An indirect double antibody enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for rapid detection of a new virus isolated from abnormally swimming salmonid fish, RVS (Retrovirus of salmonid). Results using brain tissue homogenates, and infected cell cultures are described. The sensitivity of the methods is $10^{2.6}$$TCID_{50}/100{\mu}l$ of the examined cell culture fluid. The specificity was confirmed by the ELISA inhibition test and virological examinations. Viral antigen could be detected in artificially infected fish tissue homogenates. The assay will allow the diagnosis of RVS-infected fish within a day.
Park, Seon Young;Han, Jee Eun;Kwon, Hyemin;Park, Se Chang;Kim, Ji Hyung
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.30
no.10
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pp.1443-1457
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2020
The emergence and spread of antimicrobial resistance in pathogenic bacteria of fish and shellfish have caused serious concerns in the aquaculture industry, owing to the potential health risks to humans and animals. Among these bacteria, Aeromonas salmonicida, which is one of the most important primary pathogens in salmonids, is responsible for significant economic losses in the global aquaculture industry, especially in salmonid farming because of its severe infectivity and acquisition of antimicrobial resistance. Therefore, interest in the use of alternative approaches to prevent and control A. salmonicida infections has increased in recent years, and several applications of bacteriophages (phages) have provided promising results. For several decades, A. salmonicida and phages infecting this fish pathogen have been thoroughly investigated in various research areas including aquaculture. The general overview of phage usage to control bacterial diseases in aquaculture, including the general advantages of this strategy, has been clearly described in previous reviews. Therefore, this review specifically focuses on providing insights into the phages infecting A. salmonicida, from basic research to biotechnological application in aquaculture, as well as recent advances in the study of A. salmonicida.
Water samples collected from marine fish culture system in Korea were compared for their capability to reduce the infectivity titers of HRV (rhabdovirus olivaceus), FBV(flounder birnavirus) and RVS(retrovirus of salmonid). In addition, interaction between viruses and microorganisms present in the rearing seawater was examined. The titer of HRV and RVS were reduced at $15^{\circ}C$ to less than detectable limits within 3 to 5 days using untreated samples of seawater. No reduction of infectivity was noted in bacteria-free water treated by filtration or autoclaving. Bacteria (Pseudomonas and Vibrio sp.) isolated from the water collected from a flounder culture system showed the inactivation activity of HRV.
Four strains of water mold, ChS-E0511, RaT-E0511, RaT-A0512 and MaS-F0512, were isolated from salmonid fish and/or their eggs taken from culture farms in Yangyang, Milyang and Pyeongchang, Korea in 2005. Descriptions of their morphological aspects, the results of the phylogenetic analysis conducted, and the sequence of the small sub-unit 18S rRNAs of the isolates confirmed that they all belong to the species Saprolegnia parasitica. Only one species, ChS-E0511, which was isolated from fertilized eggs of the chum salmon, was classified as part of the S. parasiticaGroup 1 according to its oogonia and gemmae production. The chemotherapeutic effects of various chemicals on the ChS-E0511 strain were assessed from the inhibitory effects of growth in GY media and the relative ratio of eyed eggs to fertilized eggs of the rainbow trout. Malchite green, a prohibited substance in food animals, was better than others, such as the Opuntia ficus-indicaextract, 2-bronopol, and sodium chloride. These results suggest that the fungi isolated from salmonids and/or their eggs identified as S. parasitica were composed of more than two groups. These isolates will be useful in an intensive evaluation of therapeutic agents.
A specific and sensitive sandwich enzyme-immunoassay (EIA) using Avidin-Biotin complex was developed for the measurement of GTH II levels in pituitary content and pituitary cell culture medium of the rainbow trout-(Oncorhpchus mykiss). Biotin-salmon GTH II rabbit IgG (sefondary antibody) wai purified by a protein A sepharose affinity chromatography column and that was biotinylated by using Biotin-N-hydroxysuccinimide ofter (BNHS). Non-biotin salmon GTH II rabbit IgG (first antibody) was obtained only through a protein A sepharose affinity chromatography column. The assay was performed by the so-called 'sandwich' method using a microtiter plate, A dose-response curve was obtained between $0.12 to 125 ng/ml$ of salmon GTH II. The displacement curves for pituitary extraction and pituitary cell culture medium of testosterone-treated rainbow trout were Parallel to the standard curie. The intra-assay and inter-assay coefficients of variation (CV) were $8.2{\%} (N=5) and 12.5{\%} (N=6)$, respectively, This assay system was used to measure the amount of GTH II that accumulated in the culture medium of dispersed pituitary cells in testosterone-treated immature rainbow trout, The accumulation was increased with the amount or salmon gonadotropin-releasing hormone. GTH II values determined by the present method were well correlated with those determined by radioimmunoassay. As a result, this assay system was found to be suitable for the measurement of GTH II for pituitary extraction and pituitary culture medium in many salmonid fishes.
In March 1997, a new rhabdovirus was isolated from moribund cultured Japanese flounder Paralichthys olivaceus in sea water tank and cage culture systems in Kyung-Nam and Chun-Nam province, Korea. At temperature $15^{\circ}C$ the virus replicated and induced cytopathic effects (CPE), which progressed to eventual cytolysis, in susceptible cell lines, including RTG-2 and EPC. The CHES-214 cell line was refractory. Virus particles were bullet-shaped and measured $70nm{\times}100$ to 150 nm in size. The isolate was sensitive to pH 3, to diethyl ether, and to heat ($50^{\circ}C$ 5 min, $60^{\circ}C$ 1 min). Viral replication was not inhibited by $10^{-4}$ M 5-iododeoxyuridine. Virus infectivity was reduced by anti-HRV (8401-H) rabbit serum, but can not reduced by antisera against infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), chum salmon reovirus (CSV), retrovirus of salmonid (RVS) and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). HRV virus antigen was detected by fluorescent antibody test (FAT) in the cytoplasm of infected EPC cell. Purified isolates virions were composed of: polymerase (L), glycoprotein (G), nucleoprotein (N) and 2 matrix proteins (M1 and M2). Based upon their relative mobilities, the estimated molecular weights of the proteins were: L, 160 kDa; G, 55 kDa; N, 45 kDa; M1, 26 kDa; and M2, 22 kDa.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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