucrose or trehalose. The partially purified xylanase was most active at 70$\circ$C. It was found that the enzyme was stable at 65$\circ$C for 10 hours with over 75% of the activity. The enzyme was most active at pH 7.0 and retained 90% of its maximum activity between pH 5.0 and pH 9.0 though Bacillus sp. was not grown on alkaline conditions (>pH 8.0). In addition, the activity of xylanase was over 60% at pH 10.0. At the ambient temperature, the enzyme was stable over a pH range of 5.0 to 9.0 for 10 h, indicating that the enzyme is thermostable and alkalotolerant. The activity of xylanase was completely inhibited by metal ions including Hg$^{2+}$ and Fe$^{2+}$, while EDTA, phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF), $\beta$-mercaptoethanol and SDS didn't affect its activity. The enzyme was also identified to exert no activity on carboxymethylcellulose, laminarin, galactomannan, and soluble starch.
인삼재배지 180지점으로부터 토양을 채취하여 토양산도, 유기물함량 및 유효인산함량을 측정한 결과 재배년수별 유의한 차이는 나타나지 않았다. 채취한 토양의 메탄올추출액으로 상추종자 발아실험을 실시한 결과 $5{\sim}6$년 재배지의 토양에서 종자발아나 유묘생장을 강하게 억제하는 토양추출액을 선발하였다. 선발된 토양 추출액중 발아와 유묘생장을 억제하였던 추출액은 인삼배양세포의 활력을 최대 90%까지 억제하였으나 전해물질의 누출은 증가하지 않았다. 토양추출액으로 세가지 종류의 항산화 효소 활성을 측정한 결과 superoxide dismutase는 거의 영향을 받지 않았으나, 상추유묘의 생체중억제형 토양추출액을 처리한 인삼배양세포의 peroxidase의 활성이 현저하게 억제되었고, catalase의 활성은 발아억제형 및 생체중억제형 토양추출액 모두에서 유의한 억제를 보였다.
토양에서 분리한 Pseudomonadaceae 속 박테리아로부터 pyrocatechase를 추출, 분리 정제하였으며, 이 효소의 특성을 검토한 결과 pyrocatechase는 catechol에 대하여 기질 특이성을 보여줌을 알았다. 효소 활성도의 최적조건은 pH 7∼10 부근과 온도 $35^{\circ}C$임을 알았으며, catechol에 대한 $K_m$값은 $1.9{\times}10^{-6}M$ 로 얻어졌다. 기질 유도체에 의한 효소 저해 실험결과 벤젠 고리의 ortho 위치에 두개의 수산기는 효소-기질간의 결합반응에 참여될 것이라고 추측했다. 기타 SH-잔기와 작용하는 화합물 또는 중금속 이온등의 첨가에 따른 효소 활성도의 저해 효과를 검토 하였으며, 효소 활성부위에 대하여도 검토해 보았다.
The properties of purified intracellular adenosine deaminase (adenosine aminohydrolase, EC 3.5.4.4) of Nocardioides sp. J-326TK isolated from soil have been studied. The enzyme deaminated adenosine and 2`-deoxyadenosine and the respective {TEX}$K_{M}${/TEX} values were 4.0×{TEX}$10^{-4}${/TEX} M and 5.0× {TEX}$10^{-4}${/TEX} M, but the enzyme was not active on 8-bromoadenosine, 6-methylaminopurine riboside, ATP, ADP, 2`-AMP, 3`-AMP, 5`-AMP, dAMP, cAMP, NAD, FAD, NADP and adenine. The enzyme activity was strongly inhibited by the addition of {TEX}$Hg^{2+}${/TEX} and {TEX}$Ag^{+}${/TEX}, {TEX}$Cu^{2+}${/TEX}, {TEX}$Co^{2+}${/TEX} and {TEX}$Mn^{2+}${/TEX} also inhibited the activity but much less extent. The effect of alkyl reagents, metal chelating reagents and certain other compounds on the enzyme activity were also examined. No reagent activated the enzyme. On the contrary, the enzyme reaction was slightly inhibited by o-phenanthroline and 6-benzyladenosine.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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