• Molecules and Cells
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• 제41권6호
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• pp.591-602
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• 2018

Gastric cancer is the fifth most common type of malignancy worldwide, and the survival rate of patients with advanced-stage gastric cancer is low, even after receiving chemotherapy. Here, we validated neurotensin receptor 1 (NTSR1) as a potential therapeutic target in gastric cancer. We compared NTSR1 expression levels in sixty different gastric cancer-tissue samples and cells, as well as in other cancer cells (lung, breast, pancreatic, and colon), by assessing NTSR1 expression via semi-quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction, immunocytochemistry and western blot. Following neurotensin (NT) treatment, we analyzed the expression and activity of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and further determined the effects on cell migration and invasion via wound-healing and transwell assays. Our results revealed that NTSR1 mRNA levels were higher in gastric cancer tissues than non-cancerous tissues. Both of NTSR1 mRNA levels and expression were higher in gastric cancer cell lines relative to levels observed in other cancer-cell lines. Moreover, NT treatment induced MMP-9 expression and activity in all cancer cell lines, which was significantly decreased following treatment with the NTSR1 antagonist SR48692 or small-interfering RNA targeting NTSR1. Furthermore, NT-mediated metastases was confirmed by observing epithelial-mesenchymal transition markers SNAIL and E-cadherin in gastric cancer cells. NT-mediated invasion and migration of gastric cancer cells were reduced by NTSR1 depletion through the Erk signaling. These findings strongly suggested that NTR1 constitutes a potential therapeutic target for the inhibition of gastric cancer invasion and metastasis.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제22권4호
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• pp.457-465
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• 2018

The expression of BCL-2 interacting cell death suppressor (BIS), an anti-stress or anti-apoptotic protein, has been shown to be regulated at the transcriptional level by heat shock factor 1 (HSF1) upon various stresses. Recently, HSF1 was also shown to bind to BIS, but the significance of these protein-protein interactions on HSF1 activity has not been fully defined. In the present study, we observed that complete depletion of BIS using a CRISPR/Cas9 system in A549 non-small cell lung cancer did not affect the induction of heat shock protein (HSP) 70 and HSP27 mRNAs under various stress conditions such as heat shock, proteotoxic stress, and oxidative stress. The lack of a functional association of BIS with HSF1 activity was also demonstrated by transient downregulation of BIS by siRNA in A549 and U87 glioblastoma cells. Endogenous BIS mRNA levels were significantly suppressed in BIS knockout (KO) A549 cells compared to BIS wild type (WT) A549 cells at the constitutive and inducible levels. The promoter activities of BIS and HSP70 as well as the degradation rate of BIS mRNA were not influenced by depletion of BIS. In addition, the expression levels of the mutant BIS construct, in which 14 bp were deleted as in BIS-KO A549 cells, were not different from those of the WT BIS construct, indicating that mRNA stability was not the mechanism for autoregulation of BIS. Our results suggested that BIS was not required for HSF1 activity, but was required for its own expression, which involved an HSF1-independent pathway.

• 한국식품영양과학회지
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• 제44권6호
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• pp.816-822
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• 2015

본 연구는 감마선 조사에 의해 유도된 apigenin 화합물(radiolysis products)이 인체유래 다양한 암세포에 처리했을 때의 항암 효과를 알아보기 위하여 실험을 진행하였다. Apigenin을 50 kGy로 조사할 경우 유도 화합물이 생성됨을 확인할 수 있었으며, radiolysis 화합물을 분획하여 인체유래 섬유육종세포(HS68)에 대한 독성을 평가한 결과 독성이 없는 것으로 나타났다. 다양한 암세포에 항암 활성을 평가한 결과 폐암(H1975)세포주의 경우 다른 암세포에 비해 효과가 높은 것으로 나타났다. Annexin V/PI 염색을 통해 감마선 조사된 apigenin 처리구에서 apoptosis의 발현을 확인할 수 있었으며, ROS(reactive oxygen species) 평가 결과에서도 농도 의존적으로 발현을 확인할 수 있었다. 본 연구는 방사선 구조 변환 연구를 통해 방사선을 이용한 새로운 신약 개발 가능성을 제시하는 기초자료로 활용될 수 있을 것으로 판단하였다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제44권6호
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• pp.1353-1365
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• 1997

연구배경 : 종양괴사인자(tumor necrosis factor ; TNF)는 다양한 생물학적 기능을 가지고 있는 바, 그 중 생체 외에서 증명된 뚜렷한 항암 효과로 말미암아 최근 항암 유전자요법의 중요한 대상으로 관심을 모으고 있다. 현재 유전자 이입의 기술적 문제로 생체 외에서 암세포에 유전자 이입을 시행한 후 이를 다시 환자의 생체내로 이식하는 방법이 연구의 주종을 이루고 있다. 그러나 저자들의 과거의 연구를 포함한 여러 연구에서 TNF가 이입된 암세포는 TNF에 대해 내성을 보이는 이에는 새로이 방어 단백질을 합성하는 것이 관여할 것이라는 시사가 있었다. 이 획득내성의 기전을 밝히는 것이 종양생물학의 이해를 넓히고 보다 효과적인 항암 유전자요법을 개발하기위한 매우 중요한 과제로 생각된다. 저자들은 TNF 유전자 이입에 따른 암세포의 TNF에 대한 획득내성에, 일부 세포에서 TNF에 의해 발현이 유도된다는 것이 밝혀진, 항산화효소의 하나인 MnSOD의 발현의 변화가 관여하는 지를 규명하고자 본 실험을 수행하였다. 방 법 : TNF에 다양한 감수성을 보이는 인체 및 생쥐 기원의 4가지 암세포주(WEHI164, NCI-H2058, A549, ME180)에 TNF-$\alpha$ 유전자를 retroviral 이용하여 이입하고 TNF의 발현을 시도하여 PCR, ELISA, MTT assay로 확인하였고, TNF 유전자가 이입된 세포(WEHI164-TNF, NCI-H2058-TNF, A549-TNF, ME180-TNF)는 TNF에 내성을 보이는지 역시 MTT assay로 검증하였다. TNF 유전자 이입 전후의 MnSOD mRNA 발현의 차이는 Northern blot analysis를 통하여 비교하였다. 결 과 : 1) TNF-$\alpha$ 유천자 이입 및 발현 확인 PCR을 시행한 결과 TNF 유전자가 이입된 각 세포 790 base pair 표기의 진한 DNA band를 보인 반면 모세포주는 보이지 않아서 retroviral vector를 이용한 유전자 이입이 DNA 수준에서 이루어 있었다. 그리고 TNF 유전자가 이입된 세포의 배양상층액에서 TNF양을 ELISA로 측정한 결과 TNF를 세포에 따라 1.91ng/24hr/$10^6\;cells$에서 3.91ng/24hr/$10^6\;cells$ 생산함을 알 수 있었다. 2) TNF 유전자 이입 전후, 암세포의 TNF에 대한 감수성 비교 TNF 농도 100ng/ml에서 WEHI164-TNF와 ME180-TNF 세포는 통계적으로 유의하게 (p<0.01) TNF에 대한 내성을 획득함을 알 수 있었다. 3) TNF 유전자 이입 전후외 MnSOD mRNA 발현양상 TNF에 감수성을 보이는 WEHl164와 ME180세포는 TNF 유전자 이입 후에 MnSOD mRNA 발현이 증가되지 않았으며, TNF에 내성을 보이는 NCIH2058과 A549 세포는 TNF 유전자 이입 후에 MnSOD mRNA 발현의 증가가 관찰되었으나 이는 모세포에 외부에서 TNF를 주었을 때도 관찰되었다. 결 론 : 세포주에 TNF 유전자를 이입하여 TNF를 발현하게 하였을때 세포 자신은 TNF에 대해 내성을 하게 되는데, 이 획득내성은 MnSOD 발현 능력의 향상에 의한 것은 아닐 것으로 판단되나 각 세포주의 자연 상태의 TNF에 대한 감수성 여부는 MnSOD의 발현 차이가 관련될 것으로 생각된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제42권3호
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• pp.314-321
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• 1995

연구배경: 종양세포는 세포의 비정상적인 분열성장이 증가되므로, 세포내의 DNA가 양적인 변화를 일으킨다. DNA의 양적변화인 DNA ploidy 여부는 종양의 생물학적 특성을 반영하므로, 소세포 폐임에서 DNA ploidy의 변화와 생존기간을 비교하였다. 방법: 1990년 1월부터 1991년 12월까지 원광의대 부속병원에서 원발성 소세포 폐암으로 조직병리학적 진단을 받고나서, 2회 이상의 화학요법을 실시받은 후, 최소 2년이상의 후향적 추적에 의해 사망이 확인된 42례를 대상으로 하였다. DNA ploidy 분석방법은 paraffin에 보관된 병리조직을 이용하여 유식세포 분석법에 의한 DNA histogram으로 분석하였다. DNA ploidy 여부와 평균 생존기간을 비교하였으며, 다시 TNM 병기, PS scale, 화학요법 실시 횟수 등으로 세분하여 DNA ploidy 여부와 생존기간과의 관계를 재비교하였다. 결과: 1) 전 군의 평균 생존기간은 190(${\pm}156$)일이었으며, TNM 병기, PS scale이 진행할 수록 생존기간은 단축되었다. 2) 전 군에서 DNA aneuploidy의 발현 비율은 60%(26/42)였으며, 암의 진행정도와는 관계없었다. 3) 전 군에서의 평균 생존기간은 diploidy군이 272(${\pm}197$)일로서 aneuploidy 군의 138(${\pm}90$)일보다 유의하게 연장되었다(p<0.001). 4) DNA ploidy 여부에 의한 생존기간의 차이에 대한 TNM 병기, PS scale의 영향은 없었다. 결론: 소세포 폐암 환자에서 DNA aneuploidy 군은 diploidy 군보다 유의하게 생존기간이 짧았으며, DNA ploidy 여부는 TNM 병기, PS scale과는 무관한 예후추정 인자로서 임상적 이용아 가능하다고 생각된다.

• IMMUNE NETWORK
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• 제20권6호
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• pp.48.1-48.11
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• 2020

Hyperprogressive disease (HPD) is a distinct pattern of progression characterized by acceleration of tumor growth after treatment with anti-PD-1/PD-L1 Abs. However, the immunological characteristics have not been fully elucidated in patients with HPD. We prospectively recruited patients with metastatic non-small cell lung cancer treated with anti-PD-1/PD-L1 Abs between April 2015 and April 2018, and collected peripheral blood before treatment and 7-days post-treatment. HPD was defined as ≥2-fold increase in both tumor growth kinetics and tumor growth rate between pre-treatment and post-treatment. Peripheral blood mononuclear cells were analyzed by multi-color flow cytometry to phenotype the immune cells. Of 115 patients, 19 (16.5%) developed HPD, 52 experienced durable clinical benefit (DCB; partial response or stable disease ≥6 months), and 44 experienced non-hyperprogressive progression (NHPD). Patients with HPD had significantly lower progression-free survival (p<0.001) and overall survival (p<0.001). When peripheral blood immune cells were examined, the pre-treatment frequency of CD39⁺ cells among CD8⁺ T cells was significantly higher in patients with HPD compared to those with NHPD, although it showed borderline significance to predict HPD. Other parameters regarding regulatory T cells or myeloid derived suppressor cells did not significantly differ among patient groups. Our findings suggest high pre-treatment frequency of CD39⁺CD8⁺ T cells might be a characteristic of HPD. Further investigations in a larger cohort are needed to confirm our results and better delineate the immune landscape of HPD.

• Natural Product Sciences
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• 제24권4호
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• pp.219-224
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• 2018

During the screening for cytotoxic compounds from plants grown in Korea, Betula platyphylla (BP) showed potent activity against the adenocarcinomic human alveolar basal epithelial A549 cell line. To identify the cytotoxic components from BP, the $CH_2Cl_2$ fraction with the most significant cytotoxic effect was applied to the column chromatographies. Seven compounds were isolated: lupeol (1), betulinic acid (2), (-)-rhododendrol (3), platyphyllenone (4), platyphyllone (5), (-)-centrolobol (6), and oleanolic acid (7). Among them, three diarylheptanoids (4 - 6) exhibited cytotoxicity toward A549 cells. Especially, $50{\mu}M$ of 4 reduced A549 cell viability to $18.93{\pm}0.82%$ compared to control ($100.00{\pm}21.48%$). Lactate dehydrogenase (LDH) leakage and intracellular reactive oxygen species (ROS) production were also induced by $50{\mu}M$ 4. This is the first report on the cytotoxic effect of BP-derived diarylheptanoids 4-6 against A549 cells. The compound 4 may be useful for the development of early hit compounds for non-small cell lung carcinoma, but the consideration about selectivity of 4 is required since 4 also showed the cytotoxicity in the human normal lung epithelial BEAS-2B cell line.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제14권10호
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• pp.5911-5913
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• 2013

Cyclamen coum is a traditional medicinal plant in the Turkey. Its anticancer properties and whether cyclamen extract induces any cytotoxicity in solid cancer cell lines have not been thoroughly investigated previously. Therefore we examined cytotoxic effects on cervical cells; HeLa and non small cell lung cancer cell, H1299, lines; Cyclamen extract induced cellular death of both HeLa and H1299 cells in a dose dependent manner. We also analyzed the capacity of cyclamen extract to induce apoptosis by the TUNEL method. Here, for the first time we report that the extract of Cyclamen coum, an endemic plant for Turkey, Bulgaria, Georgia and the Middle East can induce cytotoxicity via apoptosis in HeLa and H1299 cells. These results imply that cyclamen extract can be further analyzed to potentially find novel anticancer compounds.

• 대한임상검사과학회지
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• 제51권2호
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• pp.221-234
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• 2019

암은 유전적, 대사질환적 그리고 감염성 질환 등에 의해 유발되는 생명을 위협하는 심각한 질환으로서, 세포의 성장이 정상적으로 통제되지 않으며, 공격적인 형태로 주변의 조직이나 장기로 침범하는 경향을 보이는 생명을 심각하게 위협하는 질병이다. 지난 수십 년 간, 인류의 건강을 위협하는 암을 정복하기 위한 지속적인 노력이 있었고, 암 신생 기전 및 항암제 연구가 항암제 내성에 대한 연구와 함께 다양한 연구주제로 다루어져 왔다. Hinokitiol (${\beta}$-thujaplicin)은 측백나무과 편백속에 속하는 나무에서 분비되는 terpenoid 물질로서, 항염증작용, 항균작용 및 몇몇 암세포 주에서 autophagy를 통한 항암효과가 있는 것으로 잘 알려져 있다. 본 연구에서는, hinokitiol이 세포 영양상태의 변화유무에 관계없이, transcription factor EB (TFEB)의 핵으로의 이동을 촉진한다는 것을 확인하였다. TFEB의 핵으로의 이동은 autophagy 및 lysosome관련 유전자의 발현을 촉진시키고, 세포질 내에 증가된 autosome과 lysosomal puncta의 관찰을 가능하게 하였다. Hinokitiol를 HCC827세포에 처리한 경우에서, 세포 내 autophagy의 증가와 더불어, mitochondria의 hyper-fragmentation과 mitochondria의 authophagic degradation (mitophagy)가 함께 증가되는 것이 관찰되었다. Hinokitiol은 자궁경부암 세포주인 HeLa세포와 비소세포 폐암 세포주인 HCC827에서 암세포 특이 독성을 나타내었다. 더욱이, TFEB 과발현을 통해 autophagy를 인위적으로 증가시킨 HeLa 세포에서 hinokitiol에 대한 세포독성은 더욱 강화된 것으로 나타났다. 이러한 결과들을 통해, hinokitiol은 TFEB의 핵으로의 이동을 촉발시키는 강력한 autophagy inducer임을 확인할 수 있었다. 본 연구에서 처음으로 확인된 hinokitiol에 의한 TFEB의 활성화 및 비소세포성 암세포에서 항암효과의 상승작용은 다양한 항암제 저항성 세포들에 대한 새로운 치료법 및 대체요법 개발과 관련된 의미 있는 결과로 향후, 분자수준의 작용기작에 대한 추가적인 연구가 수행되어야 할 것으로 사료된다.

• 생명과학회지
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• 제18권4호
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• pp.580-584
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• 2008

본 연구에서는 손상된 DNA를 수복하는 중요한 효소로 알려진 $O^6-methylguanine-DNA$ methyltransferase (MGMT)발현의 의미를 비소세포폐암종에서 면역조직화학 염색법으로 알아보고자 하였다. 동아대학교 의료원에서 2001년부터 2004년까지 외과적으로 적출한 폐암종 조직 중 비소세포암종으로 진단된 74예를 연구대상으로 하였다. 면역염색 결과, MGMT 발현은 총 74예 중 49예(66.2%)에서 양성을 보였으며, 25예(33.8%)에서 단백 소실을 보였다. 조직학적 유형에 따른 결과를 살펴보면, 편평세포암종은 8/39예(20.5%)에서 단백 소실이 보였고, 샘암종은 17/35예(48.6%)에서 단백 소실이 관찰되어 통계적으로 유의한 차이가 관찰되었다(p=0.021). 하지만 나이, 성별, 흡연유무, 종양 크기, T 병기 및 림프절 전이에 따른 유의한 차이는 관찰되지 않았다(p>0.05). MGMT 단백 발현 소실은 특히 promoter 메틸화와 연관되어 종양에서 관찰된다고 알려져 있으므로, 향후 연구에서는 비소세포폐암종의 MGMT 단백 소실에 대한 임상적 의의를 밝히기 위하여 promoter 메틸화 연구가 추가적으로 수행되어져야 될 것으로 사료된다.