Background: Cancer is a major threat to the public health whether in developed or in developing countries. As the most common primary malignant tumor, the morbidity and mortality rate of lung cancer continues to rise in recent ten years worldwide. Chemotherapy is one of the main methods in the treatment of lung cancer, but this is hampered by chemotherapy drug resistance, especially MDR. As a component of the 60S large ribosomal subunit, ribosomal protein L39-L gene was reported to be expressed specifically in the human testis and human cancer samples of various tissue origins. Materials and Methods: Total RNA of cultured drug-resistant and susceptible A549 cells was isolated, and real time quantitative RT-PCR were used to indicate the transcribe difference between amycin resistant and susceptible strain of A549 cells. Viability assay were used to show the amycin resistance difference in RPL39-L transfected A549 cell line than control vector and null-transfected A549 cell line. Results: The ribosomal protein L39-L transcription level was 8.2 times higher in drug-resistant human lung cancer A549 cell line than in susceptible A549 cell line by quantitative RT-PCR analysis. The ribosomal protein L39-L transfected cells showed enhanced drug resistance compared to plasmid vector-transfected or null-transfected cells as determined by methyl tritiated thymidine (3H-TdR) incorporation. Conclusions and Implications for Practice: The ribosomal protein L39-L gene may have effects on the drug resistance mechanism of lung cancer A549 cells.
Ribosomal protein (rp) S6 is the substrate of ribosomal protein S6K (S6 kinase) and is involved in protein synthesis by mTOR/S6K/S6 signaling pathway. Some S6 cDNA have been cloned in mammals in recent years but has not been identified in the goat. To facilitate such studies, we cloned the cDNA encoding Cashmere goat (Capra hircus) S6 (GenBank accession GU131122) and then detected mRNA expression in seven tissues by real time PCR and protein expression in testis tissue by immunohistochemisty. Sequence analysis indicated that the obtained goat S6 was a 808 bp product, including a 3' untranslated region of 58 bp and an open reading frame of 750 bp which predicted a protein of 249 amino acids. The predicted amino acid sequence was highly homologous to cattle, human, mouse and rat S6. Expression analysis indicated S6 mRNA was expressed extensively in detected tissues and S6 protein was expressed in testis tissue.
Brucella (B.) canis is mainly transmitted by direct or indirect contact with aborted fetuses and placenta. It's also known to be able to infect human, which likely results in providing veterinarians and companion animal owners for infectious risk. To develop diagnostic ELISA, we cloned and expressed rp1L gene of B. canis, which encodes the ribosomal protein L7/L12. Using this purified recombinant protein, indirect-ELISA (iELISA) was evaluated using 78 positive and 44 negative sera. The sensitivity and the specificity of iELISA were 94% and 89%, respectively. The results indicated that indirect-ELISA using recombinant ribosomal protein L7/L12 may be useful for diagnosis of canine brucellosis.
원생동물인 Tetrahymena thermophila의 17S-rDNA구조 및 hygromycin 내성 기구에 대한 연구의 일부로서 hygromycin 내성변이주 hmr3의 17S-rDNA를 대장균의 vector pBR 322에 cloning하였다. 우선 rDNA는 hot phenol-cresol 용액으로 추출하여 제한효소 Hind III 처리로서 약 2.2kbp의 17S-rDNA를 agarose 전기영동상에서 분리하였다. 이를 pBR 322에 cloning하여 wild type의 17S-rDNA probe와 colony hybridization시켜 선별하였다. 그중 5-19 균주의 recombinant plasmid로부터 17S-rDNA 의 전사 orientation위치가 pBR322의 tetracyline내성 유전자 쪽으로 삽입되어 있는 것을 확인하였다.
Microbispora 속에 소속된 미생물 9주(표준 미생물 3종과 토양 분리주 6주를 포함) 에 대하여 16S ribosomal RNA 유전자 염기서열이 결정되었다. 이들은 Streptosporangiaceae과의 대표균주들의 염기서열과 비교하여 Microbispora 속에 소속된 미생물들의 진화적 유연 관계가 조사되었다. 계통분석 결과 Microbispora 속의 모든 표준 종들은 일관성 있게 단계통 단위를 형성하였으며 Streptosporangiaceae과의 다른 속들과 잘 구분되었다. 토양 분리주들은 모두 Microbispora속에 소속된 반면 비공식적으로 기술되어 온 Microbispora griseoalba IMSNU$ 22049^{T}$ (=KCTC $9314^{T}$ )는 Nocardia 속의 미생물들과 가까운 유연 관계를 보여 주었다.
벼가 유아기에 냉해$(15^{\circ})C$로 인하여 생장이 정지될 때 RNA와 RNase활성도를 비교 연구하여 아래와 같은 결과를 얻었다. 1. 냉해 초기에는 RNA 함량과 RNase 활성도가 동시에 증가하고 3일 후에는 감소하였으나 5일 후에는 RNA 함량은 계속 감소하는 반면 RNase 활성도는 다시 증가 하였다. 2. 이러한 RNA의 변화는 ribosomal RNA의 변화에 기인함을 확인하였다. 3. RNase는 RNA의 합성 기능도 가지고 있는 것으로 사료되며 이 기능은 soluble RNA보다 ribosomal RNA와 관계가 있는 것으로 추측된다.
In Saccharomyces cerevisiae, ribosomal protein L7, one of the ~46 ribosomal proteins of the 60S subunit, is encoded by paralogous RPL7A and RPL7B genes. The amino acid sequence identity between RPl7a and RPl7b is 97 percent; they differ by only 5 amino acid residues. Interestingly, despite the high sequence homology, Rpl7b is detected in both the cytoplasm and the nucleolus, whereas Rpl7a is detected exclusively in the cytoplasm. A site-directed mutagenesis experiment revealed that the change in the amino acid sequence of Rpl7b does not influence its subcellular localization. In addition, introns of RPL7A and RPL7B did not affect the subcellular localization of Rpl7a and Rpl7b. Remarkably, Rpl7b was detected exclusively in the cytoplasm in rpl7a knockout mutant, and overexpression of Rpl7a resulted in its accumulation in the nucleolus, indicating that the subcellular localization of Rpl7a and Rpl7b is influenced by the intracellular level of Rpl7a. Rpl7b showed a wide range of localization patterns, from exclusively cytoplasmic to exclusively nucleolar, in knockout mutants for some rRNA-processing factors, nuclear pore proteins, and large ribosomal subunit assembly factors. Rpl7a, however, was detected exclusively in the cytoplasm in these mutants. Taken together, these results suggest that although Rpl7a and Rpl7b are paralogous and functionally replaceable with each other, their precise physiological roles may not be identical.
HTLV-I 의 gag-pro 유전자 중첩영역내에서 -1 ribosomal frameshifting 이 일어나는 자리를 결정하기 위하여 gag-pro 중첩영역의 일부를 SP6 promoter 를 가진 백터내에 클로닝하였다. 그 결과 닭의 prelysozyme 에서 유래한 5개의 아미노산을 코드하는 합성유전자와 141 bp 로된 gag-pro 중첩영역의 뒤에 Straphylococcus aureus 의 protein A 유전자단편이 연결된 hybrid 유전자를 보유한 플라스미드를 제작하였다. 이 DNA 클론을 주형으로 SP6 RNA polymerase 의 작용에 의해 한종류의 mRNA 를 다량으로 합성하였다. Invitro 에서 합성된 mRNA 로 무세포계에서 단백질을 합성한 결과 21 kDal 의 단백질이 생성되었고 IgG-Sepharose 를 사용한 affinity chromatography 로 합성된 단백질을 순수하게 정제할 수 있었다. 본연구에서 설명한 in vitro 실험계는 Gag-Pro transframe 단백질의 신속한 정제 및 일차구조의 결정에 유익하게 사용될 것으로 보이며 이와 같은 실험의 결과 mRNA 에서 ribosomal frameshifting 이 일어나는 정확한 site 를 결정할 수 있을 뿐 같은 실험의 결과 mRNA 에서 ribosomal frameshifting 이 일어나는 정확한 site 를 결정할 수 있을 뿐 아니가 pro 유전자의 발현에 필요한 frameshift 를 유도하는 tRNA 의 동정도 가능하게 될 것이다.
소의 주혈원충인 Reileria sp.의 small subunit ribosomal RMh (SSU rRNA) 유전자의 염 기서 열분 석을 위해 한국의 전북 장수로부터 분리하여 계대보관 중인 실험실 보관주 (KLS)와 김제 분리주 (KCB), 그리고 일본의 Shintoku 분리주 (JHS)를 실험에 사용하였다. 이들 분리주로 부터 원충을 회수 한 후 유전자를 추출하여 중합효소연쇄반응에 의 해 1.8 kb의 SSU rRNA 유전자를 증폭시 킬 수 있었으며, 증폭된 유전자를 이용하여 클론을 제작하고. 이들 클론으로 부터 플라스미드를 추출하여 유전자 염기서열분석을 실시하였다. 각 ReTheileria 분리주의 SSU rRNA유전자의 염기서열분석은 forma터와 reverse양쪽 다중복하여 실시하였으며 연속적인 primer를 이용하였다. 그 결과 한국의 소로부터 분리 한 Theue4n sp. (KLS. KCB)의 SSU rRNA유전자 염 기서 열 (Type A로 명명하였슴)은 일본 분리주와 동 일하였으며, 이 Type A를 GenBank로부터 유전자 검색을 해본 결과 Kenya의 Marula 분리주인 Reixerin buffeli의 SSU rRNA유전자 염기서열과 일치 하였다.
A cDNA clone coding for ribosomal protein 46 (rp46) which is a component of 60S ribosomal large subunit has been identified from Drosophila melanogaster. A cDNA clone encoding S. cerevisiae rp46 was used as a probe to screen a Drosophila larvae cDNA library. The DNA sequence analysis revealed that the cDNA coding for Drosophils rp46 contains a complete reading frame of 153 nucleotides coding for 51 amino acids. The deduced amino acid sequence showed 71-75% homology with those of other eukaryotic organisms. Northern blot analysis showed that about 1-kb rp46 transcripts are abundant throughout fly development. Whole mount embryonic mRNA in situ hybridization also showed no preferential distribution of the transcripts to any specific region. The chromosomal in situ hybridization revealed that the identified gene is localized at position 60C on the right arm of the second polytene chromosome with a possibility of single copy.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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