The raw starch hydrolysis by amylase prepared from alkaline-tolerant Bacillus sp. were investigated. Degree of hydrolysis(%) of 5%(w/v) raw rice, corn and potato starch by this enzyme were about 40, 25 and 20%, respectively. The hydrolysis action on raw starch by change of blue value was similar to the action pattern of exo ${\beta}$-amylase. The hydrolysis products of rice starch were mainly glucose and maltose. Oligosaccarides were also detected. From the above results, this enzyme was considered as exo type ${\alpha}$-amylase. This enzyme activity on the raw starch and the gelatinized starch were 28.40 and 86.60 IU/mg protein, respectively, and the ratio of raw starch-digesting activity to gelatinized starch-digesting activity (raw starch digestivity) was about 32%. The Km values for the raw and the gelatinized starch were 4.22 and 3.0mg/mL, respectively, and the VmaX values were 0.20 and 0.31mg/mL/min, respectively.
Production of cyclodextrin (CD) directly from raw corn starch without liquefaction using cyclodextrin glucanotransferase (CGTase) was carried out in an agitated bead reaction system. Similar CD yield and production rate comparable with those of conventional method using liquefied starch were obtained. Especially high purity-CD in the reaction mixture without accumulation of malto-oligosaccharides was obtained. The maximum 54g/l of CD was obtained at raw starch concentration of 200g/l. CD yield was inversely proportional to raw starch concentration, and conversion yield was 0.48 at substrate concentration of 100g/l. The optimal amount of enzyme (CGTase unit/g raw starch) was found to be around 6.0. Granular structure of raw starch degraded by CGTase was observed by SEM in order to investigate the enhancing mechanism, along with those of acid or alkali pretreated raw starch, amylose, and amylopectin. Kinetic constants of CGTase on raw starch in an agitated bead reaction system were evaluated, and CGTase was competitively inhibited by CD.
Two strains (No. 26 and 143) of bacteria which secrete both pectinase and raw-starch-digesting amylase simultaneously, were isolated from various domestic soil samples. The two bacteria were identified as Pasteurella ureae judging by their morphological and physiological characteristics. The optimal culture conditions for the production of raw-starch-digesting enzyme by the Pasteurella ureae 26 were using $NH_4NO_3$ as the nitrogen source at $37^{\circ}C$ with the pH of 7.5, and 15 of C/N ratio. Since the enzyme was produced only when raw or soluble starch was used as a carbon source, but not when glucose or other sugars was used, the enzyme was considered to be an inducible enzyme by starch. Thin layer chromatography of the hydrolyzed product of starch by the raw-starch-digesting enzyme of the strain No. 26 showed that glucose, maltose and other oligosaccharides were present in the hydrolyzates, and therefore the enzyme seemed to be ${\alpha}-amylase$. The enzyme had adsorbability onto raw com starch in the pH range of 3 to 9.
The possibility of the ethanol fermentation from raw cassava starch without cooking was investigated. Saccharification yield in the simultaneous saccharification-fermentation (SSF) system was compared with that in saccharification of raw cassava starch, using glucoamylase of Aspergillus shirousmi. Although the saccharification yield of raw cassava starch with 10 folds of the enzyme was 60% compared to cooked cassava starch, higher saccharification could be obtained by SSF This result is maybe due to the elimination of end product inhibition in saccharification of raw starch by glucoamylase. Final ethanol yield from raw cassava starch was about 88% under the condition of 3$0^{\circ}C$, 120 rpm shaking after 3 days in the SSF system.
The effect of alum$(Al{\cdot}K(SO_4)_2{\cdot}12H_{2}O)$ on the activity of raw starch-digesting enzyme produced by alkali-tolerant Bacillus sp. was investigated. In adding alum of 0.5%(w/w), activities of raw starch-digesting enzyme on the gelatinized and raw rice starches have not been inhibited. In case of adding alum of 5%(w/w), competitive and uncompetitive inhibition were observed for the gelatinized and raw rice starches, respectively. The inhibitory effect on the raw starch was much higher than that on the gelatinized starch.
These experiments were conducted to investigate the substrate specificity, the hydrolysis products on the various carbohydrates and the hydrolysis rate on the various raw starches of the two purified glucoamylase produced by Rhizopus oryzae. Both of the glucoamylases hydrolyzed amylose, amylopectin, glycogen, soluble starch, pullulan, maltose, maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, maltohexaose, maltoheptaose and maltooctaose, but did not act on ${\alpha}-cyclodextrin$, ${\beta}-cyclodextrin$, raffinose, sucrose and lactose. When the reaction mixture of glucoamylase and polysaccharides were incubated $37^{\circ}C$for 32 hours, glucoamylase I hydrolyzed amylopectin, soluble starch and amyloses completely, but hydrolyzing glycogen up to only about 88%. Glucoamylase II hydrolyzed the previous four polysaccharides up to about 100%. Both of the glucoamylases produced only glucose for various substrates and did not have any ${\alpha}-glucosyl$ transferase activity. Both of the glucoamylases hydrolyzed raw glutinous rice starch almost complety, wheras they acted on raw potato starch, raw green banana starch, raw arrow root starch, raw corn starch, raw yam starch and raw high amylose corn starch weakly. Glucoamylase II hydrolyzed raw starches at the higher rate than glucoamylase I.
Aspergillus niger was selected as a strain producing the potent raw starch hydorlyzing enzyme. These experiments were conducted to investigate the conditions of the glucoa- mylase production, the purification of the enzyme, some characteristics of the purified enzyme and hydrolysis rate on various raw starches such as com, rice, potato, glutinous rice, sweet potato, wheat and barley. The optimum cultural temperature and time for the enzyme production on wheat bran medium were $30^{\circ}C$ and 96hrs, respectively. The respective addition of yeast extract and nutrient broth on wheat bran medium increased slightly the enzyme production. The enzyme was purified by ammonium sulfate fractionation and DEAE-cellulose column chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 30.7u/mg-protein and the yield of enzyme activity was 25.8%. The purified enzyme showed a single band on polyacrylamide disc gel electrophoresis and its molecular weight was estimated to be 56,000 by SDS-polyacrylamide disc gel electrophoresis. The isoelectric point for the purified enzyme was pH3.7. The optimum temperature and pH were $65^{\circ}C$ and pH 4.0, respectively. The purified enzyme was stable in the pH range of pH 3.0-9.5 and below $45^{\circ}C$, and its thermal stability was slightly increased by the addition of $Ca^{2+}$. The purified enzyme was activated by $Co^{2+},\;Sr^{2+},\;Mn^{2+},\;Fe^{2+},\;Cu^{2+}$. Raw rice starch, raw corn starch, raw glutinous rice starch, raw sweet potato starch, raw wheat starch and raw barley starch showed more than 90% hydrolysis rate in 48hrs incubation. Even raw potato starch, most difficult to be hydrolyzed, showed 80% hydrolysis rate. The purified enzyme was identified as glucoamylase.
In order to find out the effect of low level of starch acetylation on physicochemical properties of potato starch, amylose content, digestibility of raw and gelatinized starch, thermal properties, pasting properties, and the swelling power of native and acetylated potato starches were measured. The amylose content was significantly lower in acetylated starch than in their counterpart native starches. Though a tendency in the decrease in digestibility of raw starch was observed with starch acetylation, acetylation did not alter the proportion of readily digestible starch (RDS), slowly digestible starch (SDS), and resistant starch (RS) of both raw and gelatinized potato starches. No clear increase in the swelling power was observed, however, the peak and onset gelatinization temperatures and the enthalpy required for starch gelatinization decreased with starch acetylation. Peak and breakdown viscosities were reduced due to acetylation of potato starch while final viscosity and set back were increased.
The synergistic effect of glucoamylase and a -amylase on the hydrolysis of raw corn starch in an agitated bead reaction system was studied by investigating the changes of sugar profiles, the granular structure, particle size distribution, and X-ray diffraction pattern of residual raw corn starch. The enzymatic hydrolysis of raw corn starch was greatly enhanced by synergistic effect of glucoamylase and $\alpha$ -amylase. Even though the sugar profiles were mainly determined by the mixing ratio of glucoamylase and $\alpha$-amylase; raw starch was mainly converted to glucose directly without accumulation of any significant amount of oligosaccharides. The cavity formation and fragmentation phenomena of raw corn starch granule subjected to enzyme reaction were analyzed by means of SEM and the particle size distribution. The X-ray diffraction pattern of raw starch was not changed at the initial stage of reaction but slightly changed at the late stage of hydrolysis, which may be caused by the preferential degradation of amorphous region by enzymatic reaction, not by the destruction of microcrystalline structure of raw corn starch.
Direct conversion of raw starch without liquefaction to maltose using maltose-forming fungal a-amylase (Fungamyl) was carried out in an agitated bead enzyme reactor (bioattritor). The reaction rate in bioattritor was comparable with conventional method which utilized liquefied soluble starch. Moreover the extent of maltose formation increased substantially compared with conventional method; from 150 g / I of raw starch, around 95 g/l of maltose was formed and 72% of maltose content in sugar mixture was achieved. Especially, pH influenced greatly not only on total sugar formation from raw starch in bioattritor but also on maltose content in sugar mixture. The optimal pH for maltose formation from raw starch was shifted into the weak alkaline pH, the optimal pH of 8.0~9.0 in bioattritor contrast to pH of 5.0~5.5 for liquefied starch. The maltose formation and content were also affected by the amounts of Fungamyl added and raw starch concentration. Consumption of maltose-forming Fungamyl can be substantially reduced by supplementary addition of starch liquefying a-amylase (Termamyl).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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