EPS producing bacteria were enumerated in ginseng root system (rhizosphere soil, rhizoplane, inside of root). EPS producing bacterial density of rhizosphere soil, rhizoplane and inside of root were distributed $9.0{\times}10^6$ CFU/g, $7.0{\times}10^6$ CFU/g, and $1.4{\times}10^3$ CFU/g, respectively. Phylogenetic analysis of the 24 EPS producing isolates based on the 16S rRNA gene sequences, EPS producing isolates from rhizosphere soil (RS) belong to genus Arthrobacter (6 strains) and Rhizobium (1 strain). EPS producing bacteria from rhizoplane (RP) were Arthrobacter (6 strains), Rhodococcus (1 strain) and Pseudomonas (1 strain). EPS producing bacteria from inside of root (IR) were categorized into Rhzobium (6 strains), Bacillus (1 strain), Rhodococcus (1 strain), and Pseudomonas (1 strain). Phylogenetic analysis indicated that Arthrobacter may be a member of representative EPS producing bacteria from ginseng rhizosphere soil and rhizoplane, and Rhizobium is typical EPS producing isolates from inside of ginseng root. The yield of EPS was 10.0 and 4.9 g/L by Rhizobium sp. 1NP2 (KACC 17637) and Arthrobacter sp. 5MP1 (KACC 17636). The purified EPS were analyzed by Bio-LC and glucose, galactose, mannose and glucosamine were detected. The major EPS sugar of these strains was glucose (72.7-84.9%).
Mass culturing of two beneficial organisms used as biofertilizers for crops would reduce the risks in production and minimize the capital involved and this demands appropriate media that supports both organism and also selection of organisms that are not antagonistic to each other. A study was initiated to culture a nitrogen fixer (Rhizobium) and phosphate solubilizer (Bacillus megaterium) in a single medium and to study their growth patterns and shelf life in carrier. The growth of Rhizobium and Bacillus megaterium was assessed in different media and a slight modification in the traditional yeast extract mannitol media promoted the growth of both the organisms. The growth of the individual organisms in the modified medium was assessed by estimating the population at regular intervals and compared to their original medium. Maximum population of Rhizobium and phosphobacteria was at 60 hr when the phosphiobacteria inoculation of later was after 48 hr of Rhizobium inoculation. The shelf life of the individual inoculants in the inoculant containing both the organism in a sterile carrier base revealed no significant differences compared to individual organisms inoculated in a sterilized carrier. The population of both organisms in carrier based mixed inoculant remained at $10^8$ cells till 90 days.
A series of green house experiment was conducted to find but the effect of fertilizer application and inoculation of rhizobium on the changes of amide-N, ureide-N and $NH_4-N$ concentration in stem and root exudates of soybean plant growth. The results obtained were summarized as follows ; 1. Five strains of indigenous Rhizobium japonicum-nitrogen fixing activity($C_2H_2$-reducing activity) was more than 6.4 to 20.1 nmole/hr/tube-were identified from 37 soil samples in 22 areas of farmers field throughout country. 2. These identified 5 strains of rhizobium were obtained high nitrate reductase but low ammonium and nitrite oxidase activities. Among 5 strains of rhizobium the Rhizobium japonicum RjK-134 was applied for this green house experiment. 3. Dry matter yield was increased by the combination of inoculation of Rhizobium japonicum RjK-134 with no fertilizer and without nitrogen fertilizer application. However, dry matter yield was decreased with application of N and NPK with inoculation of rhizobium. 4. The concentrations of amide-N and ureide-N were increased in xylem sap than that of root exudate and higher concentration was obtained ar 30 days after planting than flowering stage (45 days after planting). 5. The combination of NPK application with inoculation of Rhrizobium japonicum RjK-134 enhanced the increase of amide-N and ureide-N concentration in xylem sap and root exudate. 6. High ammonium-N concentration in xylem sap and root exudate were obtained in combination with without-fertilizer under no inoculation of rhizobium and N and NPK application with inoculation of rhizobium.
The insecticides, Dithane-M45 and copper sulfate, were introduced in this experiments to elucidate their effects on the nodulation of soybean plant(Glycine max Meer) by Rhizobium japonicum. The nodulation activity was inhibited in accordance with increase of their concentration.
Five strains of the fast-growing endosymbionts were isolated from the nodules of Lotus eorniculatus var. japonicus inhabited in Taejeon. From morphological and physiOlogical characteristics and nodulation test, the isolated strains were identified as Rhizobium loti. Compared to the control plant, both Lotus cornieulatus var. japonieus and Lotus corniculatus seedlings inoculated with the isolated strains. grew normally due to effective root nodule. The reisolated endosymbiont from the induced root nodule was confirmed identical to those of the first isolates by investigating antibiotic resistance and morphological characteristics. Three strains among the isolates. R. loti TUS I. TUS5 and TUS6 produced a ca1cof1uorbinding exopolysaccharide.
The gene product of dctD (DctD) activates transcription from the dctA promoter regulatory region by the $\sigma^{54}$ -holoenzyme form ofRNA polymerase ($E\sigma^{54}$ ) in Rhizobium meliloti and R. leguminosarum. The Escherichia coli integration host factor (IHF) stimulated DctD-mediated activation from the dctA promoter regulatory region of R. leguminosarum but not R. meliloti. In the absence of UAS, IHF inhibited DctD-mediated activation from both of these promoter regulatory regions. IHF also inhibited activation from R. leguminosarum dctA by nitrogen regulatory protein C (NtrC), another activator of $E\sigma^{54}$ but not by one which lacks a specific binding site in this promoter regulatory region. IHF, however, stimulated NtrC-mediated activation from the R. meliloti dctA promoter. Upon removal of the UAS, IHF inhibited NtrC-mediated transcription activation from the R. meliloti dctA promoter regulatory region. These data suggest that IHF likely faciliates productive contacts between the activators NtrC or DctD and $E\sigma^{54}$ to stimulate activation from dctA promoter.
Rhizobium fredii USDA191 은 대기 중의 질소를 환원하여 식물체의 생육에 필요한 질소원을 공급해주는 세균으로 다량의 체외 다당류를 합성한다. 전위요소 Tn5의 삽입에 의한 돌연변이 유도로 다당류결핍 변이주 R. fredii YKL293 가 분리되었으며 이 변이주로부터 Tn5 에 인접한 DNA 단편이 pUC19 에 클로닝되었고(plyk5293),이 DNA 단편을 탐침으로 하여 .lambda.NM1149 에 구성되 USDA191 genomic library 로부터 야생형체외다당류 합성관련 유전자(exo) 를 함유한 클론 .lambda. NM1149 22E 를 plaque 혼성화에 의하여 분리하였다. 클론 NM1149.22E 에 들어있는 exo 유전자를 pBR322 에 옮겨서 pJW33을 만들고, 재조합체 pJW33 을 Escherichia coli POII734 에 도입시켜 lacZ 구조유전자를 함유한 MudI 1734 가 exo 유전자의 프러모토와 융합되어 lacZ 구조유전자의 전사가 이루어지도록 하였다. 위와 같이 만들어진 재조합체 플라스미드 pUM21을 함유한 E. coli JM83 은 .betha.-galactosidase 를 합성하였으며, 야생형 tacZ 유전자를 갖고 있는 E. coli LE392 에 비해서 14-25배 정도 낮은 역가를 보였다.
From the plasmid pYA300 carring a CMCase of Rhizobium fredii USDA193 plasmid was subcloned into pBluescript II KS(+)/pBluescript II SK(+) vectors and designated pYA500 and pYA600, respectively. Escherchia coli cells transformed with pYA500 porduced the CMCase more than with pYA600. The orientation of the cloned fragment in pBluescript vector had the effect on gene expression in E. coli background. When the 1.7 kb CMCase gene fragment of R. fredii USDA193 was hybridized to EcoRI-digested total DNA from R. meliloti and R. fredii USDA 191 the unique bands hybridized respectively, indicating that some genetic diversity exists in the EcoRI restriction enzyme site for CMCase gene in Rhizobium strains. The optimum pH of enzyme activity was 7 and the optimum temperature of that was nearly 37$\circ$C. The cellulase-minus derivatives of pYA500 were constructed by Tn5 insertional mutation. Among 6000 transconjugants, two mutant plasmids (designated pYA500::Tn5a and pYA500::Tn5b) were detected from the cellulase- negative transconjugants. The product of CMCase gene was analyzed by one dimensional SDS- PAGE of the cell extracts. About 45 kDa protein was considered to be a product of CMCase gene.
Fifteen Rhizobium spp. from nodules of 6 common pulses collected from 6 districts of Assam were studied for their infectivity, intrinsic antibiotic resistance, nitrogenase activity and effect of dual inoculation with two native Arbuscular Mycorrhizal Fungi viz. Glomus mosseae(GM) and Gigaspora gilmarie(GG). Out of the 15 isolates 9 were found nodulation positive and 6 of them(AR1, BR8, BR12, AR10, UR10 & GR21) were subjected to intrinsic antibiotic sensitivity test of which AR1 showed resistance against all the 9 test antibiotics. Isolates AR1 and GR21 showed the highest(4.25 mole, $gm^{-1}hour^{-1}$) and the lowest(1.05 mole, $gm^{-1}hour^{-1}$) nitrogenase activity respectively. In Most Probable Number count, the maximum Rhizobium population $5.8{\times}10^5$, was found in both Blackgram and Greengram variety of pulses. The maximum dry weight of nodules(3.14 g), dry weight of shoot(10.08 g), nitrogen content(7.68 mg, $plant^{-1}$), chlorophyll content(1.89 mg, $g^{-1}$), phosphorus content of shoot(6.17 mg, $g^{-1}$) and yield(535.67 kg, $Ha^{-1}$) were found when AR1 dually inoculated with GM in Blackgram.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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