• 제목/요약/키워드: reproductive isolation

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인간 배아줄기세포로부터 분화된 세포에서 MACS 방법을 이용하여 분리한 세포의 특성에 대한 연구 (Characterization of MACS Isolated Cells from Differentiated Human ES Cells)

  • 조재원;임천규;신미라;방경희;궁미경;전진현
    • Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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    • 제33권3호
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    • pp.171-178
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    • 2006
  • 목 적: 인간 배아줄기세포는 재생 의학이나 조직공학에 있어서 큰 잠재적인 능력을 가지고 있는 것으로 알려져 있다. 이들은 다양한 growth factors 처리나 유전자 발현을 변화시켜 특정 세포로 유도 분화 및 분리가 가능하지만 그 효율성은 아직까지 낮은 상태이다. 본 연구에서는 인간 배아줄기세포로부터 비특이적으로 분화된 세포들을 특정 세포 표면 항체를 이용한 magnetic cell sorting (MACS) 방법으로 분리, 배양하여 그들의 특성을 살펴보았다. 연구방법: 미분화 배아줄기세포주(Miz-hESC4)를 물리적인 방법으로 계대 배양하였으며, 부유 배양법으로 배아체 형성을 유도하였다. 배아체의 자발적인 분화를 위해 DMEM에 10% FBS를 첨가하여 2주 동안 배양하였다. 이렇게 분화된 세포들을 CD34, human epithelial antigen (HEA), human fibroblast (HFB)에 대한 항체를 이용한 MACS system으로 각각의 항체에 대한 양성 또는 음성 세포를 분리하였다. 이러한 MACS 분리 세포를 4주 동안 배양하면서 형태적인 변화를 관찰하고 특이 유전자의 발현 양상을 분석하였다. 결 과: 분리 배양한 CD34 양성 세포들은 배양 초기에는 둥근 형태를 나타내다가 배양 후기에는 작은 다각형의 형태로 관찰되었으며, HEA 양성 세포들은 큰 다각형의 형태를 나타내었고, HFB 양성 세포들은 전형적인 방추체 형태로 관찰되었다. 특이 유전자에 대한 RT-PCR 결과에서, CD34 양성 세포들과 HFB양성 세포들에서는 내배엽과 중배엽 관련 유전자의 발현하는 것을 확인할 수 있었고, HEA 양성 세포들에서는 외배엽 관련 유전자인 NESTIN과 NF68KD의 발현을 관찰할 수 있었다. 배양기간이 경과함에 따라 CD34 양성 세포의 특이 유전자 발현 양상이 변화되었다. 결 론: 이상의 결과는 비특이적으로 분화된 인간 배아줄기세포로부터 특이 세포를 MACS 방법을 이용하여 성공적으로 분리할 수 있음을 보여주었다. 따라서, MACS 방법과 특이 세포에 대한 항체는 인간 배아줄기세포의 유도 분화와 특이 세포의 분리에 매우 유용할 것으로 생각된다.

남성에서 Mycoplasma 감염이 정액검사소견에 미치는 영향에 관한 연구 (The Effects of Mycoplasma Infection on Semen Parameters (in Normal Human Semen))

  • 김선행;김영호;김탁;허준용;박용균;구병삼
    • Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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    • 제23권3호
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    • pp.311-318
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    • 1996
  • Mycoplasmas have long been suspected of contributing to involuntary infertility in couples. However considerable disagreement exits concerning the role of genital mycoplasma infection in human infertility. Several investigators have noted abnormalities in the semen analysis of men with positive mycoplasma cultures, and early epidemiologic studies indicated that Ureaplasma urealyticum was linked to human reproductive failure on the basis of higher frequencies of isolation from infertile versus fertile couples and successful pregnancies in infertile couples after doxycycline therapy. However, subsequent investigators have questioned these findings because there are many studies in which treatment for mycoplasma in the male or female did not demonstrate an improved pregnancy rate, and semen samples from unexplained infertile men containing ureaplasmas have not revealed poorer motility, fewer spermatozoa and more aberrant forms. The objective of this study were to investigate the incidence rate of mycoplasma in semen and to investigate whether the presence of mycoplasma in semen makes significant difference to the semen volume, sperm motility and sperm counts. The results were that the rate of isolation of mycoplasma species was 70.3%. Semen volume is $2.84{\pm}1.01ml$ for culture negative and $3.15{\pm}1.42ml$ for culture positive group. Sperm motility is $46.23{\pm}15.80%$ for culture negative and $50.09{\pm}15.69%$ for culture positive group, and sperm count is $95.47{\pm}47.14({\times}(P)10^6/ml)$ for culture negative and $86.73{\pm}47.59({\times}10^6/ml)$ for culture positive group. In conclusion, we suggest that the presence of mycoplasma in semen makes no significant differences to the sperm parameters.

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밀어속(genus Rhinogobius, Gobiidae) 어류의 계통분류학적 연구II. 한국산 밀어(R. brunneus complex) 3型의 분포 및 분류학적 고찰 (Systematic studies on the freshwater goby, Rhinogobius species (Percifromes, Gobiidae). II. BEographic distribution and taxonomic status of three color types in the Rhinogobius brunneus complex from South Korea.)

  • 김종범;양서영
    • Animal Systematics, Evolution and Diversity
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    • 제12권4호
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    • pp.331-347
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    • 1996
  • 한국산 밀어(R. brunneus complex)에 대한 지리적 변이 및 분포를 조사한 결과 반 문 및 체색 등에 뚜렷한 차이가 있는 3type이 채집되었다. 이들은 유전적으로도 typerks에 총 genome의 26-30%(A-B type : 30%, A-C type : 30%, B-C type : 26%) 차이가 있어 유전적 근연치(Rogers' S)가 S=0.628-0.661(A-B type : 0.631, A-C type : 0.628, B-C type : 0.661)로 뚜렷한 유전적 차이를 나타냈다. 각 type의 유전적 변이 정도를 비교한 결과 A-type은 평균 P=25.90%, Ho=0.081, He=0.092로 B-type(P=12.33%, Ho=0.037, He=0.044)과 C-type(P=11.10%, Ho=0.032, He=0.048)에 비하여 약 2배 이상 높은 특징을 보였다. 이들 3 type의 분류학적 위치를 명확히 구명하고자 3type이 모두 서식하는 고성의 북천에서 유전적 표식인자를 이용하여 각 typerks의 생식적 격리 수준을 분석하였다. 이들 3 type은 동서(同 棲)하천에서 하구로부터의 거리에 따라 parapatric 하게 서식하면서 각 typerks에 유전자 교 환이 전혀없었다. 이러한 결과로부터 3type은 이미 생식적 격리가 완성되고 미세분포역에 차이가 있는 별종으로 판단되었다.

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Albumin density gradient 방법에 의한 고활력 우정자 분리시의 정자두부크기의 비교관찰 (Effect of Isolation by Albumin Density Gradients on Head's Size of Bovine Sperm)

  • 김명철;조충호;정순오
    • Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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    • 제11권2호
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    • pp.69-76
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    • 1984
  • In order to obtain high proportion of Y sperm the semen was laid over 6%,10% and 20% bovine serum albumin. Separated sperm were stained with quinacrine mustard in order to see F - body which could be seen in human Y sperm. But we could'nt find F-body in the bull sperm. So sperm were compared with size of sperm head. As a result of observation separated sperm was small in size of length and width of sperm head as compared with control sperm. So it was found that the proportion of Y sperm showed a marked increase in separated layer. Then the higher albumin density was, the higher the proportion of Y sperm which had smaller head and faster motility was. But the higher albumin density was, the lower the recovery rate of sperm was. So it was hard to separate Y sperm in oligospermia.

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Sexual reproduction of the soft coral $Dendronephthya$ $castanea$ (Alcyonacea: Nephtheidae)

  • Hwang, Sung-Jin;Song, Jun-Im
    • Animal cells and systems
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    • 제16권2호
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    • pp.135-144
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    • 2012
  • $Dendronephthya$ $castanea$ Utinomi, 1952 is a member of the family Nephtheidae, and dominates shallow waters adjacent to the southern part of Jejudo Island, Korea. This species is a gonochoric internal brooder with a sex ratio of 1:1, and releases planulae around the time of the full and new moon from July to September, when the seawater temperature peaks. The gametogenic cycle is annual, and oogenesis (12 months) is longer than spermatogenesis (4-5 months). No difference in reproductive features including sexuality, sex ratio, gametogenesis and gametogenic cycles was found between the sympatric species $D.$ $castanea$ and $D.$ $gigantea$, and there was no temporal reproductive isolation. Investigation of the morphological taxonomy and molecular biology of these species indicates that they have very similar or identical traits, suggesting an absence of speciation and a need for taxonomic reclassification.

팥나방(Matsumuraeses phaseoli)과 어리팥나방(M. falcana)의 종간 교잡과 접합후 생식격리 (Interspecific Hybridization between Matsumuraeses phaseoli and M. falcana (Lepidoptera: Tortricidae) and Postzygotic Reproductive Isolation)

  • 정진교;박창규;문중경;김은영;조점래;서보윤
    • 한국응용곤충학회지
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    • 제58권4호
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    • pp.305-311
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    • 2019
  • 동소동속종인 팥나방(Matsumuraeses phaseoli)과 어리팥나방(M. falcana)(나비목: 잎말이나방과) 사이에 교잡 가능성을 알아보기 위해서 실험실에서 인위적으로 두 종을 교잡시켰다. 두 종의 암수를 교차하여 교미시켰을 때, F1 잡종세대가 발생하였다. 두 잡종세대 집단을 집단 내 및 집단 간 암수를 교차하여 교미시킨 경우들에서, 팥나방 암컷과 어리팥나방 수컷이 교잡되어 생성된 F1 잡종세대 집단(H집단)의 암컷이 같은 집단의 수컷 혹은 다른 집단의 수컷과 교미되었을 때, F2 후대를 거의 생성하지 못했다. 다른 집단으로 만들어진 F2 세대는 집단 내 교미에서 F3 세대를 생성시켰다. F1 잡종세대 집단 암수와 팥나방 혹은 어리팥나방 암수를 각각 교차하여 교미시킨 역교잡 8개 집단 중에서도 H집단의 암컷과 짝지어진 어미세대 수컷 집단 2개는 전혀 산란하지 못했다. 후대가 생성된 다른 6개 집단은 모두 집단 내 암수 교미에서 역교잡 F2 세대를 생성하였다. 이 결과는 팥나방 암컷과 어리팥나방 수컷이 교미하였을 경우 F1 후대잡종을 생성할 수 있으나, 이 F1 후대잡종 암컷은 불임이 되는 것을 나타냈다. 결과적으로 두 종 사이에 접합후 생식단계에서 부분적인 생식격리가 발생할 수 있는 것을 나타냈다.

Comparison of respiratory pathogenesis of porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates in vitro and in vivo

  • Park, Bong-kyun;Collins, James E.;Goyal, Sagar M.;Joo, Han-soo
    • 대한수의학회지
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    • 제39권2호
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    • pp.318-326
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    • 1999
  • Respiratory pathogenic effects of several porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV) isolates were examined in swine tracheal ring(STR) cultures by examining their effect on ciliary activity. One high and one low pathogenic PRRSV isolates were then selected and their pathogenicity investigated in 3-week-old conventional PRRSV-seronegative pigs. Ten pigs each were inoculated intranasally with the high or low pathogenic PRRSV isolate and 6 pigs were sham inoculated as negative controls. Two pigs each from the inoculated group and one pig each from negative control group were killed on 4, 7, 14, 21 and 28 days postinoculation(pI). At necropsy, degrees of gross lung lesion was determined. Turbinate, tonsil, trachea and lung samples were collected for virus isolation or histopathology. Gross lung lesions were observed mainly on 14 days PI with high and low pathogenic isolates inducing moderate diffuse and mild gross lung lesions, respectively. Inoculation of either the high or low pathogenic virus resulted in loss of cilia in ciliated epithelium of turbinates and trachea between 7 and 28 days PI. High pathogenic virus caused increased number of Goblet cells in the tracheal epithelial layer between 4 and 21 days PI whereas the low pathogenic virus did it between 14 and 28 days PI and with a lesser degree. Although both viruses produced interstitial pneumonia, the lesion was less severe with the low pathogenic virus. The isolation of high pathogenic virus from tissues and sera was earlier and more consistent than that of the low pathogenic virus. The agreement between in vitro and in vivo tests indicates that STR cultures may be used as a routine method to determine the respiratory pathogenicity of PRRSV isolates.

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비정상 포배기 배아에서 인간 배아줄기 유사 세포의 분리 및 배양에 관한 연구 (Isolation and Culture of Human Embryonic Stem-like Cells from Abnormal Blastocysts)

  • 임천규;성지혜;박종혁;김선종;윤현수;궁미경;전진현
    • Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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    • 제30권4호
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    • pp.293-298
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    • 2003
  • 목 적: 인간의 배아줄기세포는 전분화능과 영속성을 가지고 있어 발생 및 분화에 관련된 기초 연구 뿐 만 아니라 재생의학, 약물검색 등에서도 매우 유용한 재료로 이용될 수 있다.본 연구에서는 유전체의 변형이 배아줄기세포주의 확립 효율에 미치는 영향을 살펴보고자 비정상적인 포배기 배아에서 내세포괴를 분리하여 배양하였다. 연구 방법: 인간의 체외수정 및 배아이식술에서 공여 받은1개 또는3개의 전핵이 관찰되는 비정상 수정란 (n=20)과 착상전 유전진단에서 이수성이 확인된 배아 (n=27)를 대상으로 하였다. 일반적인 immunosurgery 방법으로 영양배엽세포들을 제거하고 내세포괴를 분리한 후 PMEF 혹은 STO feeder 세포위에서 배양하였다. 배아줄기세포의 배양시스템을 검증하기 위해서 이미 확립된 Miz-hES1 cell line을 동시에 같은 조건 하에서 계대배양하였다. 결 과: 비정상 수정란에서 발생된 포배기 배아에서 분리한 1개의 내세포괴가 배아줄기세포와 유사한 colony를 형성하였으나, 계대배양에는 실패하였다. 이수성 배아에서 발생된 포배기 배아의 내세포괴 배양에서는 두개의 colony가 계대배양 중에 영양배엽세포의 형태로 분화되어 미분화 상태를 유지하지 못하였다. 동일한 시기와 조건 하에서 계대배양된 Miz-hES1 cell line이 미분화상태로 유지됨을 karyotyping (46, XY)과 immunophenotyping (positive in SSEA-3 and -4)으로 확인하였다. 결 론: 본 연구의 결과에서 비정상 수정란과 이수성 배아에서 발생된 포배기 배아에서 유래한 내세포괴는 배아줄기세포주 확립 및 미분화 상태 유지 능력이 매우 저조한 것으로 여겨진다. 따라서, 인간의 배아줄기세포주를 확립하는데 있어 배아의 정상여부가 중요한 요소로 작용할 것으로 생각된다.