• 제목/요약/키워드: repetitive polypeptide

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Microchip상에서 효율적인 DNA 분석을 위한 반복단위 단백질의 생산 (Production of Repetitive Polypeptides for an Efficient DNA Analysis on a Microchip)

  • 이현진;최석진;서태석;원종인
    • KSBB Journal
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    • 제25권2호
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    • pp.199-204
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    • 2010
  • Drag-tag으로 사용될 반복단위 단백질을 생물학적인 방법을 통해 생산함으로써 수용액 내에서 DNA 분리가 가능함을 확인하였다. 서로 다른 크기를 갖는 두 종류의 반복단위 단백질을 디자인하였고, 이를 발현시킨 뒤 정제하였다. 정제된 반복단위 단백질에 형광 dye를 포함하고 있는 100 base의 DNA를 연결하였고, 이 연결 물질을 모세관 내부가 수용액으로 충진된 microchip 상에서 전기영동 하였다. 그 결과 생물학적으로 생산된 반복단위 단백질이 SNP 분석과 같은 빠르고 효율적인 DNA 분석에 적합한 후보물질로 사용될 수 있음을 확인하였다.

Expression and Purification of an ACE-Inhibitory Peptide Multimer from Synthetic DNA in Escherichia coli

  • OH, KWANG-SEOK;YONG-SUNG PARK;HA-CHIN SUNG
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제12권1호
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    • pp.59-64
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    • 2002
  • An angiotensin I-converting enzyme (EC 3.4.15.1) (ACE), which can convert inactive angiotensin I into angiotensin II, a vasoconstrictor, is one of the key enzymes in controlling hypertension. It is suggested that the inhibition of ACE prevents hypertension, and many inhibitory peptides have already been reported. In the current study, oligonucleotides encoding ACE inhibitory peptides (IY, VKY) were chemically synthesized and designed to be multimerised due to isoschizomer sites (BamHI, BglII). The cloned gene named AP3 was multimerised up to 6 times in pBluescript and expressed in BL2l containing pGEX-KG. The fusion protein (GST-AP3) was easily purified with a high recovery by an affinity resin, yielding 38 mg of synthetic AP3 from a 1-1 culture. The digestion of AP3 by chymotrypsin exhibited an $IC_50$ value of $18.53{\mu}M$. In conclusion, the present experiment indicated that AP3 could be used as a dietary antihypertensive drug, since the potent ACE inhibitory activity of AP3 could be activated by chymotrypsin in human intestine.

담배식물체에서 필수아미노산인 lysyl-glutamyl-tryptophan을 암호화하는 인공유전자의 발현 (Expression of an artificial gene encoding a repeated tripeptide lysyl-g1utamyl-tryptophan in Tobacco Plant)

  • 이수영;나경수;백형석;박희성;조훈식;이용세;최장원
    • 생명과학회지
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    • 제12권1호
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    • pp.96-105
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    • 2002
  • 식물 단백질의 영양가 향상을 위한 일환으로 필수아미노산의 조성이 풍부한 인공단백질을 암호화하는 인공유전자를 담배 식물체에서 발현을 시도하기 위하여, 식물에서 외래유전자의 발현에 널리 사용되는 Cauliflower mosaic virus (CaMV)의 35S promoter를 이중으로 중첩되도록 하고, (Lys-Glu-Trp)이 64번 반복되는 인공유전자 및 nopaline synthase (nos) terminator를 갖고있는 binary vector pART4-4를 구성하였다. 이 재조합 플라스미드는 Agrobacterium tumefaciens를 이용한 형질전환에 의해 Nicotiann tabacum (Var. Xanthi)으로 도입되었다. Kanamycin이 포함된 신초 유도 배지 및 뿌리 유도배지를 이용하여 정상적으로 재생된 담배 식물체로부터 도입된 인공유전자의 발현을 분석하였다. 추출한 genomic DNA를 EcoRI으로 자른 다음 Southern blot 분석에 의하면, 효소 절단 시 예상되는 1.1 kb에서 band를 형성하였으며 각각의 형질전환 식물체에 인공유전자가 1 또는 3 개씩 도입되어 있음을 확인하였다. Northern blot 분석에 의하면 약 1.2 kb 전사체가 비교적 안정하게 발현되었으며, 잎, 줄기, 뿌리로부터 RNA를 분리하여 promoter의 조직 특이성 발현을 분석한 결과, 잎에서 생성되는 RNA가 줄기나 뿌리 조직보다 안정하게 발현되었다. 형질전환 식물체에서 Western blot에 의한 단백질 분석 결과, 잎에서 추출한 단백질로부터 원하는 크기인 33 kDa의 인공단백질이 생성됨을 확인하였으며 발현 수준은 전체 세포 단백질의 0.1%로서 낮은 수준이었다.