Huang, Chang-Yi;Nixon, Peter F.;Duggleby, Ronald G.
BMB Reports
/
제32권1호
/
pp.39-44
/
1999
Pyruvate decarboxylase (PDC) catalyzes the conversion of pyruvate to acetaldehyde as the penultimate step in alcohol fermentation. The enzyme requires two cofactors, thiamin diphosphate (ThDP) and $Mg^{2+}$, for activity. Zymomonas mobilis PDC shows a strong preference for pyruvate although it will use the higher homologues 2-ketobutyrate and 2-ketovalerate to some extent. We have investigated the effect of mutagenesis of valine 111 and leucine 112 on the substrate specificity. V111 was replaced by glycine, alanine, leucine, and isoleucine while L112 was replaced by alanine, valine, and isoleucine. With the exception of L112I, all mutants retain activity towards pyruvate with $k_{cat}$ values ranging from 40% to 139% of wild-type. All mutants show changes from wild-type in the affinity for ThDP, and several (V111A, L112A, and L112V) show decreases in the affinity for $Mg^{2+}$. Two of the mutants, V111G and V111A, show an increase in the $K_m$ for pyruvate. The activity of each mutant towards 2-ketobutyrate and 2-ketovalerate was investigated and some changes from wild-type were found. For the V111 mutants, the most notable of these is a 3.7-fold increase in the ability to use 2-ketovalerate. However, the largest effect is observed for the L112V mutation which increases the ability to use both 2-ketobutyrate (4.3-fold) and 2-ketovalerate (5.7-fold). The results suggest that L112 and, to a lesser extent, V111 are close to the active site and may interact with the alkyl side-chain of the substrate.
To determine the role of pyruvate dehydrogenase complex (PDHC) in Klebsiella pneumoniae, the growth and metabolism of PDHC-deficient mutant in glycerol-based medium were analyzed and compared with those of other strains. Under aerobic conditions, the PDHC activity was fourfold higher than that of pyruvate formate lyase (PFL), and blocking of PDHC caused severe growth defect and pyruvate accumulation, indicating that the carbon flux through pyruvate to acetyl coenzyme A mainly depended on PDHC. Under anaerobic conditions, although the PDHC activity was only 50% of that of PFL, blocking of PDHC resulted in more growth defect than blocking of PFL. Subsequently, combined with the requirement of CO2 and intracellular redox status, it was presumed that the critical role of PDHC was to provide NADH for the anaerobic growth of K. pneumoniae. This presumption was confirmed in the PDHC-deficient mutant by further blocking one of the formate dehydrogenases, FdnGHI. Besides, based on our data, it can also be suggested that an improvement in the carbon flux in the PFL-deficient mutant could be an effective strategy to construct high-yielding 1,3-propanediol-producing K. pneumoniae strain.
한국응용약물학회 2002년도 창립10주년기념 및 국립독성연구원 의약품동등성평가부서 신설기념 국재학술대회:생물학적 동등성과 의약품 개발 전략을 위한 국제심포지움
/
pp.236-236
/
2002
Pyruvate dehydrogenase phosphatase (PDP) is a mitochondrial protein serine/threonine phosphatase that catalyzes the dephosphorylation and concomitant reactivation of the pyruvate dehydrogenase componant of the pyruvate dehydrogenase complex (PDC). PDP consists of a Mg$\^$+2/ -dependent and Ca$\^$+2)-stimulated catalytic subunit (PDPc) of Mr 52,600 and a FAD-containing regulatory subunit (PDPr) of Mr 95.600. Catalytic subunit of pyruvate dehydrogenase phosphatase (PDPc) has been suggested to have three major functional domains such as dihydrolipoamide acetyltransferase(E$_2$)-binding domain, regulatory subunit of PDP(PDPr)-binding domain, and calcium-binding domain. In order to identify functional domains, recombinant catalytic subunit of pyruvate dehydrogenase phosphatase (rPDPc) was expressed in E. coli JM101 and purified to near homogeneity using the unique property of PDPc: PDPm binds to the inner lipoyl domain (L$_2$) of E$_2$ of pyruvate dehydrogenase complex (PDC) in the presence of Ca$\^$+2/, not under EGTA. PDPc was limited-proteolysed by trypsin, chymotrypsin, Arg-C, and elastase at pH7.0 and 30$^{\circ}C$ and N-terminal analysis of the fragment was done. Chymotrypsin, trypsin, and elastase made two major framents: N-terminal large fragment, approx. 50kD and C-terminal small fragment, approx. 0 kDa. Arg-C made three major fragments: N-terminal fragment, approx. 35 kD, and central fragment, approx. 15 kD, and C-terminal fragment, approx. 10 kD. This study strongly suggest that PDPc consists of three major functional domains. However, further study should be necessary to identify the functional role.
생활 폐기물 매립장 침출수에 의해 오염된 지하수에 포함되어 있는 유기산($C_1-C_6$ aliphatic carboxylic acids)들의 정량 분석을 위해서 짧은 분석시간 안에 무기 음이온 뿐만 아니라 유기산까지 정량이 가능한 ion-exchange chromatography를 이용하여 침출수에 용존되어 있는 유기산을 정성 정량하였고, 검출된 유기산의 특성을 평가하였다. 분석 과정에서 $Cl^$, $Br^-$ 등의 halide 이온들의 유기산에 대한 피크 간섭을 줄이기 위해서 이들을 제거하는 전처리를 시료 주입 전에 적용하였다. 음이온 분석과 동일한 분석조건에서 음이온의 간섭을 최소화 하면서 정량이 가능한 유기산들을 선별하였고, 이들 유기산 중에서 음이온의 간섭을 받지 않는 fomate, acetate, propionate, pyruvate, succinate, oxalate에 대해서 정량 분석을 실시하였다. 본 실험에 사용된 유기산의 linear dynamic range는 0.5 mg/L에서부터 20 mg/L까지로 결정하였다. 이 분석법을 쓰레기 매립지 침출수와 주변 지하수에 대해 용존된 유기산과 무기 이온의 정량에 적용하여 높은 농도의 pyruvate와 낮은 수준의 formate와 acetate가 검출되었다. 지하수의 pyruvate 농도는 $Cl^-$, $HCO_3^-$ 농도와 높은 상관성을 보이고, 매립지에서 멀어질수록 농도가 감소하여, pyruvate는 매립지 침출수로부터 유래되었다고 추정되었다.
에탄올 생산 세균 Zymomonas mobilis에서 에탄올 생산 경로의 핵심으로 작용하는 효소인, pyruvate decarboxylase(pdc) 유전자의 불활성 실험을 통해, PDC 활성이 50% 감소된 PDC 활성 변형균주가 분리되었다. 이러한 균주들의 에탄올 탄소대사 흐름이 고부가가치 화합물인 피루브산, 숙신산 및 젖산 등으로 전환되는지를 발효 실험을 통해 평가하였다. 하지만 pdc의 발현을 중지시키기 위해 cat-삽입형-pdc와 pdc-결손형 아형 유전자를 전기천공법을 이용해 야생형 균주 ZM4의 염색체에 이식하기 위한 다수의 시도에도 불구하고, 이러한 방법을 통해 분리된 균주들은 대부분 부분적 유전자 불활성 특성을 보였으며, PDC 활성이 완전히 손실된 삭제 돌연변이 균주를 획득할 수는 없었다. PDC활성이 변형된 돌연변이 균주의 발효 실험에서, 야생형 균주와 비교 시 감소된 PDC 효소 활성의 변화로 인해 기질 흡수율과 에탄올 생산율이 감소되어 피루브산 생산이 약 2.5 g l-1 정도로 증가함을 확인하였으나, 젖산과 숙신산의 생산에 현저한 농도 변화를 보이지 못했다. 이러한 결과는 Z. mobilis의 산화환원 에너지가 PDC 효소 활성에 의한 에탄올 생산 경로에 전적으로 의존하여 발생한다는 것을 암시하였다. 상기 결과를 토대로 pdc 유전자의 완전한 불활성 유도와 산화환원 에너지의 균형은, 젖산 생산을 위한 lactate dehydrogenase, 숙신산 생산을 위한 pyruvate dehydrogenase와 malic enzyme과 같은 효소의 활성 증가를 통해, 세포내 NAD와 NADH 농도의 산화환원 균형이 이루어져야 발생할 수 있음을 시사하였다.
Biodegradative threonine dehydratase was purified to homogeneity from Serratia marcescens ATCC 25419 by streptomycin sulfate treatment, Sephadex G-200 gel filtration chromatography followed by AMP-Sepharose 4B affinity chromatography. The molecular weight of the purified enzyme was 118,000 by fast protein liquid chromatography using superose 6-HR. The enzyme was determined to be a homotetrameric protein with subunit molecular weights of 30,000 by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. The enzyme was inhibited by ${\alpha}-Keto$ acids and their derivatives such as ${\alpha}-ketobutyrate$, pyruvate, glyoxlyate, and phosphoenol pyruvate, but not by ${\alpha}-aminobutyrate$ and ${\alpha}-hydroxybutyrate$. The inhibition of the enzyme by pyruvate and glyoxylate was observed in the presence of AMP. The inhibitory effect of glyoxylate was decreased at high enzyme concentration, whereas the inhibition by pyruvate was independent of the enzyme concentration. The kinetics of inhibition of the enzyme by pyruvate and glyoxylate revealed a noncompetitive and mixed-type inhibition by the two inhibitors with respect to L-threonine and AMP, respectively.
본 연구는 단순배양체계내 소 난포란의 성숙에 요구된는 탄수화물 (glucose, lactate와 pyruvate)을 검토하기 위해 수행하였다. GV(germinal vesicle) 단계의 난구세포로 둘러싸인 소 난자를 단백질, 아미노산 및 호르몬이 첨가되지 않은 modified Tyrodes (mT)에서 24시간, 5% $CO_{2}$ 배양기를 이용하여 성숙배양하였다. Glucose 무첨가군 (0-61%)에 비해 5.6mM의 glucose 첨가군 (71-74%)이 유의적으로 높은 (P<0.05) M-II단계로의 난자 발육을 나타내었다. Glucose를 함유한 배지내에서는 lactate(10mM0와 pyruvate(0.5mM)의 첨가에 따르는 M-II 단계로의 발육에 있어 차이를 보이지 않았다. 그러나 glucose 무첨가 배지에서는 pyruvate와 lactate를 첨가하는 것이 첨가하지 않은 것에 비해 condensed GV(76%vs. 0-2%), M-II, (43-61%vs. 0%)단계에 이른 난자수가 유의적으로 높았다. Glucose 함유 mT배지에 lactate와 pyruvate를 첨가하여 난자를 배양하였을 때, 동결융해 정자와 24시간 정치한 후 난자중 87-93%가 정자침투되었고 39-44%가 전핵단계로 발육하였다. 침투난자의 26-30%는 다정자수정이었다. 결론적으로, GV 단계의 소 난포란은 에너지원으로 lactate, glucose와 Pyruvate를 이용하지만, 감수분열 성숙을 유지하는데 glucose가 가장 효과적이다. 이 결과들로 보아 단순배양배지는 소 난포란의 체외성숙에 영향을 미치는 다양한 물질들을 연구하는데 잠재적으로 유용하다.
This study was carried out to analyze the metabolic flux of W. kimchii sk10 on pyruvate and ethanol as a carbon source. The sk10 grown on ethanol produced acetate under aerobic conditions rather than under anaerobic conditions. The lactate and acetate were produced on ethanol plus pyruvate by the sk10 grown under aerobic and anaerobic conditions, respectively. The resting cell of sk10 produced 99.1 mM acetate and 17.3 mM lactate under aerobic conditions and 51.1 mM acetate and 62.4 mM lactate under anaerobic conditions from ethanol plus pyruvate, respectively. This result is thought to be due to the difference in the $NADH/NAD^+$ ratio depending on the growth conditions. The 11-fold overproduction of NADH peroxidase results in a low $NADH/NAD^+$ratio under aerobic growth conditions. At the low $NADH/NAD^+$ ratio, the metabolic flux of pyruvate toward lactate has to be shifted to a flux toward acetate without NADH oxidation to $NAD^+$, and ethanol oxidation to acetate coupled to $NAD^+$ reduction to NADH has to be activated.
Kim, Dong-Hyun;Lee, Jae-Ho;Bae, Eun-Ah;Han, Myung-Joo
Archives of Pharmacal Research
/
제18권5호
/
pp.351-355
/
1995
The fecal tryptophanase activities were $0.267{\pm}0.10$ for rats and $0.185{\pm}0.01{\;}{\mu}mole/min/g$ wet feces for humans. The activities of indole pyruvate degradation to indole, indole pyruvate lyase, of these feces were $0.051{\pm}0.02$ and $0.046{\pm}0.01{\;}{\mu}mole/min/g$ wet feces, respectively. The optimal pH values of tryptophanase and indole pyruvate lyase were 5.5-7.5 and 5.5-6.5, respectively. When the intestinal flora or E. coli HGU-3 was cultured in GAM broth having six different pH values (5 to 10), the activities of tryptophanase and indole pyruvate IYilse in the medium adjusted at pH 6 were dramatically induced by elevating the pH to 9. However, when intestinal microflora were inoculated in the medium containing lactulose, the pro¬ductions of these enzymes were dramatically inhibited and the pH of the medium was lower than that of the control.
To investigate the metabolism of various substrates in preimplantation bovine embryos, uptake of glucose and pyruvate, and lactate production were measured in single IVF-derived bovine embryos by a non-invasive method. When the embryos were incubated for 5 h in culture medium supplemented with 1 mM glucose and 0.4mM pyruvate as substrates at each developmental stage, glucose uptake was increased with more advanced developmental stages while pyruvate uptake was decreased. Total lactate producton of 2-cell embryos was significantly higher than that of blastocysts (p<0.05). Both of glucose uptake and lactate production in normal morulae produced in vitro was significantly high compared to the degenerated embryos(p<0.05). The results obtained in the study suggest that pyruvate as an exogenous substrate may be support in bovine embryos until 8-cell stage, whereas glucose may be effective as an energy source after morula stage. In addition, it was proven thatlactate was not effective as an energy source in preimplantation development of IVF-derived bovine embryos.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.