참깨의 뿌리를 바이오촉매로 이용한 뿌리 배양을 통하여 HMF를 생산하기 위하여 뿌리의 생장과 HMF의 합성에 적합한 뿌리배양 조건을 탐색하였으며, 이를 위하여 NAA(naphthalene acetic acid), silver nitrate의 적정 농도조건 및 적정 배양온도 조건에 대한 실험이 수행되었다. 뿌리의 생장이 가장 높은 처리구는 $30^{\circ}C$에서 NAA의 농도가 1.0 mg/l로 첨가된 처리구에서 측정되었으며, 평균적으로 볼 때 두 배양 온도($25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$)간에는 뿌리의 생장차이는 측정되지 않았다. NAA가 첨가되지 않은 처리에서는 두 배양온도 모두에서 참깨의 뿌리생장이 전혀 생기지 않은 반면에, NAA가 첨가된 배양에서는 두 배양온도에서 뿌리의 생장이 확인되었다. 그리고 0.5 mg/l의 질산은이 첨가된 처리구에서 참깨의 뿌리생장이 가장 높게 측정되었으며, $25^{\circ}C$에서 배양된 처리구 보다는 $30^{\circ}C$에서 배양된 뿌리의 생장이 약간 높게 나타났고, 질산은의 농도가 0.5 mg/l 이상의 높은 농도에서는 뿌리의 생장이 오히려 감소되는 경향이 있었다. 그리고 HMF의 합성의 경우 가장 높게 측정된 처리구는 배양온도 $25^{\circ}C$에서 NAA 0.5 mg/l이 첨가된 처리구에서 측정된 반면에 NAA 무처리구에서는 HMF 합성이 측정되지 않았다. 질산은이 첨가된 처리구에서는 HMF의 합성이 오히려 억제되는 경향을 보여준 반면에 질산은의 무처리구에서 HMF의 합성이 가장 높은 결과가 나타났다. 질산은의 농도가 0.5, 1.0 및 1,5 mg/l로 처리된 구에서는 질산은 무처리구에 비해서 약 8-10% 정도의 HMF 합성이 감소되는 경향이 나타났으며, 두 배양 온도($25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 배양) 간에도 HMF의 합성에는 차이가 보이지 않았다.
Transformed hairy roots of Scopolia parviflora, producing tropane alkaloids and native to Korea, were obtained following infection of rhizome segments with Agrobacterium rhizogenes A4. Each root tip induced from inoculum sites excised and cultured in MS agar or liquid medium. About seventy of hairy root clones were established. Among them, several fast growing hairy root clones were examined for alkaliod content. Two dimensional TLC analysis showed that the tropane alkaloid pattern of hairy root was more complicated than that in the rhizome of mother plant. On the other hand, some hairy root clones did not produce scopolamine and hyoscyamine. In HPLC analysis, some hairy root clones yield higher levels of scopolamine and hyoscyamine than those of mother plant rhizome which used for infection. Scopolamine and hyoscyamine were identified by comparison of their retention times and of their spectra data with those of authentic compounds.
생물반응기의 형태에 따른 인삼부정근의 생장과 ginsen-side의 생산능력에 대하여 조사한 결과, 원형의 상부와 하부에 5 cm의 bubble column을 가진 bulb type bubble bioreactor (BU)에서 건물중은 41.92 g으로 가장 많이 증가하였으며, cylindric tube bioreactor (CT)에서 건물중이 38.55g으로 가장 낮게 나타났다. 이들 두 생물반응기의 초기 kLa 값은 BU 생물반응기에서 6.98 h$^{-1}$로 가장 높게 측정되었고, 반대로 bubble column이 없는 CT 생물반응기에서 5.25 h$^{-1}$으로 가장 낮게 측정되었다. 그러나 이와 같은 초기 kLa값의 차이는 부정근내의 이차대사산물인 ginsenoside의 함량에는 영향을 주지 않는 것으로 나타났다. 또한 BU 생물반응기에서 bubble column의 길이를 기존의 5 cm에서 10 cm로 연장시켰을 때, 초기 kLa값이 6.52 h$^{-1}$에서 7.80 h$^{-1}$로 증가하면서 인삼부정근의 생장을 42.13 g에서 50.30 g으로 약 16% 증가시킨 것으로 나타났다.
To study the effects of Ramulus et Uncus Uncariae (REUU) on oxygen free radical-mediated damage by hydrogen peroxide $(H_{2}O_{2})$ on cultured spinal sensory neurons, in vitro assays such as MTT assay, NR assay, neurofilament enzymeimmuno assay (EIA), sulforhodamine B (SRB) assay, assay for lactate dehydrogenase (LDH) activity and assay for lipid peroxidation were used in cultured spinal dorsal root ganglion neurons derived from mice, Spinal dorsal root ganglion neurons were cultured in media containing various concentrations of $H_{2}O_{2}$ for 5 hours, after which the neurotoxic effect of $H_{2}O_{2}$ was measured by in vitro assay. The protective effect of the herb extract, Ramulus et Uncus Uncariae (REUU) against H2O2-induced neurotoxicity was also examined. The results are as follows. 1. In NR assay and MTT assay, $H_{2}O_{2}$ significantly decreased the cell viability of cultured mouse spinal dorsal root ganglion neurons according to exposure concentration in these cultures. An additional time course study was done on these cultures. 2. Cultured spinal dorsal root ganglion neurons which were exposed to various concentrations of $H_{2}O_{2}$ showed a quantitative decrease of neuronal cells by EIA and of total protein by sulforhodamine B (SRB) assay, while they showed an increase of both lipid peroxidation and LDH activity. 3. The effect of Ramulus et Uncus Uncariae (REUU) on $H_{2}O_{2}$ induced neurotoxicity showed a quantitative increase in both neurofilament and total protein, but showed a decrease of lipid peroxidation and LDH activity. These results suggest that $H_{2}O_{2}$ has a neurotoxic effect on cultured spinal dorsal root ganglion neurons from mice and that the herb extract, Ramulus et Uncus Uncariae (REUU), was very effective in protecting $H_{2}O_{2}$ induced neurotoxicity by decreasing lipid peroxidation and LDH activity.
Agrobacterium rhizogenes에 의하여 형질전환된 인삼 모상근을 배양하여 빛, 탄소원의 종류, 여러 가지 호르몬의 첨가가 모상근의 생장과 수용성 색소인 anthocyanin의 생산에 미치는 영향을 조사하였으며, 배양된 모상근으로부터 색소를 추출, 분리하여 anthocyanin을 동정하였다. 모상근을 광조건에서 배양하면 배양 5일 후부터 색소를 합성하였으며 배양 30일에 0.36mg/g(fr wt)의 색소를 생산하였다. 모상근의 배양시 총질소농도 60mM, 탄소원으로 sucrose가 모상근의 생장과 색소의 생산에 적합하였으며, 0.5mg/L IAA를 첨가하였을 때 모상근이 가장 빠르게 생장하였고 1 mg/L IAA를 첨가하였을 때 가장 높은 색소함량(0.41mg/g, fr wt)을 나타내었다. 그러나 2,4-D의 경우 모상근의 생장과 색소합성이 억제되는 경향을 보여주었다. 아울러 anthocyanin 색소를 분리, 동정한 결과 pelargonidin-glucoside로 확인되었다.
접종 초기 root segmentation 은 뿌리의 생장 속도를 감소시키고 그 생산성을 저하시키기도 하지만 F/D ratio를 감소시켜 뿌리가 자랄 수 있는 배지 내 공간을 제공하기 때문에 고농도 배양에 유리할 뿐 아니라, 생산성이 높은 secondary root의 비율을 증가시키기 때문에 decursinol angelate 의 생산량을 중대시킨다. 참당귀 뿌리배양을 위한 plant growth regulator의 최적 조건으로 secondary root의 생장성 측면이나 decursinol angelate 의 생산성 측면에서 4 mg/L 이상의 IBA 첨가가 요구됨을 확인하였다.
We researched effects of growth on initial inoculum size, liquid volume, and medium feeding rate etc. Cell suspension inoculated at low cell concentrations showed a typical growth reduction, whereas root cultures showed an improvement in growth. In this paper, Hairy roots showed high growth rate at 0.4 % inoculum size and 100 mL liquid volume in 250 mL flask cultures.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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