The production of ethanol by microbial fermentation as an alternative energy source has been of interest because of increasing oil price. Saccharomyces cerevisiae and Zymomonas mobilis are two of the most widely used ethanol producers. In this study, characteristics of ethanol fermentation by Saccharomyces cerevisiae CHY1077 and Zymomonas mobilis CHZ2501 was compared. Brown rice, naked barley, and cassava were selected as representatives of the starch-based raw materials commercially available for ethanol production. The volumetric ethanol productivities by Saccharomyces cerevisiae from brown rice, naked barley and cassava were $0.68g/l{\cdot}h$, $1.03g/l{\cdot}h$ and $1.28g/l{\cdot}h$ respectively. But for the Zymomonas mobilis, $2.19g/l{\cdot}h$(brown rice), $2.60g/l{\cdot}h$(naked barley) and $3.12g/l{\cdot}h$(cassava) were obtained. Zymomonas mobilis was more efficient strain for ethanol production than S. cerevisiae.
A flocculating sugar tolerant yeast strain was isolated from fermenting Takju. This strain was identified as Saccharomyces cerevisiae CA-1 according to the Lodder's yeast taxonomic studies. The isolated yeast could grow in 50% glucose and in 7% ethanol in the YPD medium. It's optimal growth temperature, initial pH, shaking rate and initial glucose concentration for ethanol fermentation showed 35$\circ$C, 4.5, 150 rpm, 15%, respectively. Ethanol concentration was 63 g/l in 20% glucose after 24 hours, fermentation yield was 0.49 g-ethanol/g-glucose in 10% glucose after 24 hours and ethanol productivity was 3.09 g/l$\cdot $h in 10% glucose after 12 hours in batch fermentation. Repeated batch fermentation was possible for over 50 days and ethanol yield, ethanol productivity and substrate conversion rate were 0.39-0.50 g/g, 1.63-2.08 g/l$\cdot $h and more than 99%, respectively during these periods.
Carboxypeptidase Z(CPZ) cDNA of Absidia zychae was experssed in Saccharomyces cerevisiae. The expressed CPZ(YCPZ) was secreted about 30 mg/l into the medium and has a little higher molecular weight than the wild type CPZ in SDS-PAGE. By the result of N-terminal amino acid sequencing, YCPZ has additional 15 amino acids residues in N-terminus of CPZ. But YCPZ shows no difference with CPZ in enzyme activity and substrate specificity. For the identification of processing mechanism of YCPZ, 36-Arg was changed to 36-Thr by site specific mutagenesis. Mutant YCPZ does not processed at 36-Thr. It was, therefore, concluded that the YCPZ was processed by KEX2. According to endo F treatment, high amount of carbohydrate was N-glycosylated in YCPZ.
Intracellular purine nucleoside phosphorylase (PNP) from Saccharomyces cerevisiae was partially purified using ammonium sulfate fractionation, heat treatment, a DEAE-Sephadex A-50 anion exchange chromatography and a Sephadex G-100 gel filtration chromatography. The enzyme was purified 20 fold with 3% recovery. The stability of enzyme was kept by addition of inosine and dithiothreitol. The pH optimum was found to be from 6.3 to 7.3 PNP was sensitive to 10mM of $Hg^{2+}$ , $Cu^{2+}$ , and was inactivated completely by 2 mM of p-chloromercuribenzoate and 5,5'-dithiobis (2-nitrobenzoate). The enzyme was capable of catalyzing the phosphorolysis of inosine, deoxyinosine, guanosine, deoxyguanosine and adenosine.
The cyclodextrin glucanotransferase(CGTase) gene of Bacillus macerans was expressed in Saccharomyces cerevisiae and the recombinant CGTase was partially purified from the yeast culture supernatant. The optimal pH and temperature of the CGTase were found to be 6.0 and 5$0^{\circ}C$, respectively. The pH and temperature stabilities of the recombinant enzyme were significantly enhanced and the half life at 55$^{\circ}C$ was about 60 hr. When the recombinant CGTase was reacted with 5% soluble starch, the conversion yield of total cyclodextrin (CD) from starch was estimated to be 41% at 48 hr, whereas the wild type enzyme showed the yield of 12%. This improvement of conversion yield and thermal stability of CGTase may be useful for the development of low-cost CD production process.
We studied a continuous production of ethanol by Saccharomyces cerevisiae in a hollow fiber membrane bioreactor which consisted of 50 polypropylene fibers and 3 teflon fibers. The produced $CO_2$ was removed through the teflon fibers and excess biomass was removed through the shell side. We obtained the cell and ethanol concentrations of 266g/L and 205g/L based on the shell-side volume. A nitrogen deficient medium resulted in too low an ethanol productivity to be applied to a practical process.
Effects of Ac pulse at low voltage on Saccharomyces cerevisiae were studied. The treatment of yeast suspensions contained 0.2m NaCl with 500mA for 350 sec at $40^{\circ}C$ was shown about 50% of lethality, whereas in the treatment of the same suspensions with 250mA for 250 sec at the temperature ($10^{\circ}C$) corresponding to about 10% of lethality, growth was completely inhibited instead of lethality. The effect of growth inhibition was due to occurrence of auxotrophic strains under experimental conditions. Detection of auxotrophic yeasts was done tentatively with the difference of the number of viable yeast cells between direct counting by methylene blue staining and plate-count on yeast morphology agar.
A suitable simple model tested by experiments is required to address complex biological reactions like esterase synthesis by Saccharomyces cerevisiae. Such an approach might be the answer to a proper bioprocessing strategy. In this regard, a logistic model for esterase production from Saccharomyces cerevisiae has been developed, which predicts well the cell mass, the carbon source (glucose) consumption, and the esterase activity. The accuracy of the model has been statistically examined by using the Student's t-test. The parameter sensitivity analysis showed that all five parameters (${\mu}_m$, $K_a$, $X_m$, $Y_{x/s}$, and $Y_{p/x}$) have significant influence on the predicted values of esterase activity.
Saccharomyces cerevisiae KNU5377 is a constitutively thermotolerant, fermentative strain at high temperatures over 4$0^{\circ}C$. The exposure to 0.5 M NaCl caused S. cerevisiae KNU5377 to be lost its constitutive thermotolerance. Furthermore, the NaCl adaptation beyond 0.3 M during the overnight culture forced the strain-specific fermentation ability of S. cerevisiae KNU5377 to be disappeared. However, these phenomena did not occur in the reference, Saccharomyces cerevisiae ATCC24858. As a result, this adaptation led both strains to show the closely similar thermotolerance level and alcohol fermentation ability, implying the NaCl adaptation eliminated its strain-specific characteristics of S. cerevisiae KNU5377 Therefore it indicated that the superior intrinsic characteristics of S. cerevisiae KNU5377 must be related to the NaCl adaptation. On the other hand, the heat adaptation elevated alcohol productivity for both strains, but surprisingly did it for KNU5377 at the rate of two times higher than the reference's one; this suggests that KNU5377 possesses more efficient system enough to cause the difference. Consequently, these characteristics of S. cerevisiae KNU5377 must be interesting targets for further study to understand on how KNU5377 could acquire the constitutive thermotolerance and the outstanding fermentative capacity at high temperatures.
The HIS5 gene of Saccharomyces cerevisiae host was encoded histidinol phosphate aminotransferase(E.C.: 2.6. 1.9). The HIS5 gene of Saccharomyces cerevisiae was cloned on plasmid pSH 530. This gene mighted be transcripted from a promoter of yeast gene both in E. coli and yeast hosts. We have determined the nucleotide sequence of the yeast HIS5 gene and its 5' and 3' flanking sequences. There are no large differences between the relative levels of HIS5 mRNA molecules with different 5' termini in represent and derepressed cell. In the DNA sequence upstream from the 5' termini of HIS5 mRNA we have found live closely related copies of a 9 base pair sequence. The sequence is also repeated in the 5' noncoding regions of HIS1, HIS3, HIS4, HIS5 and TRP5. Closely related sequence are not found flanking repeat sequence plays a role in the regulation of amino acid biosynthetic genes subject to the general amino acid control.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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