본 실험은 pseudorabies 바이러스 (PRV) 의 Bartha strain 을 안면신경의 측두지, 하지를 지배하는 신경 (좌골신경) 및 상지를 지배하는 신경 (요골, 척골, 정중신경) 에 주입한 후 4 일간의 생존시간이 경과한 후 척수와 뇌를 적출하여 동결절편을 제작한 후 면역조직화학적 염색기법과 X-gal 조직화학 염색법을 시행하여 염색된 신경세포체를 척수와 뇌에 투사된 공통영역을 관찰하고 두침의 영역중 하나인 운동구와 사지와의 관계에 대한 실험적 증거를 제시하고자 시행하였다. 위의 실험에서 얻어진 결과는 아래와 같다. 1. 안면신경의 측두지, 하지를 지배하는 신경 (좌골신경) 및 상지를 지배하는 신경 (요골, 측골, 정중신경) 에서 투사된 공통된 영역은 척수에서 경수의 층판 1-IV, 흉수의 intermediolateral nucleus(IML), dorsal nucleus(D) 및 층판 X, 요수의 층판 IV, V, 천수의 층판 IV, V, IX, X 등의 영역에서 관찰되었고, 뇌줄기에서는 caudoventrolateral reticular nucleus(CVL), nucleus solitary tract(Sol), rostroventrolateral nucleus(RVL), area postrema(AP), raphe nuclei(raphe pallidus, raphe obscurus, raphe magnus), inferior olivary nucleus 의 등쪽부분 (gigantocellular reticular nucleus, Gi), Kolliker-Fuse nucleus(KF), central gray(CG), dorsal raphe nucleus (DR) and A5 영역에 표지된다. 또한 paraventricular hypothalamic nucleus(PRV) 와 lateral hypothalamic reticular nucleus(LH)에서도 관찰되고 locus coeruleus(LC) 와 subcoeruleus nuc!eus(SubCA) 에서도 관찰된다.
Mohd Lila Mohd Azmi;Zeenathul, Nazariah-Allaudin;Abdel-Wahid Saeed Ali;Che Abdul Rahim Mohamed;Kamarudin, Awag-Isa
Journal of Microbiology
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제40권1호
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pp.1-10
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2002
At the dose of 1000 p.f.u. per mouse,100% mortality occurred in mice inoculated with wild-type pseudorabies virus (PrV). In contrast, upon stable deletion of 10 bp nucleotides at the Bsrl site within the TK gene, PrV was rendered to be completely apathogenic. The deletion also caused the virus to be less capable of replicating in respiratory as well as in nervous system tissues. Although animals were exposed to high titers of TK-deleted PrVs, the virus failed to replicate to a high titer as compared to the pathogenic parental virus. In contrast to previous studies the deletion in the TK gene did not prevent the virus from establishing latency. Upon immunosuppression, the latent virus? however, reactivated but replicated at low titers. Interestingly, TK-deleted virus established latency and reactivation, that are occurred only in trigeminal ganglia and the cerebrums and no other tissues involved. Following reactivation, there was no indication of virus shedding in respiratory tissues as confirmed by virus isolation and polymerase chain reaction (PCR) technique targeting at the gB gene of PrV, The non-pathogenic virus with non-shedding characteristics, upon reactivation of the latent virus, would be the important feature of a live virus vaccine candidate.
Yun, Bit Na Rae;Gwak, Won Seok;Lee, Ji Hoon;Woo, Soo Dong
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제35권2호
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pp.118-122
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2017
Porcine pseudorabies virus (PRV) causes the Aujeszky's disease (AD) which is economically important disease in the swine industry worldwide. Killed or live vaccines have been used to control this disease, but their efficacy and side effects remain problems to be solved. To solve these problems, in this study, production of recombinant PRV glycoprotein gB, gC and gD was investigated in insect expression system. Glycoprotein gB, gC and gD are regarded as the major immunogenic antigens in PRV. Abundant production and immunogenicity of glycoprotein gB, gC and gD were confirmed by SDS-PAGE and Western blot analysis, respectively. Optimal infection dose and time were also determined for the production of each recombinant PRV glycoprotein. Confirmation of glycosylation of recombinant gB, gC and gD suggested their usefulness as antigens for the development of diagnosis kit or vaccines for Aujeszky's disease.
목적: 전방십자인대 내에 기계적 수용체의 존재가 밝혀지면서 전방십자인대는 신경근육의 조절에 관여하는 기능이 있는 것으로 추측되어왔다. 하지만, 기계적 수용체의 존재에도 불구하고 전방십자인대의 말단 신경수용체로부터 대뇌피질까지의 구심성 체성감각신경로는 아직 명확히 밝혀지지 않았다. 강력한 신경친화성 표지자이며 신경연접을 건너 분열, 확산하는 pseudorabies virus(PRV)를 이용하여 전방십자인대의 구심성 체성감각신경로를 추적하고자 하였다. 대상 및 방법: PRV를 쥐의 전방십자인대에 주입한 후 약 6-7일간 신경엽접을 건너 확산하도록 허용한 후 각각의 쥐를 희생, 관류하였다. 대뇌와 척수를 체부로부터 분리하여 면역화학적으로 처리한 후 PRV의 존재여부를 확인하였다. 결과: PRV에 면역 활성화된 신경세포는 척수로부터 대뇌피질에 이르기까지 여러 위치에서 발견할 수 있었다. 특히, 뇌관의 망상활성계의 중뇌망상핵, 대뇌세포망상핵, 부거대세포망상핵, 거대세포망상핵에서 강한 양성표지반응을 보였다. 결론: 쥐의 전방십자인대의 신경말단은 척수, 뇌관 및 대뇌피질로 투사된다. 또한, 전방십자인대에 분포하는 신경말단으로부터의 대뇌피질로의 구심설 신경로에서 망상활성계가 중요한 역할을 담당할 것으로 추측된다.
Objective: The neuroanatomical studies on the acupoints(Waiguan(SJ5), Neiguan(Pe6), Sanyinjiao(SP6) and Xuanzhong(GB39)) projecting to the brain area related to dimentia using the pseudorabies virus (PRV-Ba strain) in the mouse was described. Methods: The common locations of the brain projecting to the Waiguan, Neiguan, Sanyinjiao and Xuanzhong following injection of PRV-Ba were histochemically observed. The results were as follows Results : 1. PRV-Ba labeled areas in medulla oblongata, pons and midbrain were similar to 4 acupoints, theses areas were related to autonomic center. 2. PRV-Ba labeled areas in diencephalon and cebrebrum were differently labeled according to the acupoints. 3. CNS labeled areas in Waiguan were dense labeled in CA1-3 area of hippocampus, amygdaloid nucleus, insular cortex, parietal cortex, entorhinal cortex, perirhinal cortex, dorsal endopiriform cortex, piriform cortex, amygdalopiriform transition and bed n. of stria terminalis. 4. CNS labeled areas in Neiguan were dense labeled in insular cortex, amygdaloid nucleus, parietal cortex, entorhinal cortex, perirhinal cortex, dorsal endopiriform cortex, piriform cortex, amygdalopiriform transition and bed n. of stria terminalis. 5. CNS labeled areas in Sanyinjiao were dense labeled in CA1-3 of hippocampus, suprachiasmatic n., dorsal endopiriform cortex, piriform cortex and bed n. of stria terminalis. 6. CNS labeled areas in Xuanzhong were dense labeled in suprachiasmatic n., dorsal endopiriform cortex and piriform cortex. Conclusions : Following these results, labeled acupoints in brain areas related to dimentia are Waiguan and Neiguan. Common labeled areas are amygdaloid n., entorhinal cortex, amygdaopiriform transition, bed n. stria terminalis and perirhinal cortex.
중추신경계의 미주신경동쪽핵(DMV)내 유사핵분열후 신경세포로 외래 유전자를 전달하는 매개체로서 pseudorabies 바이러스(PRV)의 유전자 조작기술은 흰쥐의 결장내로 PRV를 주입시킨 후 복잡한 신경로 추적에 관한 연구에서 하나의 바이러스에 의해 얻어지는 것보다 더욱 유용한 결과산출이 가능하게 하였다. 본 연구에서는 흰쥐의 생체내 실험모델로 하나의 바이러스 또는 이중 바이러스 주입에 PRV의 유전자 조작된 2종 바이러스를 사용하였다. 이 2종의 바이러스는 PRV의 Bartha 종에서 유래되었지만 면역조직화학적으로 검출할 수 있는 동일한 유전산물을 산출할 수 있도록 구성되었다. PRV-BaBlu는 PRV 게놈의 Us 구역 중 gC 자리에 lacZ 유전자를 삽입하여 산출되었는데 $\beta-galactosidase$ 발현은 이 바이러스에 감염된 신경원의 독특한 표시자로 나타났다. PRV-D는 2가지 단계에 의해 조성되었는데 첫째, PRV-Bartha의 Us 구역의 일부 유전자를 제거하고, 야생형인 PRV-Be DNA로 복구시켰는데 이로써 PRV-D는 PRV-Bartha 또는 PRV-Bablu에 존재하고 있지 않는 외피 당단백질인 gE와 gI를 지니게 되었다. 본 연구의 결과는 다음과 같았다. 첫째, PRV-D의 개별적 접종에 의해 얻어진 감염은 PRV-BaBlu에 의한 동일 신경회로의 감염보다 유의하게 빨랐다. 둘째, 유전자 조작된 PRV의 변이종은 변이종 상호간 및 부모 바이러스와 상이하였다. PRV-D는 PRV-Bartha 또는 PRV-BaBlu보다 감염독성이 더 강했고, PRV-BaBlu는 PRV-Bartha보다 감염독성이 약했다. 셋째, 결장을 지배하는 미주신경동쪽핵내 신경원은 변이종 바이러스들을 동시에 접종하였을 경우 이중감염을 나타내었다.
Constructions of a transfer vector and a recombinant baculovirus using the thymidine kinase gene of the Herpes simplex virus type 1 strain F (HSV -1) were carried out. Newly cloned transfer vector, pHcgXIIIB, was constructed by insertion of the glycoprotein gX gene signal peptide sequence of Pseudorabies virus into the baculovirus vector pHcEV-IV. The gX sequence was inserted just downstream from the promoter for the polyhedrin gene of the Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus (HcNPV). HSV-1 thymidine kinase(tk) gene (1.131 kb) was used as a candidate gene for transferring into the baculovirus expression system. The tk gene was inserted into a BamHI site downstream from the gX sequence-promoter for the polyhedrin gene in the pHcgXIIIB transfer vector and was transferred into the infectious lacZ-HcNPV expression vector. Recombinant virus was isolated and was named gX-TK-HcNPV. The recombinant virus produced a 45 kDa gX-TK fusion protein in Spodoptera frugiperda cells, which was confirmed by Western blot analysis. Microscopic examination of gX-TK-HcNPV-infected cells revealed normal multiplication. Fluorescent antibody staining indicated that the gX-TK fusion protein was present in the cytoplasm. These results indicated that the transfer vector successfully transferred the gX-tk gene into the baculovirus expression system.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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