Hernandez, Alejandra;Velasquez, Olga;Leonardi, Felice;Soto, Carlos;Rodriguez, Alexander;Lizaraso, Lina;Mosquera, Angela;Bohorquez, Jorge;Coronado, Alejandra;Espejo, Angela;Sierra, Rocio;Sanchez, Oscar F.;Almeciga-Diaz, Carlos J.;Barrera, Luis A.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권5호
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pp.689-698
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2013
The production and characterization of an active recombinant N-acetylgalactosamine-6-sulfate sulfatase (GALNS) in Escherichia coli BL21(DE3) has been previously reported. In this study, the effect of the signal peptide (SP), inducer concentration, process scale, and operational mode (batch and semi-continuous) on GALNS production were evaluated. When native SP was presented, higher enzyme activity levels were observed in both soluble and inclusion bodies fractions, and its removal had a significant impact on enzyme activation. At shake scale, the optimal IPTG concentrations were 0.5 and 1.5 mM for the strains with and without SP, respectively, whereas at bench scale, the highest enzyme activities were observed with 1.5 mM IPTG for both strains. Noteworthy, enzyme activity in the culture media was only detected when SP was presented and the culture was carried out under semi-continuous mode. We showed for the first time that the mechanism that in prokaryotes recognizes the SP to mediate sulfatase activation can also recognize a eukaryotic SP, favoring the activation of the enzyme, and could also favor the secretion of the recombinant protein. These results offer significant information for scaling-up the production of human sulfatases in E. coli.
Rodrigues, Maria Elisa;Costa, Ana Rita;Fernandes, Pedro;Henriques, Mariana;Cunnah, Philip;Melton, David W.;Azeredo, Joana;Oliveira, Rosario
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권9호
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pp.1308-1321
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2013
The emergence of microcarrier technology has brought a renewed interest in anchorage-dependent cell culture for high-yield processes. Well-known in vaccine production, microcarrier culture also has potential for application in other fields. In this work, two types of microcarriers were evaluated for small-scale monoclonal antibody (mAb) production by CHO-K1 cells. Cultures (5 ml) of microporous Cytodex 3 and macroporous CultiSpher-S carriers were performed in vented conical tubes and subsequently scaled-up (20 ml) to shake-flasks, testing combinations of different culture conditions (cell concentration, microcarrier concentration, rocking methodology, rocking speed, and initial culture volume). Culture performance was evaluated by considering the mAb production and cell growth at the phases of initial adhesion and proliferation. The best culture performances were obtained with Cytodex 3, regarding cell proliferation (average $1.85{\pm}0.11{\times}10^6$ cells/ml against $0.60{\pm}0.08{\times}10^6$ cells/ml for CultiSpher-S), mAb production ($2.04{\pm}0.41{\mu}g/ml$ against $0.99{\pm}0.35{\mu}g/ml$ for CultiSpher-S), and culture longevity (30 days against 10-15 days for CultiSpher-S), probably due to the collagen-coated dextran matrix that potentiates adhesion and prevents detachment. The culture conditions of greater influence were rocking mechanism (Cytodex 3, pulse followed by continuous) and initial cell concentration (CultiSpher-S, $4{\times}10^5$ cells/ml). Microcarriers proved to be a viable and favorable alternative to standard adherent and suspended cultures for mAb production by CHO-K1 cells, with simple operation, easy scale-up, and significantly higher levels of mAb production. However, variations of microcarrier culture performance in different vessels reiterate the need for optimization at each step of the scale-up process.
차가버섯의 균사생육에 적합한 배지로는 BMYA 배지, MCM 배지로 조사되었으며 이 결과 MYA를 공시균주의 기본배지로 사용하였다. 배양환경 조사로 균사생육에 적합한 온도는 $25^{\circ}C$, 초기 적정 pH는 $6.0{\sim}7.0$으로 나타났다. 영양원 선발로 탄소원은 2%의 농도에서 Dextrose를 사용하였을 때 균사 생장 및 밀도가 높게 나타났다. 질소원은 0.2%의 농도에서 Yeast extract를 사용하였을 때 균사생장 및 밀도가 높게 나타났다. 무기염류 조사에서는 여러 가지 무기염류 사이에 큰 차이를 보이지는 않았지만 0.1%의 농도에서 $K_2HPO_4$를 사용하였을 때 약간의 높은 균사 생장을 보이는 것을 확인할 수 있었다. 차가버섯의 액체 접종원 배양환경 조사에서 균사절편 6개 절편을 접종하는 것이 삼각플라스크 배양에 적당한 것으로 나타났다. 또한 균사의 형태가 pellet 형태로 생장이 되었다. 배양기간에 따른 균사 생육조사에서 삼각플라스크 액체배양 시 300ml의 진탕배양용 Shake flask에 균사 절편 6개를 접종하여 22일간 배양하였을 때 높은 균체 건중량을 보였다. 현미배지를 이용한 균사체 형성에 관한 조사에서는 현미배지의 수분함량에 따른 조사를 하여 본 결과 현미 200 g와 수분을 200 ml로 하였을 때 균핵형성이 가장 좋게 나타났다. 4개의 수종을 이용한 균사배양 실험 결과, 참나무, 자작나무, 은사시나무, 오리나무의 4종 모두 균사 생장이 잘 되는 것을 확인할 수 있었다.
'백종문 녹취록' 사건은 '언론 자유와 민주주의에 대한 중대하고 심각한 도전'이다. 그럼에도 불구하고 이 사건은 주류언론이 보도하지도 않고, MBC의 관리 감독기관인 방송문화진흥회나 방송통신위원회 뿐만 아니라 국회에서도 사실파악이나 진상규명도 되지 않은 채 잊혀가고 있다. 본 연구는 그 원인이 무엇인지를 규명하기 위해 언론사의 담당 기자, PD, 원로 언론인, 방송규제기관의 전 현직 위원들, 그리고 언론계 전문가들을 대상으로 심층인터뷰와 문헌 연구를 진행하였다. 그 결과 연구자는 첫째, 주류언론의 무보도 현상의 원인으로 1) 주류언론의 정파성, 2) 공영방송사의 권력 감시 기능의 무력화 등이 주요원인임을 확인할 수 있었다. 둘째, 방송통신위원회와 방송문화진흥회, 국회에서 여당 측 다수파나 여당의원들이 진영논리로 야당 측 위원들이나 의원들이 제기한 백종문 본부장의 '불법 해고', '불법 편성 제작 개입', '부당 채용', '부당 거래' 등의 의혹에 대한 사실 파악 진상규명 요청을 다수결의 원칙에 의해 기각시켜왔기 때문이었다. 셋째, 공영방송사 조직 내 대항 세력이 붕괴되었기 때문이다. 결론적으로 공영방송사와 방송규제기관의 지배구조에 대한 법적 제도적 개편 작업이 시급하다.
가상현실은 감각기관(시각, 청각, 촉각)에 전달하는 정보를 조작하여 실제적인 가상의 3차원환경을 사용자에게 제공한다. 최근에는 가상현실은 아바타라는 객체의 등장으로 단순히 사용자에게 가상의 공간을 제공하는 것을 넘어서 가상의 공간에서 타인을 대변하는 아바타와 여러 상호작용을 통해서 또 다른 하나의 가상의 사회를 제공할 수 있는 도구로 자리 잡고 있다. 실제 사회에서의 사회적인 관계에서는 타인과 직접적인 상호작용이 많이 발생하게 되는데, 기존의 연구들은 아바타와 실제적인 상호작용을 하는 환경이 아니었다. 따라서, 본 연구에서는 가상의 아바타와 실제로 상호작용을 할 때 아바타를 어떻게 인지하는 지를 알아보기 위해서 가상환경에서 아바타를 만나서 악수를 청하였을 때 아바타가 악수를 받아들이거나 거절하는 환경을 구현하여 뇌 기능영상 연구를 수행하였다. 아바타의 행동이 어떠한 느낌을 주었는지를 알아본 설문지 결과에서 악수를 받아이들인 아바타에 대해서는 긍정적이고, 적절한 행동을 한다고 받아들인 반면, 악수를 거부한 아바타 에서는 나에게 부정적인 감정을 가기고 있고 거부하고 있다고 피험자가 인식한 것으로 나타났다. 뇌 기능영상 분석 결과 상대 아바타가 악수를 받아준 경우와 거절한 경우 공통적으로 the primary visual area, the visual association area, the SMA, the premotor area과 the cerebellum등의 영역에서 뇌 활성화가 나타났다. 설문결과와 fMRI 분석 결과 이는 피험자가 아바타를 나와 구별되는 사회적인 객체로 인지하였고, 아바타의 동작도 사회적 의미가 있는 동작으로 받아 들였다는 것을 의미한다. 다르게 말해 가상의 아바타가 행동을 통해서 사회적 context 뿐만 아니라 감정도 전달이 가능하다는 것을 의미한다. 본 연구는 fMRI 환경에서 실제로 상호작용이 가능한 환경에서 아바타의 행동에 대한 사용자의 인지를 알아보았다는 것에 의의가 있다고 하겠다.
바크는 심비디움 분화의 배지로서 국내에서 가장 많이 이용되는 배지지만, 분화 수출 시 제거 과정 중에서 쉽게 떨어지지 않아 뿌리가 손상되어 상품성이 낮아지게 된다. 본 연구에서는 식물체로부터 쉽게 제거되며 바크를 대체할 수 있는 배지를 선발하고 이때 식물의 생장에 필요한 시비량을 알아보고자 하였다. 심비디움 'Honey Hot'와 'Desert Look'의 묘를 바크, 코코칩, 그리고 피트모스 배지에 식재하였고, 완효성 비료 2, 4, 6g을 처리하였다. 심비디움 묘들은 일반적으로 2년 동안 재배하고 3년째 되는 해에 개화시켜 상품으로 출하하게 되므로, 1년차와 2년차에 식물의 생장 특성들을 조사하였으며, 배지의 특성과 잎의 무기이온 함량을 최종적으로 조사하였다. 1년차에는, 'Desert Look'의 생육이 피트모스 처리구에서 바크보다 더 향상되었다. 'Honey Hot'의 생육 측정값들은 바크 처리구에서 가장 높은 값을 보였다. 2년차에는, 두 품종 모두 피트모스 처리구에서 생육이 향상되었다. 코코칩 처리구들은 바크와 피트모스에 비해 생육이 안 좋았다. 모든 배지 처리구에서 시비량에 따른 유의성은 보이지 않았다. 피트모스는 바크에 비해 CEC가 높아 더 많은 양분들을 보유하므로 식물의 생육을 향상시켰다. 특히, 엽내의 높은 K과 Ca 함량은 식물 생육에 좋은 것으로 판단되었다. 결과적으로, 심비디움 묘 생산에서 피트모스가 바크를 대체할 수 있는 것으로 판단되었으며, 이때 배지가 너무 과습하지 않도록 주의가 요구된다.
Laskar, Arghadeep;Zhong, Jianxia;Mo, Y.L.;Hsu, Thomas T.C.
Interaction and multiscale mechanics
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제2권1호
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pp.69-89
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2009
Reinforced and prestressed concrete (RC and PC) thin walls are crucial to the safety and serviceability of structures subjected to shear. The shear strengths of elements in walls depend strongly on the softening of concrete struts in the principal compression direction due to the principal tension in the perpendicular direction. The past three decades have seen a rapid development of knowledge in shear of reinforced concrete structures. Various rational models have been proposed that are based on the smeared-crack concept and can satisfy Navier's three principles of mechanics of materials (i.e., stress equilibrium, strain compatibility and constitutive laws). The Cyclic Softened Membrane Model (CSMM) is one such rational model developed at the University of Houston, which is being efficiently used to predict the behavior of RC/PC structures critical in shear. CSMM for RC has already been implemented into finite element framework of OpenSees (Fenves 2005) to come up with a finite element program called Simulation of Reinforced Concrete Structures (SRCS) (Zhong 2005, Mo et al. 2008). CSMM for PC is being currently implemented into SRCS to make the program applicable to reinforced as well as prestressed concrete. The generalized program is called Simulation of Concrete Structures (SCS). In this paper, the CSMM for RC/PC in material scale is first introduced. Basically, the constitutive relationships of the materials, including uniaxial constitutive relationship of concrete, uniaxial constitutive relationships of reinforcements embedded in concrete and constitutive relationship of concrete in shear, are determined by testing RC/PC full-scale panels in a Universal Panel Tester available at the University of Houston. The formulation in element scale is then derived, including equilibrium and compatibility equations, relationship between biaxial strains and uniaxial strains, material stiffness matrix and RC plane stress element. Finally the formulated results with RC/PC plane stress elements are implemented in structure scale into a finite element program based on the framework of OpenSees to predict the structural behavior of RC/PC thin-walled structures subjected to earthquake-type loading. The accuracy of the multiscale modeling technique is validated by comparing the simulated responses of RC shear walls subjected to reversed cyclic loading and shake table excitations with test data. The response of a post tensioned precast column under reversed cyclic loads has also been simulated to check the accuracy of SCS which is currently under development. This multiscale modeling technique greatly improves the simulation capability of RC thin-walled structures available to researchers and engineers.
저조도 환경에서 카메라로 영상을 획득하기 위해 일반적으로 가시광 플래시를 사용하거나 장노출 기법을 사용하게 된다. 그러나 가시광 플래시를 사용할 때 플래시 광에 의한 색 왜곡이나 적목 현상, 눈부심에 의한 거부감을 발생시킨다. 또한 장노출을 사용하게 되면 물체의 움직임에 의한 흔들림 현상이 발생하게 된다. 따라서 최근에는 이러한 단점을 극복하고, 저조도 환경에서 고화질의 영상을 획득하기 위하여 멀티 스팩트럴 플래시(Multi-spectral flash image)를 이용하여 영상을 획득하는 방법이 소개되었다. 이 방법은 가시광과 UV/IR스펙트럼의 다섯 채널을 이용하여 가시광영상의 색 정보와 UV/IR 스팩트럼 영상의 세부정보를 최적화하여 영상을 획득하는 방법이다. 하지만, 픽셀 기반의 최적화 과정에 있어 색 왜곡과 다른 잡음을 발생시키게 된다. 따라서 본 논문에서는 이러한 색 왜곡과 잡음을 개선하기 위해 영역 기반의 가중치 맵을 최적화 방법에 적용하여 색 왜곡을 개선하는 알고리즘을 제안한다. 먼저, 영상에 대하여 Canny 에지 검출 방법을 사용하여 영상의 윤곽을 검출하였다. 이를 가중치 맵으로 최적화방법에 적용함으로, 세부 영역에 대하여 UV/IR 플래시 영상의 정보에 가중치를 부여하고, 평탄한 영역에 대하여 가시광 영상의 색 정보를 가중치를 부여하여 색 왜곡을 개선하였다. 제안한 방법을 평가하기 위하여 실험을 통하여 제안한 방법과 이전방법을 비교하였고, 객관적 평가와 주관적 평가 모두 제안한 방법이 우수한 성능을 나타내었다.
수문학적 모델에 대한 연구보고에 의하면 유출량 모의 측면에서 집중형 모형은 분포형 모형보다 적용성이 좋다고 볼 수 있다. 분포형모형은 컴퓨터 계산환경 및 현장 실험이 허용하는 범위내에서 지형인자를 단순화하여야만 하기 때문에 양적인 오차를 가진다. 하지만 공간적 지형인자를 고려한다는 측면에서 분포형모형은 지표수 흐름을 분석하는데 더욱 효과적이다. 본 연구의 목적은 흐름의 특성을 결정짓는 최소한의 지형인자(흐름경사, 방향, 누적도)를 고려한 저류함수를 이용하여, 격자기반의 공간적 강우-유출모형을 개발하는 것이며, 이러한 작업의 과정은 개인용 컴퓨터에서 이루어진다 모형의 원형은 비교적 작은 유역인 횡성다목적댐을 대상으로 개발하여, 유역면적이 비교적 넓은 합천댐 유역을 대상으로 적용하였다. 댐지짐에 대한 유역유출 모의결과 Nash J.E. 와 Sutcliffe J.V.가 제안한 효율계수는 약 0.9를 상회하였으나, 유역내 상류 수위관측소에 대한 효율계수는 양호하지 못하였는데, 이러한 이유는 대상댐 유역에 대하여 산정된 수위-유량 곡선식의 고수위부분이 과추정 되었다고 판단된다. 본 연구결과 유역의 공간적으로 분포된 유역특성을 고려한 강우-유출모형은 GIS를 이용하여 손쉽게 구현할 수 있었다. 향후 강우레이더와 같이 공간적으로 분포된 강우량의 실시간 취득이 범용화되면, 본 연구의 분포형 모형을 직접 적용할 수 있을 것으로 판단된다.
조개느타리 Pleurotus pulmonarius을 액내 배양하여 항암 성분인 단백성 다당체를 얻었다. 이 성분의 항암 효과는 20 mg/kg/day 투여군에서 51.0 %의 저지율을 나타내었다. 또한 단백성 다당체는 DEAE-Sephadex 이온 교환수지와 Sephadex G-200을 이용하여 정제하였고 여기서 Fraction $C_1$인 항암성분을 얻었다. 이 항암성분은 다당체와 단백질로 구성되어 있었으며 항암 효과는 10 mg/kg/day 투여군에서 81.8 %의 저지율을 보였다. 이런 항암작용의 기전을 알기 위해 복강내에 Fraction $C_1$을 투여하고 이에 대한 복강세포의 증가를 관찰한 결과 면역세포 중 macrophage의 증가가 두드러겼으며 이는 soluble starch와 비교해 볼 때 훨씬 많은 macrophage 증가 효과가 있음을 증명하였다. 이 성분을 pulmonaran이라 명명하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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